【技术实现步骤摘要】
OLA和MQCA免疫亲和柱及其制备方法与应用
本专利技术涉及喹噁啉类化合物的检测，具体涉及喹乙醇和MQCA免疫亲和柱及其制备方法与应用。
技术介绍
民以食为天，食以安为先。随着人民生活水平的提高，人们对食品的安全要求越来越高。喹噁啉类化合物(Quinoxaline,QELs)是一类具有抗菌活性的物质,主要通抑制DNA合成达到抗菌作用，广泛应用于畜禽动物和水生动物疾病的防治，喹乙醇(Olaquindox,OLA)是该类药物的典型代表物质。世界卫生组织和世界粮农组织等已经确定OLA的残留标示物为MQCA(3-甲基喹喔啉-2-羧酸)。目前有关喹噁啉类药物及其代谢物残留检测的仪器分析方法比较多，如气相色谱质谱联用(GC–MS)、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱串联质谱联用(LC–MS/MS)。样品前处理主要包括目标物的提取分析和对目标物的分离净化，其中对OLA与MQCA进行有效的富集净化是质谱定量分析的关键。近年来，在净化步骤，新型材料得到了较为广泛的关注和应用。然而由于动物可食性组织中内源性物质多，常规的液液萃取不能有效排除这些物质的干扰，尤其是在使用LC－MS/M...
【技术保护点】
1.一种OLA和MQCA免疫亲和柱，其特征在于，包括位于上部的偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和位于下部的偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，二者以筛板隔开；所述固相介质为CNBr活化的Sepharose 4B。
【技术特征摘要】
1.一种OLA和MQCA免疫亲和柱，其特征在于，包括位于上部的偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和位于下部的偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，二者以筛板隔开；所述固相介质为CNBr活化的Sepharose4B。2.根据权利要求1所述的OLA和MQCA免疫亲和柱，其特征在于，所述免疫亲和柱中装填的所述偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质的厚度均为50mm。3.一种OLA和MQCA免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)基质制备：取适量溴化氰活化的琼脂糖干粉Sepharose4B用1mM盐酸使其溶胀，抽滤，使用1mMHCl洗涤；(2)偶联：使用偶联缓冲液(0.1mol/LNaHCO3,0.5mol/LNaCl,pH8.4)洗涤步骤1)溶涨后的经CNBr活化的Sepharose4B；洗涤后，迅速将CNBr活化的Sepharose4B分别转移到含有适量OLA单克隆抗体的偶联缓冲液中及MQCA单克隆抗体的偶联缓冲液中；混匀，柔和震荡反应；用所述偶联缓冲液分别洗去未偶联的OLA单克隆抗体、MQCA单克隆抗体，分别得到琼脂糖-OLA单抗偶联复合物和琼脂糖-MQCA单抗偶联复合物；(3)封闭活性基团：将所得琼脂糖-OLA单抗偶联复合物和琼脂糖-MQCA单抗偶联复合物分别转入0.1MTris-HCl缓冲液(pH8.0)中，封闭所有残留的活性基团；(4)洗涤：依次用0.1mol/L醋酸-醋酸钠，pH4.0内含0.5mol/LNaCl的缓冲液和0.1mol/LTris-HCl，pH8.0内含0.5mol/LNaCl的缓冲液分别洗涤步骤(3)所得琼脂糖-OLA单抗偶联复合物和琼脂糖-MQCA单抗偶联复合物；以除去偶联后未偶联上的多余的配体；洗涤后用用200mLPBS充分平衡，分别制得偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，待用；(5)装柱：下层装填偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，上层装填偶联有OLA单克隆抗体的固相介质。4.一种OLA和MQCA免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)基质制备：称取1g基质粉末，溶于5mL1mmol/LHCl中；基质将会立即溶胀，然后置于砂芯漏斗中使用1mmol/LHCl洗涤15min；使用大约1mmol/LHCl200mL，分次洗涤；(2)偶联：1；使用100mL偶联缓冲液(0.1mol/LNaHCO3,0.5mol/LNaCl,pH8.4)洗涤溶涨后的经CNBr活化的Sepharose4B，洗涤后，迅速将CNBr活化的Sepharose4B转移到30mL含有适量OLA或MQCA单克隆抗体的偶联缓冲液中；2；室温条件下采用end-over-end的方式充分混匀上述的混和物2h，或者在4℃下混匀过夜；也可以采用其他较为轻柔缓和的搅拌方法；3；在4...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢洁，龚晓云，翟睿，黄泽建，刘梅英，曾伟杰，江游，戴新华，方向，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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