从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，用乙醇水溶液溶解甘草提取物，用稀盐酸调节pH，用模拟移动床色谱技术进行分离，优化模拟移动床的填料，得到甘草黄酮的产品。本发明专利技术的优点是利用模拟移动床色谱分离技术甘草提取物中的黄酮类化合物和甘草酸，得到的甘草黄酮类化合物的产品纯度高，含甘草酸低于0.2％。本发明专利技术制备的甘草黄酮类化合物可广泛应用于保健食品和化妆品领域。

Isolation of Flavonoids and Glycyrrhizic Acid from Licorice Extract

【技术实现步骤摘要】
从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法
本专利技术属于天然有机化学领域，涉及一种以甘草提取物为原料分离甘草黄酮和甘草酸的方法。
技术介绍
甘草(GlycyrrhizauraiensisFisch.)又名乌拉尔甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)，多年生草本植物，属豆科，是一种药食两用资源。甘草主要分布在西北干旱和半干旱地区，土壤中性或稍碱性，抗逆性强，适应性强，是植物抗旱专家，抗沙尘暴的战士。新疆是主要产地中国甘草，甘草收购产能600万吨，产量占全国半数以上，其中南部高于北部，主要分布在孔雀河，因此，孔雀河两岸也被喻为“甘草之乡”。在我国出口的甘草中，新疆甘草占其中的80％以上，远销亚、美、欧等大洲。甘草味甘甜，性平和，入心、脾、肺、胃四经。生用偏凉，可泻火解毒、缓急止痛；炙用偏温，能散表寒、补中益气。此外，甘草还善于调和药性，解百药之毒。甘草中的生理活性成分主要有三萜类化合物(甘草甜素亦甘草酸盐，甘草次酸等)、黄酮类化合物(甘草黄碱酮、异甘草黄酮、甘草素等)及甘草多糖类化合物三大类成分。甘草甜素是甘草甜味主要成分，是由1分子甘草酸和2分子葡萄醛酸组成的，其甜度为蔗糖的200倍，是一种食品甜味剂。甘草黄酮具有抑菌、抗肿瘤、抗诱变、抗病毒、抗氧化等功能。甘草提取物是生产甘草酸单铵盐结束后产生的废料，其中含有丰富的黄酮类化合物和少量的甘草酸，目前，未将甘草提取物做进一步分离直接销售，影响了甘草提取物的使用范围及价值。我国每年都有大量的甘草提取物产生，未将甘草提取物的经济效益最大化，造成很大的资源浪费。因此，分离甘草提取物中的黄酮和甘草酸，有利于甘草资源的综合利用，可以提高甘草的附加值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法。本专利技术的技术方案包括以下步骤：从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，包括以下步骤：(1)将甘草提取物用乙醇水溶液完全溶解，用稀盐酸调节pH＝5；(2)将步骤(1)得到的溶液作为上样液，选用不同的大孔吸附树脂作为填料填充模拟移动床；(3)采用模拟移动床色谱，用65％的乙醇浓度对步骤(2)中的样品进行分离；(4)将步骤(3)中不同浓度的乙醇水溶液进行浓缩，回收溶剂，得到甘草黄酮浸膏和甘草酸；(5)将步骤(4)得到的甘草黄酮和甘草酸用甲醇溶解后过膜进行高效液相色谱分析；(6)将步骤(5)得到的分析结果，确定乙醇浓度和大孔吸附树脂；(7)将步骤(6)优化后的条件制备，得到含有甘草黄酮的流动相，浓缩、干燥，得到甘草黄酮。所述步骤(1)中，乙醇水溶液的乙醇与水的v/v浓度为30:70；所述步骤(2)中，大孔吸附树脂填料包括D101，AB-8，S-8；所述步骤(3)中，乙醇水溶液的乙醇与水的v/v浓度分别为：40:60，50:50，60:40，70:30，80:20；所述步骤(4)中，采用真空浓缩，真空度为-0.05～-0.08Mpa，温度为45～50℃，所得浸膏中水分含量低于5％；所得甘草黄酮浸膏中甘草酸的含量低于0.2％；甘草酸的部分甘草酸的含量不低于20％。所述步骤(5)中，高效液相色谱色谱分析流速为1ml/min，流动相为A:0.1％甲酸水溶液；B：甲醇；梯度洗脱程序条件为：0～45min5％～100％B；所述步骤(7)中，采用模拟移动床色谱分离技术从甘草提取物中分离纯化甘草黄酮和甘草酸，所用的模拟移动床为Ⅳ带结构，由4～8根Flash色谱柱组成，每个带由1～2根色谱柱串联组成，流动相为乙醇：水体积比为30:70，进样液流速为1～3ml/min，洗脱液流速为20～40ml/min，冲洗液流速为10～30ml/min，切换时间为17～19min，色谱系统操作温度为28～32℃。本专利技术提供的从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，先将甘草提取物用乙醇水完全溶解后，优化不同大孔吸附树脂不同洗脱梯度对分离的影响，确定参数，用模拟移动床色谱分离技术进行分离，得到甘草黄酮和甘草酸产品，得到的甘草黄酮类化合物的产品纯度高，含甘草酸低于0.2％，甘草黄酮可广泛应用于保健食品和化妆品领域，有利于甘草资源的综合利用，提高甘草的附加值。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中黄酮类化合物的含量测定的具体方法为：取样品0.5mg，溶于0.5mL乙醇中，加入刻度试管中，用蒸馏水补充至4mL，加入0.3mL5％(w/v)亚硝酸钠水溶液摇匀，5min后加入1％(w/v)氯化铝水溶液摇匀，6min后加入2mL的1moL/L的氢氧化钠水溶液，在加入蒸馏水至10mL，10min后510nm出测定吸光值；空白对照用乙醇代替样品进行反应；黄酮类化合物的含量以芦丁当量(RutinEquivalent，RE/g干基)表示。标准溶液的配制：精确称取芦丁标准品0.100g，至于25mL容量瓶中，用甲醇将其定容至刻度线。然后用移液管分别移取5mL、4mL、3mL、2mL、1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容止刻度，得到浓度分别为2、1.6、1.2、0.8和0.4mg/mL的溶液，按上述方法进行测定，在510nm处有最大吸收，得到510nm处的吸光度值与芦丁标品的浓度之间的标准曲线。将实施例一中的得到的分离物按照上述方法进行测定，依据得到的标准曲线即可得到分离物中黄酮类化合物的含量。实施例一将甘草提取物用乙醇水(v/v)为50:50溶解，浓度为20mg/ml，用稀盐酸调节pH＝5，然后用模拟移动床进行分离，填料为D101，不同的乙醇浓度洗脱，得到洗脱液，采用真空减压浓缩，真空度为-0.08Mpa，浓缩温度为45℃，回收溶剂，得到浸膏。将得到的浸膏用甲醇溶解，高效液相色谱分析，确定甘草黄酮和甘草酸是否分离完全。采用模拟移动床色谱分离技术从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸，所用的模拟移动床为Ⅳ带结构，由8根树脂色谱柱组成，每个带由2根色谱柱串联组成，流动相为乙醇：水＝60:40，进样液流速为2ml/min，洗脱液流速为40ml/min，冲洗液流速为30ml/min，切换时间为19min，色谱系统操作温度为30℃；对得到的含有甘草黄酮的洗脱液进行真空减压浓缩和喷雾干燥，得到黄酮类化合物的含量为36.2mgRE/g。实施例二将甘草提取物用乙醇水(v/v)为50:50溶解，浓度为20mg/ml，用稀盐酸调节pH＝5，然后用模拟移动床进行分离，填料为AB-8，不同的乙醇浓度洗脱，得到洗脱液，采用真空减压浓缩，真空度为-0.08Mpa，浓缩温度为45℃，回收溶剂，得到浸膏。将得到的浸膏用甲醇溶解，高效液相色谱分析，确定甘草黄酮和甘草酸是否分离完全。采用模拟移动床色谱分离技术从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸，所用的模拟移动床为Ⅳ带结构，由8根树脂色谱柱组成，每个带由2根色谱柱串联组成，流动相为乙醇：水＝60:40，进样液流速为2ml/min，洗脱液流速为40ml/min，冲洗液流速为30ml/min，切换时间为19min，色谱系统操作温度为30℃；对得到的含有甘草黄酮的洗脱液进行真空减压浓缩和喷雾干燥，得到黄酮类化合物的含量为51.4mgRE/g。实施例三将甘草提取物用乙醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，其特征在于，包括以下几个步骤：(1)将甘草提取物用乙醇水溶液完全溶解，用稀硫酸调节pH＝5；(2)将步骤(1)得到的溶液作为上样液，选用不同的大孔吸附树脂作为填料填充模拟移动床；(3)采用模拟移动床色谱，用不同的乙醇水溶液浓度洗脱步骤(2)中的样品；(4)将步骤(3)中不同浓度的乙醇水溶液进行浓缩，回收溶剂，得到甘草黄酮浸膏及甘草酸；(5)将步骤(4)得到的甘草黄酮浸膏用甲醇溶解后过膜进行高效液相色谱分析；(6)将步骤(5)得到的分析结果，确定乙醇浓度和大孔吸附树脂；(7)将步骤(6)优化后的条件进行模拟移动床色谱分离，得到分别含有甘草黄酮的流动相，浓缩、干燥，得到甘草黄酮和甘草酸。

