一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌对烟草病害的防治方法技术

本发明专利技术公开了一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌对烟草病害的防治方法，包括以下步骤：生物炭制备，制备固化菌剂，生物炭盆栽防病实验。在本发明专利技术的盆栽实验中，添加最佳搭载生物炭菌剂的防治效果达79.55％，防治效果好，在烟草黑胫病的生物防治方面具有潜在的应用价值，发展和应用前景良好。

A Control Method of Tobacco Diseases by Bacillus subtilis Based on Biocharcoal

【技术实现步骤摘要】
一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌对烟草病害的防治方法
本专利技术涉及一种烟草病害防治方法，尤其涉及一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌在烟草病害防治中的应用。
技术介绍
烟草是一种重要的经济作物，烟草黑胫病是世界各烟草种植区的重要病害之一。目前对黑胫病的控制仍然以化学药剂为主，从而导致病原菌抗药性增强、环境污染及烟叶重金属含量超标等后果，影响防治效果、生态安全和人类健康。烟草属于吸食性产品，随着人们对环境与健康的日益重视，减少农药使用，促进安全优质的烟叶生产，对改善农业生态环境具有重要意义。生物防治对环境友好，在某些情况下防治效果优于化学药剂，特别是在病害发病高峰期常伴随高温多雨，化学药剂难以发挥作用，因此，生物防菌剂的开发较为重要。目前，枯草芽孢杆菌已经应用在烟草黑胫病防治中，但是单一的枯草芽孢杆菌的防治效果有待提高。
技术实现思路
本专利技术克服了现有技术的不足，提供一种防治效果较好的方法。一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌对烟草病害的防治方法，包括以下步骤：S1生物炭制备：取粉碎后的植物茎杆，在300℃-500℃条件下，反应5h，制备生物炭，粉碎研磨，过筛备用；S2制备固化菌剂：S201称取S1中制备的生物炭1g，放在50ml离心管种，加入菌悬液20ml，振荡吸附24h；S202取出后，离心，弃上清液；S203用0.85％的生理盐水洗涤S202中的下层离心固体，然后离心5min，重复洗涤2次，再离心后获得固定化菌剂；S3生物炭盆栽防病S301将酸化土与黑胫菌谷混合，添加S203中获得的固定化菌剂，设置对照组；S302盆栽试验前，植盆栽试验第0、10、15、20d，测定土壤理化性质，理化性质指标包括：全氮含量、碳氮比、碱解氮含量、速效磷含量、速效钾含量、pH、电导率；S303接种后每第0、10、15、20d，以株为单位，调查黑胫病发病情况，计算病情指数和相对防治效果，其中，病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100相对防治效果＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100；S304盆栽后第0、10、15、20d，取烟苗根际土，采用实时荧光定量PCR技术检测烟草黑胫病菌在烟草根际变化规律。进一步包括，步骤S201中，振荡吸附的方法是将锥形瓶置于摇床中，振荡吸附的条件为：室温，振荡速度175r/min。进一步包括，步骤S202中，离心条件为2500r/min离心10min。进一步包括，步骤S304中，根据NCBI数据库中烟草黑胫病菌的18SrDNA基因序列设计荧光定量PCR特异引物SP：5'-TGAAGAACGCTGCGAACTGC-3'，AP：5’-CTGACATCTCCTCCACCGACTA-3'，扩增目的片段长度为172bp。进一步包括，在步骤S1中，制备生物炭是，过60-100目筛。本专利技术解决了
技术介绍
中存在的缺陷，本专利技术具备以下有益效果：1.在本专利技术的盆栽实验中，添加最佳搭载生物炭菌剂的防治效果达79.55，防治效果好，在烟草黑胫病的生物防治方面具有潜在的应用价值，发展和应用前景良好。2.生物防治对环境友好、不易产生抗药性、对人畜安全，为烟草绿色防控发展创造条件。附图说明图1是生物炭灰分含量柱状图；图2是生物炭全氮含量柱状图；图3是生物炭全碳含量柱状图；图4是生物炭碳氮比柱状图；图5是300℃制备的生物炭电镜结构图；图6是400℃制备的生物炭电镜结构图；图7是500℃制备的生物炭电镜结构图；图8是不同温度下制备的生物炭吸附效果图；图9是300℃制备的生物炭在电镜下的负载效果图；图10是400℃制备的生物炭在电镜下的负载效果图；图11是500℃制备的生物炭在电镜下的负载效果图；图12是不同菌剂速效磷的效果柱状图；图13是不同菌剂速效钾的效果柱状图；图14是不同菌剂碱解氮的效果柱状图；图15是不同菌剂全氮的效果柱状图；图16是不同菌剂碳氮比的效果柱状图；图17是荧光定量结果图；图18是标准曲线图；图19不同处理植株根际土烟草黑胫病目的基因片段拷贝柱状图。具体实施方式现在结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明，这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本专利技术的基本结构，因此其仅显示与本专利技术有关的构成。实施例11.生物炭制备：取粉碎后的植物茎杆，在300℃条件下，反应5h，制备生物炭，粉碎研磨，过60目筛备用，得到C300；2.制备固化菌剂：称取S1中制备的生物炭1g，放在50ml离心管种，加入菌悬液20ml，将锥形瓶置于摇床中，振荡吸附的条件为：室温，振荡速度175r/min，振荡吸附24h；取出后，离心(离心条件为2500r/min离心10min)，弃上清液；用0.85％的生理盐水洗涤S202中的下层离心固体，然后离心5min，重复洗涤2次，再离心后获得固定化菌剂TB300；3.生物炭盆栽防病将酸化土与黑胫菌谷混合，添加S203中获得的固定化菌剂，设置对照组；盆栽试验前，植盆栽试验第0、10、15、20d，测定土壤理化性质，理化性质指标包括：全氮含量、碳氮比、碱解氮含量、速效磷含量、速效钾含量、pH、电导率；接种后每第0、10、15、20d，以株为单位，调查黑胫病发病情况，计算病情指数和相对防治效果，其中，病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100相对防治效果＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100；盆栽后第0、10、15、20d，取烟苗根际土，采用实时荧光定量PCR技术检测烟草黑胫病菌在烟草根际变化规律。根据NCBI数据库中烟草黑胫病菌的18SrDNA基因序列设计荧光定量PCR特异引物SP：5'-TGAAGAACGCTGCGAACTGC-3'，AP：5’-CTGACATCTCCTCCACCGACTA-3'，扩增目的片段长度为172bp。实施例21.生物炭制备：取粉碎后的植物茎杆，在400℃条件下，反应5h，制备生物炭，粉碎研磨，过60目筛备用，得到C400；2.制备固化菌剂：称取S1中制备的生物炭1g，放在50ml离心管种，加入菌悬液20ml，将锥形瓶置于摇床中，振荡吸附的条件为：室温，振荡速度175r/min，振荡吸附24h；取出后，离心(离心条件为2500r/min离心10min)，弃上清液；用0.85％的生理盐水洗涤S202中的下层离心固体，然后离心5min，重复洗涤2次，再离心后获得固定化菌剂TB400；3.生物炭盆栽防病将酸化土与黑胫菌谷混合，添加S203中获得的固定化菌剂，设置对照组；盆栽试验前，植盆栽试验第0、10、15、20d，测定土壤理化性质，理化性质指标包括：全氮含量、碳氮比、碱解氮含量、速效磷含量、速效钾含量、pH、电导率；接种后每第0、10、15、20d，以株为单位，调查黑胫病发病情况，计算病情指数和相对防治效果，其中，病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100相对防治效果＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100；盆栽后第0、10、15、20d，取烟苗根际土，采用实时荧光定量PCR技术检测烟草黑胫病菌在烟草根际变化规律。根据NCBI数据库中烟草黑胫病菌的18SrDNA基因序列设计荧光定量PCR特异引物SP：5'-TGAAGAACGCTGCGAACTGC-3'，AP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌对烟草病害的防治方法，其特征在于，包括以下步骤：S1生物炭制备：取粉碎后的植物茎杆，在300℃‑500℃条件下，反应5h，制备生物炭，粉碎研磨，过筛备用；S2制备固化菌剂：S201称取S1中制备的生物炭1g，放在50ml离心管种，加入菌悬液20ml，振荡吸附24h；S202取出后，离心，弃上清液；S203用0.85％的生理盐水洗涤S202中的下层离心固体，然后离心5min，重复洗涤2次，再离心后获得固定化菌剂；S3生物炭盆栽防病S 301将酸化土与黑胫菌谷混合，添加S203中获得的固定化菌剂，设置对照组；S302盆栽试验前，植盆栽试验第0、10、15、20d，测定土壤理化性质，理化性质指标包括：全氮含量、碳氮比、碱解氮含量、速效磷含量、速效钾含量、pH、电导率；S303接种后每第0、10、15、20d，以株为单位，调查黑胫病发病情况，计算病情指数和相对防治效果，其中，病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100相对防治效果＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100；S 304盆栽后第0、10、15、20d，取烟苗根际土，采用实时荧光定量PCR技术检测烟草黑胫病菌在烟草根际变化规律。...

