【技术实现步骤摘要】
一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
TDAR是B细胞接触T细胞依赖性抗原后产生的抗体反应，在Th2细胞的参与下并产生特异性抗体的一种免疫功能反应。近年来TDAR试验被认为是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验，通过人为引入外来抗原KLH并检测KLH特异性IgG抗体生成水平，反映待测物对免疫系统整体的影响，预测免疫功能的改变，并能对药物的免疫调节和免疫毒性特点进行早期预测，因此该方法在药物免疫毒理学研究中逐渐得到广泛应用。然而，传统的TDAR试验由于存在抗原特异差、操作复杂及变异性大等问题，导致该试验的特异性、灵敏性、精密性、重复性及可操作性等都存在很大缺陷。KLH(keyholelimpethemocyanin)KLH比SRBC具有性质稳定、易标准化和容易获得的优点，更适合作为T细胞依赖性抗原，与SRBC法相比变异性小，结果稳定。KLH做为特异性抗原的TDAR试验方法虽然有诸多优点，但目前也存在一些问题。首先灵敏性问题，不同的免疫剂量、免疫途径及周...
【技术保护点】
1.一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：包括试剂盒体、抗原蛋白KLH、包被抗原蛋白的酶标板、生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗、标准品KLH抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液、底物显色液A液、底物显色液B液和终止液；所述包被抗原蛋白的酶标板中，抗原蛋白KLH的包被浓度为80～85μg/mL；所述生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗的稀释倍率为1:16000～1:20000。
【技术特征摘要】
1.一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：包括试剂盒体、抗原蛋白KLH、包被抗原蛋白的酶标板、生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗、标准品KLH抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液、底物显色液A液、底物显色液B液和终止液；所述包被抗原蛋白的酶标板中，抗原蛋白KLH的包被浓度为80～85μg/mL；所述生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗的稀释倍率为1:16000～1:20000。2.根据权利要求1所述的一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液为每100ml含有BSA1g，NaCl0.8g，KCl0.02g，KH2PO40.024g，Na2HPO40.144g，其余为去离子水。3.根据权利要求1所述的一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤缓冲液为每100ml含有吐温-2050μL，NaCl0.8g，KCl0.02g，KH2PO40.024g，Na2HPO40.144g，其余为去离子水。4.根据权利要求1所述的一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：所述底物显色液A液为每100mL含有EDTA-2Na0.04g，柠檬酸0.19g，甘油10mL，TMB0.04g，溶媒为去离子水；所述底物显色液B液为每100mL含有醋酸钠2.72g，柠檬酸0.32g，30％H2O260μL，溶媒为去离子水。5.根据权利要求1所述的一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：所述终止液为浓度2mol/L的硫酸，溶媒为纯水。6.一种如权利要求1～5中任意一项所述的小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)取出包被抗原蛋白的酶标板，平衡至室温后去除外包装；(2)将标准品KLH抗体用样品稀释液依次稀释成1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200和1:6400八个梯度浓度；(3)将待检样品血清用样品稀释液稀释成1:400～1:800；(5)加样：加样前向包被抗原蛋白的酶标板中每孔加入200μL5％脱脂奶粉室温再次封闭1h，倒空液体，用洗涤液清板两次，包被抗原蛋白的酶标板设有空白孔、标准品孔、待测...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨照新，常鹏环，黄绵庆，黄凌，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：海南,46
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