【技术特征摘要】
1.从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，其特征在于，包括以下几个步骤：(1)将甘草提取物用乙醇水溶液完全溶解，用稀硫酸调节pH＝5；(2)将步骤(1)得到的溶液作为上样液，选用不同的大孔吸附树脂作为填料填充模拟移动床；(3)采用模拟移动床色谱，用不同的乙醇水溶液浓度洗脱步骤(2)中的样品；(4)将步骤(3)中不同浓度的乙醇水溶液进行浓缩，回收溶剂，得到甘草黄酮浸膏及甘草酸；(5)将步骤(4)得到的甘草黄酮浸膏用甲醇溶解后过膜进行高效液相色谱分析；(6)将步骤(5)得到的分析结果，确定乙醇浓度和大孔吸附树脂；(7)将步骤(6)优化后的条件进行模拟移动床色谱分离，得到分别含有甘草黄酮的流动相，浓缩、干燥，得到甘草黄酮和甘草酸。2.根据权利要求1所述的从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，其特征在于：步骤(1)溶解甘草提取物的乙醇水溶液的乙醇与水的v/v浓度为30:70，样品浓度20mg/ml。3.根据权利要求1所述的从甘草提取物中分离甘草黄酮和甘草酸的方法，其特征在于：所述的步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文杰，
申请(专利权)人：湘潭大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43