一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，属于毒性研究技术领域，包括：1)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上培养，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；2)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上培养，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；3)当所述步骤1)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与步骤2)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显著差异时，表明三唑类农药具有生长发育毒性。采用本发明专利技术提供的方法能够准确地评价三唑类农药的生长发育毒性，为农业上合理使用的三唑类农药的剂量和浓度提供理论和实验数据支持。

A Method for Evaluating the Growth and Development Toxicity of Triazole Pesticides by Drosophila melanogaster

【技术实现步骤摘要】
一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法
本专利技术属于毒性研究
，尤其涉及一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法。
技术介绍
近些年来农药的的生产量和利用量都在大幅上涨，包括杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂等。三唑类杀菌剂在近十年中全球市场销售量位居首位，已成为全球杀菌剂主要大类，其主要通过干扰细胞色素P450抑制甾醇的合成从而影响细胞膜的形成。利用三唑类农药的高效、广谱、内吸的特性，目前已经将其应用到了水果、坚果、谷类以及蔬菜等作物上的真菌病害防治上。然而农药施用后仅有少部分作用于目标作物，大部分则是通过雨雾淋洗、地表径流、大气沉降和食物链等途径进入到土壤、地下水、河流与湖泊等环境介质中，对生态安全与人类健康带来潜在的风险。目前农药的毒性作用的研究主要集中在植物、水生动物和哺乳动物，相对于陆生昆虫研究较少。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，采用本专利技术提供的方法能够准确地评价三唑类农药的生长发育毒性，为农业上合理使用的三唑类农药的剂量和浓度提供理论和实验数据支持。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，包括以下步骤：1)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；2)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；3)当所述步骤1)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与步骤2)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显著差异时，表明三唑类农药具有生长发育毒性；所述含有三唑类农药的固体培养基中三唑类农药的浓度为10～800mg/L。优选的，所述步骤1)含有三唑类农药的固体培养基以水为溶剂，每升还包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g琼脂、0.5～1gCaCl2、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液。优选的，所述步骤1)和2)黑腹果蝇的三龄幼虫的数量为18～22只。优选的，所述培养的条件包括：所述培养的温度为24～26℃，所述培养的光暗比为12h:12h；所述培养的环境湿度为50～60％。优选的，所述步骤2)固体培养基以水为溶剂，每升包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g琼脂、0.5～1gCaCl2、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液。优选的，还包括：所述步骤1)培养过程中，蛹化得到的黑腹果蝇出现畸形，表明三唑类农药具有生长发育毒性。优选的，还包括：将将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6h以上，当三龄幼虫的肠道细胞出现损伤，表明三唑类农药具有生长发育毒性。优选的，所述三唑类农药包括戊唑醇。本专利技术提供了一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，包括以下步骤：1)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；2)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；3)当所述步骤1)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与步骤2)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显著差异时，表明三唑类农药具有生长发育毒性；所述含有三唑类农药的固体培养基中三唑类农药的浓度为10～800mg/L。采用本专利技术提供的方法能够准确地评价三唑类农药的生长发育毒性，为农业上合理使用的三唑类农药的剂量和浓度提供理论和实验数据支持。附图说明图1为暴露于戊唑醇后幼虫蛹化羽化率；图2为暴露于戊唑醇后成蝇体重；图3为暴露于戊唑醇后幼虫蛹化羽化过程中的畸形；图4为暴露于戊唑醇后台盼蓝染色结果。具体实施方式本专利技术提供了一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，包括以下步骤：1)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；2)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；3)当所述步骤1)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与步骤2)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显著差异时，表明三唑类农药具有生长发育毒性；所述含有三唑类农药的固体培养基中三唑类农药的浓度为10～800mg/L。在本专利技术中，所述三唑类农药优选包括戊唑醇。本专利技术将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重。在本专利技术中，所述黑腹果蝇优选选用w118野生型黑腹果蝇，本专利技术对所述w118野生型黑腹果蝇的来源没有特殊限定，采用常规市售的即可。在本专利技术中，所述含有戊唑醇的固体培养基中三唑类农药的浓度为10～800mg/L，具体为10mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L和800mg/L。在本专利技术中，所述三唑类农药优选用二甲基亚砜溶解后，再混合到固体培养基中，配制成相应的浓度。在本专利技术中，所述含有三唑类农药的固体培养基以水为溶剂，每升还优选包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g琼脂、0.5～1gCaCl2、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液；更优选包括77.7g玉米面、32.19g酵母、10.6g琼脂、0.726gCaCl2、31.62g蔗糖、63.2g葡萄糖、2g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液。在本专利技术中，所述黑腹果蝇的三龄幼虫的数量优选为18～22只，更优选为20只。在本专利技术中，所述培养的条件优选包括：所述培养的温度优选为24～26℃，更优选为25℃；所述培养的光暗比为12h:12h；所述培养的环境湿度为50～60％。本专利技术对所述培养时所需的光照强度没有特殊限定，采用本领域技术人员常规光照培养黑腹果蝇的光照强度即可。本专利技术优选采用恒温培养箱对黑腹果蝇进行培养。本专利技术将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重。在本专利技术中，所述固体培养基优选以水为溶剂，每升包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g琼脂、0.5～1gCaCl2、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液；更优选包括77.7g玉米面、32.19g酵母、10.6g琼脂、0.726gCaCl2、31.62g蔗糖、63.2g葡萄糖、2g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液。在本专利技术中，所述固体培养基中还优选含有二甲基亚砜，所述二甲基亚砜的含量与含有三唑类农药的固体培养基中的二甲基亚砜的含量相同。在本专利技术中，所述黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上培养的条件与黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上培养的条件相同，在此不再赘述。在本专利技术中，当在含有三唑类农药的固体培养基上培养的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与固体培养基上培养的的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；2)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；3)当所述步骤1)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与步骤2)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显著差异时，表明三唑类农药具有生长发育毒性；所述含有三唑类农药的固体培养基中三唑类农药的浓度为10～800mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于含有三唑类农药的固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；2)将黑腹果蝇的三龄幼虫置于固体培养基上，培养6～8d，每天统计黑腹果蝇的蛹化率、羽化率和体重；3)当所述步骤1)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重与步骤2)的黑腹果蝇的蛹化率、羽化率、体重相比，任一项出现显著差异时，表明三唑类农药具有生长发育毒性；所述含有三唑类农药的固体培养基中三唑类农药的浓度为10～800mg/L。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)含有三唑类农药的固体培养基以水为溶剂，每升还包括：70～80g玉米面、30～35g酵母、8～12g琼脂、0.5～1gCaCl2、30～33g蔗糖、60～65g葡萄糖、1～3g山梨酸钾和15ml5％对羟基苯甲酸丁酯溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)和2...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪喻，张晴，郝立翀，路雯多，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11