【技术实现步骤摘要】
Argonaute蛋白突变体及其用途
本专利技术涉及一种缺失DNA切割活性但具有DNA结合活性的基于野生型Argonaute蛋白(Ago)的突变体，以及基于该蛋白突变体的用途，尤其是在富集目标DNA以及构建测序文库中的用途。本专利技术还涉及包含所述蛋白突变体的试剂盒。
技术介绍
高效的富集目标区DNA，能够有效的降低测序成本、提高测序深度。对于通常情况下需要高深度测序应用，如体细胞突变检测，目标区富集的性能是决定其灵敏度和特异性的主要因素1。目前主流的目标区富集方法主要包括(1)多重引物扩增及(2)核酸探针杂交捕获法2。(1)基于多重引物扩增的目标区富集方法，利用数十至数千对引物同时在同一含有扩增酶的反应体系中扩增模板DNA中的目标序列，从而实现目标DNA富集的目的。但是引物之间的相互作用、目标序列之间的序列差异(如GC含量、能够形成二级结构等)会严重影响对目标序列扩增效率、均匀性及特异性。因此，随着目标区的增大，多重引物扩增的设计难度迅速增加，富集的效率通常情况也会相应降低。除此之外，常用的多重引物扩增方法，利用的是面对面的引物设计，待富集的目标片段的两端需为已...
【技术保护点】
1.一种Argonaute蛋白的突变体，其具有DNA结合活性但缺失DNA切割活性，其中所述突变体的突变位于PIWI结构域。
【技术特征摘要】
2018.03.06 CN 20181018468961.一种Argonaute蛋白的突变体，其具有DNA结合活性但缺失DNA切割活性，其中所述突变体的突变位于PIWI结构域。2.权利要求1所述的突变体，其中所述Argonaute蛋白来源于Marinitoga属、栖热孢菌属、火球菌属、甲烷球菌属、红杆菌属、产液菌属、古球状菌属或栖热菌属。3.权利要求1所述的突变体，其中所述Argonaute蛋白来源于激烈火球菌、嗜热栖热菌、詹氏甲烷球菌、Marinitogapiezophila、球形红杆菌、风产液菌、闪烁古生球菌或深海栖热孢菌。4.权利要求1所述的突变体，其中所述Argonaute蛋白的氨基酸序列选自SEQIDNO：1-8。5.权利要求4所述的突变体，其中所述突变体包括一个或多个选自以下位置的突变：-SEQIDNO：1的第558、596、628和745位氨基酸残基，以及位置与前述相当的氨基酸残基被取代，或-SEQIDNO：1的第628-770位氨基酸，以及位置与前述相当的氨基酸残基缺失。6.权利要求5所述的突变体，其中所述取代是被丙氨酸或谷氨酸取代。7.权利要求1所述的突变体，其中所述突变体进一步包括位于以下结构域的突变：N端结构域、PAZ结构域。8.权利要求1所述的突变体，其中所述突变体带有特异性标记。9.权利要求8所述的突变体，其中所述特异性标记是生物素标记。10.一种富集目标DNA的方法，包括以下步骤：(a)针对目标DNA中的特异性序列设计引导序列；(b)使根据权利要求1-9任一项所述的突变体、引导序列和目标DNA结合，获得突变体-引导序列-目标DNA三元复合物；(c)通过捕获介质捕获突变体-引导序列-目标DNA三元复合物；(d)从捕获的突变体-引导序列-目标DNA三元复合物中分离目标DNA，获得富集的目标DNA。11.权利要求10所述的方法，其中所述步骤(b)进一步包括以下步骤：(b1)使根据本发明的突变体与引导序列结合，获得突变体-引导序列二元复合物；(b2)使dAgo-引导序列二元复合物与目标DNA序列结合，获得突变体-引导序列-目标DNA三元复合物。12.权利要求10所述的方法，其中所述引导序列是RNA或DNA。13.权利要求10所述的方法，其中所述引导序列是单链RNA(ssRNA)或单链DNA(ssDNA)。14.权利要求10所述的方法，其中所述引导序列包含核苷酸修饰。15.权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：张建光，毛爱平，
申请(专利权)人：北京贝瑞和康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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