一株产水链霉菌及其在生物防治中的应用制造技术

一株产水链霉菌(Streptomyces hydrogenans)，其保藏编号为：CGMCC No.17449。该产水链霉菌在生物防治中的应用，具体为在防治茄链格孢菌中的应用，包括：将产水链霉菌菌体进行活化，发酵培养，至菌体生长到对数生长期，停止发酵，所得发酵产物即为生防制剂；将所得生防治剂进行稀释，在植物幼苗移栽时用稀释液蘸根和/或幼苗长至4～5叶期时用稀释液灌根。本发明专利技术的应用可替代化学农药有效防治茄链格孢菌病害。本发明专利技术的生防制剂含有促生成分及有益微生物，可有效保护和促进根系生长，增强根系对不良环境及有害菌的抵抗能力；制剂中还含有抑制和杀灭茄链格孢菌的成分，能有效防治茄链格孢菌引起的植物真菌病害的发生。

Streptomyces aquaticus and its application in biological control

【技术实现步骤摘要】
一株产水链霉菌及其在生物防治中的应用
本专利技术涉及微生物及其应用，具体涉及一株产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)CGMCCNo.17449及其在生物防治中的应用。
技术介绍
茄链格孢菌(AlternariaSolani(EllisetMartin)Jonestetgrout)是易于侵染植物、引起植物发病的真菌之一，属于半知菌纲，链孢霉目、黑霉科、链格孢属。该真菌能引起许多重要作物病害，如马铃薯早疫病、梨黑斑病、甘蓝黑班病、烟草赤星病、苹果斑点落叶病、番茄早疫病等，严重影响这些经济作物的生产。目前，防治茄链格孢菌引起的病害的方法主要是使用化学农药。化学农药虽然具有适应面广、操作简易、作用迅速、效果显著，可以应急等优点；但化学农药却是一把双刃剑，它在促进农业发展的同量，给环境和生态造成了严重的污染，包括水质和土壤的酸化，地下和地表水资源的污染。对化学农药的过度依赖不但损害了生态系统的平衡，还加剧了病害的抗药性；由于农药使用不当而引起病害爆发次数也不断增加；同时，农产品中残留的农药还对人类健康也有不利影响。生物防治具有特异性强、毒性低、病原菌不易产生抗药性、对环境污染小、对人畜安全等优点，现已成为植物病害防治发展的一个重要方向。来自于微生物代谢产物的井岗霉素、农抗120、中生菌素、武夷霉素和浏阳霉素等新抗生素的使用，一定程度上推动了农业病害生物防治的发展，但现有这些生物农药无论是在种类、还是在数量上都远远不能满足农业生产的需要。据统计，目前我国生物农药仅占5％～7％的市场，许多重大植物病害缺乏相应的生物农药。因此，开发出更多的生物农药迫在眉睫。
技术实现思路
一株产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)，其保藏编号为：CGMCCNo.17449，此构成本专利技术的第一个方面。产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)CGMCCNo.17449在生物防治中的应用，此构成本专利技术的第二个方面。进一步的，其具体为：产水链霉菌在防治茄链格孢菌中的应用。进一步的，所述应用具体包括：S1：挑取适量所述产水链霉菌菌体进行活化，将活化好的菌体接种于液体培养基中进行发酵培养，至菌体生长到对数生长期，停止发酵，所得发酵产物即为生防制剂；S2：将所得生防治剂与水按1：2～10的体积比例进行稀释，得稀释液；S3：在植物幼苗移栽时用稀释液蘸根和/或幼苗长至4～5叶期时用稀释液灌根。进一步的，所述植物为番茄。进一步的，所述液体发酵培养基的组分为：蔗糖或淀粉4g、麦芽浸出粉10g、牛肉浸膏或大豆粉4g、蒸馏水1000mL，pH8.0-8.5。进一步的，所述发酵培养的培养条件为：28-30℃，140-160r/min条件下培养5-7d。上述应用中制备的生防制剂，此构成本专利技术的第三个方面。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一株产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)CGMCCNo.17449，其能用于防治茄链格孢菌；本专利技术的应用可替代化学农药有效防治茄链格孢菌病害；本专利技术的生防制剂含有促生成分及有益微生物，可有效保护和促进根系生长，增强根系对不良环境及有害菌的抵抗能力；制剂中还含有抑制和杀灭茄链格孢菌的成分，能有效防治茄链格孢菌引起的植物真菌病害的发生；本专利技术的生防制剂符合安全环保的生物防治理念，具有较好的社会效益和经济效益。本专利技术的菌种保藏日期为2019年3月26日，保藏编号为：CGMCCNo.17449。分类名称为：产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)，保藏单位名称为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101。