【技术实现步骤摘要】
高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法以及相应的抗猪CD40试剂
本专利技术涉及一种高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法以及相应的抗猪CD40试剂。
技术介绍
在人体的获得性免疫应答中，CD40－CD40L之间的相互作用是T细胞与抗原呈递细胞间一个非常重要的共刺激通路。在动物疾病模型的研究中，需要使用猪来创建动物模型并进行相应的检测。CD40配体(CD40L)属于TNF(肿瘤坏死因子)家族的一员，是一个II型跨膜糖蛋白，主要表达在活化CD4+T细胞、一小部分CD8+T细胞和血小板上。CD40L可能以异源二聚体复合物的形式表达，并被金属蛋白酶从跨膜蛋白上分离下来。可溶性CD40L像细胞因子一样与CD40结合后，传递生物信号；通过与表达在抗原呈递细胞表面的CD40结合，启动抗原呈递细胞与T细胞之间的关键共刺激通路，激活抗原呈递细胞和T细胞，转化抗体亚型，并促进生发中心形成。此外，它们能够活化细胞毒性T细胞，降低免疫抑制，调节肿瘤细胞的生存并将与肿瘤相关性抗原呈递给免疫系统，在获得性免疫反应中起着重要的作用。目前，市面上已经有针对不同物种的CD40单克隆抗体(mAb)，但是在...
【技术保护点】
1.一种高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法，其中，所述抗猪CD40试剂设计方法包括：S1：在猪CD40L基因编码序列的氨基端和羧基端分别插入XhoI和BamHI酶切位点，在限制性内切酶的作用下获得带有XhoI、BamHI位点的第一段猪CD40L目的基因(基因序列I)；S2：以携带XhoI、BglII酶切位点的p40LBgL以及携带EcoRI酶切位点的P40Eco为PCR模板进行扩增，获得扩增目的基因；在所述扩增目的基因中，插入表达质粒pwPICZalpha；S3：通过XhoI、EcoRI酶切位点，对所述扩增目的基因进行酶切，获得带有BglII、EcoRI位点的第二段猪CD4...
【技术特征摘要】
2018.12.20 CN 20181156176951.一种高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法，其中，所述抗猪CD40试剂设计方法包括：S1：在猪CD40L基因编码序列的氨基端和羧基端分别插入XhoI和BamHI酶切位点，在限制性内切酶的作用下获得带有XhoI、BamHI位点的第一段猪CD40L目的基因(基因序列I)；S2：以携带XhoI、BglII酶切位点的p40LBgL以及携带EcoRI酶切位点的P40Eco为PCR模板进行扩增，获得扩增目的基因；在所述扩增目的基因中，插入表达质粒pwPICZalpha；S3：通过XhoI、EcoRI酶切位点，对所述扩增目的基因进行酶切，获得带有BglII、EcoRI位点的第二段猪CD40L目的基因(基因序列II)；S4：将带有XhoI、BamHI位点的所述基因序列I以及带有BglII、EcoRI位点的所述基因序列II进行连接，得到猪CD40L二聚体基因序列；在所述猪CD40L二聚体基因序列中插入表达质粒pwPICZalpha，得到含有所述猪CD40L二聚体基因序列的表达载体；S5：将所述表达载体通过毕赤酵母表达系统进行表达，获得可溶性猪CD40L二聚体。2.如权利要求1所述的抗猪CD40试剂设计方法，其中，所述步骤S3中，在对所述扩增目的基因进行酶切前，需获取相应序列后进行测序，测序确认后再进行酶切。3.如权利要求1所述的抗猪CD40试剂设计方法，其中，所述步骤S4中，所述基因序列I的BamHI位点和...
【专利技术属性】
技术研发人员：张剑文，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。