【技术特征摘要】
1.一种基于生物炭的枯草芽孢杆菌对烟草病害的防治方法，其特征在于，包括以下步骤：S1生物炭制备：取粉碎后的植物茎杆，在300℃-500℃条件下，反应5h，制备生物炭，粉碎研磨，过筛备用；S2制备固化菌剂：S201称取S1中制备的生物炭1g，放在50ml离心管种，加入菌悬液20ml，振荡吸附24h；S202取出后，离心，弃上清液；S203用0.85％的生理盐水洗涤S202中的下层离心固体，然后离心5min，重复洗涤2次，再离心后获得固定化菌剂；S3生物炭盆栽防病S301将酸化土与黑胫菌谷混合，添加S203中获得的固定化菌剂，设置对照组；S302盆栽试验前，植盆栽试验第0、10、15、20d，测定土壤理化性质，理化性质指标包括：全氮含量、碳氮比、碱解氮含量、速效磷含量、速效钾含量、pH、电导率；S303接种后每第0、10、15、20d，以株为单位，调查黑胫病发病情况，计算病情指数和相对防治效果，其中，病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100相对防治效果＝(对照病情指数—处理病情指数)/对...

【专利技术属性】
技术研发人员：王杰，张成省，刘明宏，王耀晨，赵栋霖，邹平，袁源，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，贵州省烟草公司遵义市公司，
类型：发明
国别省市：山东,37