一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，属于动物模型技术领域。首先采用生理盐水溶解顺铂，制备2mg/mL的顺铂溶液；选择体重20±2g、12周龄的C57BL/6J小鼠作为建立小鼠模型的对象，将小鼠麻醉后，将顺铂溶液通过眶后静脉注射到小鼠体内，5天后，即获得顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型。本发明专利技术采用经眶后静脉注射顺铂成功构建了顺铂所致急性肾损伤模型，解决了现有技术中腹腔注射顺铂构建顺铂所致急性肾损伤模型中同时需要腹腔注射其他药物造成吸收率降低的问题。

Construction of a cisplatin-induced acute kidney injury model in mice

【技术实现步骤摘要】
一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法
本专利技术涉及一种顺铂所致急性肾损伤(cisplatin-induced-acutekidneyinjury,CDDP-AKI)的小鼠模型的构建方法，属于动物模型

技术介绍
顺铂(cisplatin，CP)是一种广泛应用于多种实体肿瘤的化疗药物，特别是头颈部恶性肿瘤，膀胱癌，食管癌，宫颈癌及肺癌的化疗。近年来CP还应用于“三阴性乳腺癌”的化疗。然而CP作为化疗药在临床上的使用常常会引起肾毒性，耳毒性，周围神经病变，骨髓抑制等一系列副作用，其中以肾脏毒性最为常见，约三分之一的患者在接受单剂量(50-100mg/m2)CP化疗后会出现急性肾损伤(acutekidneyinjury,AKI)，表现为进展性肾脏功能减退以肾小球滤过率降低，血清肌酐、尿素氮、血钾及血钠的升高为特征。在这些发生AKI的患者中50％的患者在经过治疗后的15天血肌酐仍然维持在较高水平，因此CDDP-AKI是重要的临床疾病模型。现有技术中，CDDP-AKI的小鼠模型多采用腹腔注射顺铂来构建，但在联合用药的情况下，多种药物同时腹腔注射则会存在药物吸收率降低的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中CDDP-AKI的小鼠模型存在的不足，提供一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，本专利技术首次采用眶后静脉注射顺铂成功构建了CDDP-AKI的小鼠模型，解决了腹腔注射顺铂构建CDDP-AKI模型中同时需要腹腔注射其他药物造成吸收率降低的难题。技术方案一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，包括如下步骤：(1)采用生理盐水溶解顺铂，制备2mg/mL的顺铂溶液；(2)选择体重20±2g、12周龄的C57BL/6J小鼠作为建立小鼠模型的对象，将小鼠麻醉后，将顺铂溶液通过眶后静脉注射到小鼠体内，5天后，即获得顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型。进一步，步骤(1)中，顺铂溶液的制备方法：称取50mg顺铂粉末于50mL离心管中，加入25mL生理盐水溶解，2800r/min的转速下涡旋震荡5min以充分溶解，然后在摇床上以80r/min的转速室温摇晃30min，最后经0.22μm细菌过滤器过滤除菌，得到顺铂溶液。进一步，步骤(2)中，小鼠的麻醉方法：采用小动物麻醉机，通过吸入异氟烷的方式进行麻醉。进一步，步骤(2)中，顺铂溶液的注射量按小鼠体重计，为7.5μL/g。进一步，步骤(2)中，在注射顺铂溶液前，将顺铂溶液预热至37℃。进一步，步骤(2)中，小鼠的饲养环境温度24±2℃，湿度40％-60％，自由饮水和采食。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术采用经眶后静脉注射顺铂成功构建了顺铂所致急性肾损伤模型，解决了现有技术中腹腔注射顺铂构建顺铂所致急性肾损伤模型中同时需要腹腔注射其他药物造成吸收率降低的问题。附图说明图1为小鼠眶后静脉注射的位置；图2为眶后静脉注射法实验组和对照组小鼠的血浆肌酐值；图3为腹腔注射法实验组和对照组小鼠的血浆肌酐值；图4为眶后静脉注射法实验组和对照组小鼠的肾脏组织的HE染色图；图5为腹腔注射法实验组和对照组小鼠的肾脏组织的HE染色图。具体实施方式下面结合附图和具体实施例来对本专利技术做进一步说明。值得说明的是，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。