王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用，本发明专利技术采用细胞模型及动物模型对王百合苷A类成分抗抑郁活性进行研究，试验结果表明：(1)王百合苷A对皮质酮损伤的SH‑SY5Y细胞具有较好的保护活性，其机制可能与抑制神经元细胞凋亡有关；(2)王百合苷A能明显缩短大鼠强迫游泳的不动时间和增加旷场实验自主运动的次数，表明王百合苷A具有较强的抗抑郁作用，从而为百合等药材的单体成分应用开拓了一个新的领域，应用前景广阔。

Application of Lilioside A in the Preparation of Antidepressants

【技术实现步骤摘要】
王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用
本专利技术涉及王百合苷A的应用，具体涉及王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用。
技术介绍
抑郁症是一种常见的心境障碍，可由各种原因引起，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，且心境低落与其处境不相称，严重者可出现自杀念头和行为。多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。世界卫生组织报道称全球范围内，共有超过3.5亿人患有抑郁症，到2020年抑郁症可能成为仅次于心脏病的第二大疾病。随着社会经济的快速发展，生活节奏加快，人们的压力增加，各种情感冲击加大，造成抑郁症的发病率逐年增高。抑郁症被称为二十一世纪的流行病”，其危害已越来越引起医药卫生界的重视。目前我国的抑郁症患者以轻、中度为主，国内多数的精神心理学家认为，单纯依靠心理治疗并不能解决轻中度抑郁症的困扰。而临床上抗抑郁药主要包括三环类、选择性五羟色胺(5-HT)再摄取抑剂、单胺氧化酶抑制剂等化学药物，这些药物的应用需要足量、足疗程的系统治疗，虽然对各种程度的抑郁症具有一定的治疗作用，但是也存在着不良反应较大的弊端，而我国多数的抑郁症患者对抗抑郁西药存在明显的抵触心理，造成了患者治疗依从性差，治疗脱落率高的局面。因此从中草药中寻找有效、安全的抗抑郁药已成为近年国内外研究的重要方向。王百合苷类为酚酸甘油苷类合物。近年来，酚酸甘油苷类成分的研究主要集中在对百合药材中王百合苷A、B、C、D等单体成分的化合物鉴定以及含量测定研究上，其药理作用研究极少，主要涉及抗氧化，清除自由基的药理作用等。然而，有关王百合苷A等单体成分在制备预防或和治疗抑郁症药物中的应用还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供王百合苷A在制备抗抑郁药物中的新用途。本专利技术提供王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用。本专利技术通过体内外试验对该成分的抗抑郁活性进行了研究，结果表明该王百合苷A药理作用清楚，抗抑郁功效强，可以在制备预防和治疗抑郁症的药物中应用。一种抗抑郁药物，由王百合苷A和药学上可接受的载体组成。所述的载体是聚乙二醇、植物油、淀粉、糊精、环糊精、各种化学修饰的环糊精、蔗糖等常规药物辅料中的一种或多种。所述药物的剂型是口服制剂、注射剂或局部给药制剂。所述的口服制剂是片剂、泡腾片、胶囊、脂质体、纳米微胶囊、硬胶囊、纳米口服液或微丸。所述的注射剂是注射液剂型或注射用冻干粉针剂型。所述的局部给药制剂是软膏剂、喷雾剂或贴剂。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术将王百合苷A用于抗抑郁症，并制备成预防、调理或治疗抑郁症的药物，从而为百合等中药材的单体成分应用开拓了一个新的领域；(2)本专利技术分别使用体内外试验，采用细胞模型及动物模型对王百合苷A抗抑郁活性进行研究，试验结果表明：a、王百合苷A对皮质酮损伤的SH-SY5Y细胞具有较好的保护活性，其机制可能与抑制神经元细胞凋亡有关；b、王百合苷A能明显缩短大鼠强迫游泳的不动时间和增加旷场实验自主运动的次数，表明王百合苷A具有较强的抗抑郁作用。附图说明图1为本专利技术王百合苷A对Cort诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用的结果图；图2不同药物处理组细胞内P-AKT/AKT相对水平的变化，其中，A：空白组(SH-SY5Y)，B：模型组(皮质酮400um)，C：模型+王百合苷A组。具体实施方式以下通过实施例来进一步描述本专利技术，应该理解的是，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不是限制本专利技术的保护范围。