一种测定肺表面活性物质蛋白的方法及其应用技术

本公开涉及一种测定肺表面活性物质蛋白的方法及其应用，具体涉及一种能够不经分离制备或抗体抗原等免疫分析技术，直接测定哺乳动物的肺表面活性物质制剂(或肺功能研究样品)及其起始物料、制备过程中间体等样品中肺表面活性物质相关蛋白SP‑A、SP‑B、SP‑C、SP‑D的电泳技术和方法，使用离子表面活性剂(SDS)和强还原剂(二硫苏糖醇)经高温、高速离心等独特方法处理样品，选择合适的预制胶，经电泳分离，获得清晰条带，各条带经鉴定，确定分别为SP‑A、SP‑B、SP‑C、SP‑D。本发明专利技术无需将肺表面活性物质相关蛋白与磷脂分开，试验周期短，流程简单可控，避免使用高污染试剂，避免蛋白成分丢失，结果更为直观、可靠，提高了测定结果的准确性和精确度。

A METHOD FOR DETERMINATION OF PULMONARY SURFACTANT PROTEIN AND ITS APPLICATION

【技术实现步骤摘要】
一种测定肺表面活性物质蛋白的方法及其应用
本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及无需繁琐的分离制备等过程而直接检测肺表面活性物质蛋白的方法。
技术介绍
肺表面活性物质(pulmonarysurfactant，PS)是肺泡Ⅱ型细胞分泌的磷脂蛋白复合物。PS具有降低肺泡气液界面表面张力，防止肺不张和肺水肿，保持肺泡稳定，参与肺的防御功能等重要作用。PS的组成包括约90％的脂类和10％的蛋白，其中与PS生理功能有关的蛋白主要有四种肺表面活性相关蛋白(surfactant-associatedproteins，SP)，亲水性的SP-A、SP-D和疏水性的SP-B、SP-C。四种SP蛋白在PS的功能活性中具有重要意义。在支气管肺泡灌洗液(BALF)的蛋白中，也含有20％左右的SP[HammH,KroegelC,HohlfeldJ.Surfactant:areviewofitsfunctionsandrelevanceinadultrespiratorydisorders.RespirMed1996；90:251–270]，其中亲水性蛋白SP-A最多，占总SP蛋白的90％，亲水性SP-D占2–5％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测哺乳动物肺表面活性物质样品中SP‑A、SP‑B、SP‑C、SP‑D的方法，所述方法包括使用离子表面活性剂和还原剂处理样品的步骤，其中向样品中加入质量体积百分比为2％～10％、优选2％～5％的离子表面活性剂。

【技术特征摘要】
1.检测哺乳动物肺表面活性物质样品中SP-A、SP-B、SP-C、SP-D的方法，所述方法包括使用离子表面活性剂和还原剂处理样品的步骤，其中向样品中加入质量体积百分比为2％～10％、优选2％～5％的离子表面活性剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述离子表面活性剂包括阴离子表面活性剂。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂包括十二烷基硫酸钠SDS。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述还原剂包括选自巯基乙醇和二硫苏糖醇的还原剂。5.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中处理样品的步骤还包括加入非离子表面活性剂。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述非离子表面活性剂选自吐温和泊洛沙姆，其中所述吐温优选包括吐温80。7.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中处理样品的步骤还包括以转速10,000rpm～20000rpm、优选15000～18000rpm，或离心力25,000g～50000g、优选30000～45000g进行离心。8.根据前述任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡金艳，寇同欣，杨溦，营亚萍，
申请(专利权)人：华润双鹤药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11