下述实施例中：实验动物：SPF级C57BL/6J小鼠6只×4，雌雄各半，体重20±2g，实验动物生产许可证：SCXK(苏)2016-0002，由南京医科大学动物房提供。饲养环境温度24±2℃，湿度40％-60％，自由饮水和采食。实验药物：顺铂，购自sigma，货号为P4394。实施例1一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，包括如下步骤：(1)制备2mg/mL的顺铂溶液：称取50mg顺铂粉末于50ml离心管中，加入25mL生理盐水溶解，以2800r/min的转速涡旋震荡5min以充分溶解，然后在摇床上以80r/min的转速室温摇晃30min，最后经0.22μm细菌过滤器过滤除菌，即得。将顺铂溶液分装于1.5mLEP管中1mL/管，锡箔纸包裹后储存于-20℃冰箱中。(2)取SPF级C57BL/6J小鼠(12周龄，体重20±2g)，分为眶后静脉注射法实验组、眶后静脉注射法对照组、腹腔注射法实验组以及腹腔注射法对照组4个组，其中，眶后静脉注射法实验组和腹腔注射法实验组注射顺铂，眶后静脉注射法对照组及腹腔注射法对照组注射等体积的生理盐水，每组纳入6只小鼠，雌雄各半，按如下方法处理：眶后静脉注射法实验组：称量小鼠体重，按7.5μL/g(小鼠体重)计算所需的顺铂溶液体积(按15mg/kg(小鼠体重)的剂量换算而成)，采用小动物呼吸麻醉机(美国SurgiVet公司，CDS9000型号)，通过吸入异氟烷的方式对小鼠进行麻醉，然后将顺铂溶液37℃水浴锅内预热后通过眶后静脉(所述眶后静脉注射的位置见图1，眶后静脉窦为注射点)注射到小鼠体内，然后将小鼠放回鼠笼休息，1min以内小鼠会麻醉后苏醒，自由活动，5天后，即获得顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型。眶后静脉注射法对照组：按7.5μL/g(小鼠体重)的量注射生理盐水，其余与实验组相同。腹腔注射法实验组组：按7.5μL/g(小鼠体重)的量腹腔静脉注射顺铂溶液。腹腔注射法对照组：按7.5μL/g(小鼠体重)的量腹腔静脉注射生理盐水溶液。将所有组别小鼠处死，留取血液及肾脏，测定血浆肌酐值，并对肾脏组织进行HE染色，眶后静脉注射法实验组和对照组小鼠的血浆肌酐值见图2(图2中，n＝6,**表示P＜0.01，差异有统计学意义)，腹腔注射法实验组和对照组小鼠的血浆肌酐值见图3；眶后静脉注射法实验组和对照组的小鼠的肾脏组织的HE染色图见图4(放大倍数×400倍，黑色箭头所指为管型所在处，白色箭头所指为扩张的肾小管)，腹腔注射法实验组和对照组的小鼠的肾脏组织的HE染色图见图5(放大倍数×200倍)。由图2、图3、图4和图5可以看出，本专利技术眶后静脉注射法实验组小鼠的血浆肌酐值较对照组相比显著升高，并且高于腹腔注射法的实验组，眶后静脉注射法实验组小鼠的肾脏组织的HE染色肾小管管型形成，肾小管扩张及坏死，达到AKI标准。对照组肾小管形态正常，无管型，无肾小管扩张及坏死。腹腔注射法实验组肾小管管型不明显，未见明显肾小管扩张及坏死。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采用生理盐水溶解顺铂，制备2mg/mL的顺铂溶液；(2)选择体重20±2g、12周龄的C57BL/6J小鼠作为建立小鼠模型的对象，将小鼠麻醉后，将顺铂溶液通过眶后静脉注射到小鼠体内，5天后，即获得顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型。

【技术特征摘要】
1.一种顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采用生理盐水溶解顺铂，制备2mg/mL的顺铂溶液；(2)选择体重20±2g、12周龄的C57BL/6J小鼠作为建立小鼠模型的对象，将小鼠麻醉后，将顺铂溶液通过眶后静脉注射到小鼠体内，5天后，即获得顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型。2.如权利要求1所述顺铂所致急性肾损伤的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，顺铂溶液的制备方法：称取50mg顺铂粉末于50mL离心管中，加入25mL生理盐水溶解，2800r/min的转速下涡旋震荡5min以充分溶解，然后在摇床上以80r/min的转速室温摇晃30min，最后经0.22μm细菌过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹长春，伍俊霞，万辛，李汶汶，
申请(专利权)人：南京医科大学附属逸夫医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32