实施例1王百合苷A对皮质酮损伤SH-SY5Y细胞的保护作用研究1.1细胞培养SH-SY5Y细胞购自中国医学科学院药物研究所，从-80℃冰箱或液氮罐内取出需要复苏的细胞，置于提前预热的恒温水浴锅内37℃快速解冻，用移液器迅速将冻存管内的解冻后的细胞液移至事先准备好的含4mL含10％FBS、1％双抗(青霉素、链霉素)DMEM完全培养液的15mL离心管中，800r/min离心5min，弃去上清液，加入6mLDMEM完全培养液，混匀后将细胞液移至100mm培养皿或25cm培养瓶中，轻轻晃动培养皿或培养瓶，使细胞液均匀分散，置于含5％CO2，37℃及具有一定湿度的培养箱内培养。细胞培养3～4天传代1次。1.2实验方法1.2.1CCK-8法检测皮质酮诱导SH-SY5Y细胞损伤模型存活率将处于对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞用0.25％胰酶消化，加入含血清培养液终止消化，离心，去掉上清液，加新DMEM完全培养液重悬细胞，调整细胞密度为1.0×105个/孔，96孔板每孔加入100μL细胞悬液，置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h，吸弃每孔中培养液。设置正常组、模型组和4个给药组，每组设置4个副孔，除正常组加入无血清DMEM培养液外，其它组均加入含400μM皮质酮(corticosterone,Cort)的无血清DMEM培养液,置于培养箱中继续培养36h。除去每孔培养液，正常组和模型组加入无血清DMEM培养液，给药组分别加入含不同浓度待测药物的无血清DMEM培养液，每孔100μL，置于培养箱中培养48h。药物干预完成后，吸掉孔中培养基，每孔加入CCK-8溶液与DMEM培养液以1:10比例新鲜配制的显色液，培养板置于培养箱孵化1.5h后置于酶标仪上450nm处检测每孔OD值，以此计算细胞存活率，方法如下：细胞存活率(％)＝×100％实验结果显示，5～100μM王百合苷A作用48h均对皮质酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用，其中25μM时，细胞存活率达到94.29±23.9**％，其存活率明显高于模型组，接近于正常组细胞，与模型组比较具有统计学意义(P<0.01)。具体见表1。表1.王百合苷A对Cort诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用(x±S，n＝6)，48h与正常组比较△△△P<0.001；与模型组比较**P<0.01，*P<0.051.2.2王百合苷A对AKT，P-AKT蛋白表达的影响(蛋白与抑郁关系)第一步：样品制备1、用冰预冷PBS洗涤细胞一次，3000rpm离心2min，吸掉上清；加入200ulRIPA裂解液，反复吹打混匀；2、冰上，蛋白裂解10分钟；3、4℃，12000rpm离心15min(提前开离心机预冷)；4、将离心后的上清分装转移倒0.5ml的离心管中，部分用于实验多余的存于-20℃；第二步：蛋白浓度检测按照BCA蛋白定量试剂盒(Wellbio)使用说明操作，测定蛋白浓度。第三步：westernblot分别经过电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色曝光等步骤，再将曝光后的底片扫描，并用quantityone专业灰度分析软件进行分析。结果如图2所示：1.3实验结果1.3.1王百合苷A对皮质酮损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响王百合苷A对皮质酮损伤SH-SY5Y细胞的保护作用活性结果见图1、表1。与正常对照组相比，皮质酮单独给药模型组的细胞存活率为41.56±8.68△△△；王百合苷A给药组(5、15、25、50、75、100μM)使细胞的存活率分别增加到94.29±23.9**。结果表明，5～100μM的王百合苷A对皮质酮损伤的SH-SY5Y细胞均具有明显的保护作用，其中25μM的王百合苷A效果最好，达到了94.29±23.9*本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.王百合苷A在制备抗抑郁药物中的应用。2.一种抗抑郁药物，由王百合苷A和药学上可接受的载体组成。3.根据权利要求2所述的抗抑郁药物，其特征在于，所述的载体是聚乙二醇、植物油、淀粉、糊精、环糊精、各种化学修饰的环糊精、蔗糖常规药物辅料中的一种或多种。4.根据权利要求2-3任一项所述的抗抑郁药...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁志鹰，黄惠勇，吴华英，李静，夏帅帅，
申请(专利权)人：湖南中医药大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43