附图说明图1为菌株KLBMP-3095的形态特征照片，其中，a为菌株在平板上形成的菌落形态，b为菌株基内菌丝形态，c为；显微镜下孢子丝形态图2平板对峙法测定菌株KLBMP-3095对茄链格孢菌的抑制作用照片；图3生长速率法测定菌株KLBMP-3095发酵液对茄链格孢菌的抑制作用照片，其中，a为对照组，b为添加发酵液组；图4菌株KLBMP-3095发酵产物对盆栽番茄幼苗的生防作用实验照片，其中，a为染病对照组，b为发酵液处理组。具体实施方式：实施例1在广东省肇庆市大南山林场，采集桉树根际土壤，通过常规方法分离、纯化获得一株菌株KLBMP-3095。该菌株在察氏培养基、酵母浸出粉-麦芽浸膏琼脂培养基(ISP2)、甘油天冬酰胺琼脂培养基上生长较好。气生菌丝和基内菌丝生长繁茂，成熟孢子丝形成的孢子链成串珠状，孢子为柱形，表面光滑无刺，具有链霉菌属的典型形态特征(图1)。测定该株菌的16SrRNA序列(SEQIDNo.1)，将此序列与EzTaxon数据库中的有效菌株进行比对，用MEGA5.01软件构建系统发育树，结合形态及培养特征、生理生化特性，鉴定其为产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)的一个菌株。实施例2菌株平皿对峙实验挑取保存于斜面管的茄链格孢菌接种在PDA平板的一侧，同时在另一侧接种菌株KLBMP-3095，置于28℃恒温培养箱中培养。重复三次，观察并记录两种菌在平板上生长的状态。如附图2所示。从图中可以看出，茄链格孢菌菌丝不能靠近菌株KLBMP-3095生长，说明菌株KLBMP-3095在平皿实验中能有效抑制茄链格孢菌生长。实施例3生长速率法测发酵液抑制茄链格孢菌生长实验在超净工作台中，从保种管挑取适量KLBMP-3095菌体进行活化，将活化好的菌体接种于液体培养基中。液体发酵培养基成分为：蔗糖4g、麦芽浸出粉10g、牛肉浸膏4g、蒸馏水1000mL，pH为8.0。28℃，150r/min，培养5d，至菌体生长到对数生长期，停止发酵。将发酵产物7800r/min离心10min，上清液用0.22μm的无菌滤膜过滤得无菌发酵液。待PDA培养基高压灭菌冷却至60℃时，按照培养基∶无菌发酵液＝9:1的比例混合并倒平板。将培养7d的病原菌的菌饼(直径4mm)接于平板中央，以无菌水替代无菌发酵液做对照，放置培养箱培养7d，测量病原菌菌落直径，计算抑菌率。每个处理做3个平行。结果如图3所示。按下述公式计算得其抑制率为73.8±2.5％。抑制率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-4mm)×100％实施例4菌株KLBMP-3095制剂对盆载番茄幼苗的防病作用在超净工作台中，从保种管挑取适量KLBMP-3095菌体进行活化，将活化好的菌体接种于液体培养基中。液体发酵培养基成分为：蔗糖4g、麦芽浸出粉10g、牛肉浸膏4g、蒸馏水1000mL，pH为8.0。(2)28℃，160r/min，培养5d，至菌体生长到对数生长期，停止发酵。(3)所得发酵产物即为生防制剂，使用时按1：5稀释。(4)供试植物选用番茄幼苗。首先播种番茄种子于育苗盘，待长出两片真叶，株高约3cm时移栽，移栽时用上述稀释液进行蘸根。待幼苗长出4-5片叶子时，用上述稀释液灌根一次，灌根用量为每株苗10mL。(5)灌根处理次日，用茄链格孢菌孢子液(浓度为400倍显微条件下每视野5-8个孢子)灌根一次，灌根用量为每株苗10mL；同时向叶面喷洒孢子悬液。以不进行KLBMP-3095发酵产物处本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株产水链霉菌(Streptomyces hydrogenans)，其保藏编号为：CGMCC No.17449。

【技术特征摘要】
1.一株产水链霉菌(Streptomyceshydrogenans)，其保藏编号为：CGMCCNo.17449。2.权利要求1中的产水链霉菌在生物防治中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，其具体为：所述产水链霉菌在防治茄链格孢菌中的应用。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，具体包括以下步骤：S1：挑取适量所述产水链霉菌菌体进行活化。将活化好的菌体接种于液体培养基中进行发酵培养，至菌体生长到对数生长期，停止发酵，所得发酵产物即为生防制剂；S2：将所得生防治剂与水按1：2～1...

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠秀云，姜素平，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32