一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的新方法技术

本发明专利技术公开一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的新方法，其包括如下步骤：在灯照射下，将多肽或蛋白溶于水中制成多肽或蛋白溶液，加入过氧化二异丙苯和TCEP，之后调节pH至6.0‑7.0，加入含有半胱氨酸的多肽或蛋白，在0‑40℃下搅拌反应得到产物，其中，过氧化二异丙苯、TCEP和多肽的摩尔比为100：100:1‑1：1：1，多肽或蛋白溶液的浓度为1mM‑0.1M。本发明专利技术条件温和、选择性好、收率高、特别适合脱除多肽或蛋白质中半胱氨酸上的巯基。

A New Method for Selective Removal of Cysteine Sulfhydryl Groups from Peptides

【技术实现步骤摘要】
一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的新方法
本专利技术涉及药物领域以及生物工程
，尤其涉及一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的新方法。
技术介绍
随着生物医学的快速发展，多肽及蛋白质的化学合成也越来越多地受到人们的关注。通过化学合成的方法，人们不仅可以将20种天然氨基酸以外的非天然氨基酸插入序列的任意位置，而且能够实现特定位点的蛋白翻译后修饰。然而传统的酰胺缩合反应难以实现较长肽链（50个氨基酸以上）的合成，并伴有产率低、易消旋等缺点。为此，人们希望能够通过化学选择性的连接过程对两段未保护的肽链进行偶联，在连接位点形成天然的肽键且不导致差向异构化。1994年，芝加哥大学的StephenKent教授课题组报道了一种基于半胱氨酸的天然化学连接（NativeChemicalLigation,NCL）反应（Science,1994,266,776）,此法是多肽合成中常用的一种非常有效的连接两个肽段的策略。这种方法可以将一个含有N-端半胱氨酸的肽链和一个含有C-端硫酯的片段连接在一起从而方便高效地合成更长的多肽。然而，半胱氨酸的丰度较低（蛋白中的丰度为1.4%），极大地限制了NCL在蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的方法，其特征在于，包括如下步骤：在灯照射下，将多肽或蛋白溶于水中制成多肽或蛋白溶液，加入过氧化二异丙苯和TCEP，之后调节pH至6.0‑7.0，加入含有半胱氨酸的多肽或蛋白，在0‑40℃下搅拌反应得到产物，其中，过氧化二异丙苯、TCEP和多肽的摩尔比为100:100:1‑1:1:1，多肽或蛋白溶液的浓度为1mM‑0.1M。

【技术特征摘要】
1.一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的方法，其特征在于，包括如下步骤：在灯照射下，将多肽或蛋白溶于水中制成多肽或蛋白溶液，加入过氧化二异丙苯和TCEP，之后调节pH至6.0-7.0，加入含有半胱氨酸的多肽或蛋白，在0-40℃下搅拌反应得到产物，其中，过氧化二异丙苯、TCEP和多肽的摩尔比为100:100:1-1:1:1，多肽或蛋白溶液的浓度为1mM-0.1M。2.根据权利要求1所述的一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的方法，其特征在于：通过LC-MS来监控反应结束。3.根据权利要求1或2所述的一种选择性脱除多肽中半胱氨酸上巯基的方法，其特征在于：反应结束后产物用HPLC纯化，之后冻干得到纯化产物，产物或纯化产物使用HNMR...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙占奎，周剑，
申请(专利权)人：湖州泽溪源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33