杀虫剂的筛选测定法制造技术

本发明专利技术涉及多肽，优选来自黑腹果蝇的多肽（ＤｍＳｈａｌ）作为杀虫剂的靶标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】杀虫剂的筛选测定法本专利技术涉及作为杀虫剂靶标的优选来自黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的具有电压门控性钾通道Sial (Shaker同族物1或Siaker样)活性的(DmSial)钾通道。在一个实施方案中，电压门控性钾通道Sial与其辅助蛋白KChIP(钾通道相互作用蛋白)，优选地其假定的辅助蛋白CG5890，果蝇属KChIP(钾通道相互作用蛋白)直向同源物共表达。本专利技术提供具有优选来自黑腹果蝇(DmSiaI)昆虫电压门控性钾通道 Shal (Shaker同族物1或Shaker样)及其辅助蛋白KChIP (钾通道相互作用蛋白)，优选其假定的辅助蛋白CG5890，果蝇属KChIP(钾通道相互作用蛋白)直向同源物活性作为杀虫剂靶标的多肽，提供编码具有昆虫电压门控性钾通道Sial (Shaker同族物1或Smker样)及其辅助蛋白KChIP(钾通道相互作用蛋白)活性多肽的新核酸序列及其上述核酸序列的功能等同物。本专利技术还涉及具有昆虫电压门控性钾通道Shal和/或其辅助蛋白KChIP (钾通道相互作用蛋白)活性的多肽，在鉴定降低昆虫电压门控性钾通道SiaKShaker同族物1或 Shaker样)和/或其辅助蛋白KChIP(钾通道相互作用蛋白)活性的杀虫活性化合物的方法和测定法中的用途。此外，本专利技术涉及通过上述方法鉴定的杀虫化合物和这些化合物用作杀虫剂的用途。在另一实施方案中，本专利技术涉及具有优选来自黑腹果蝇Siaker钾通道活性的作为杀虫剂靶标的钾通道。在一个实施方案中，Siaker通道与优选来自黑腹果蝇的 Hyperkinetic β亚基，优选Η-Ι νβ亚基A或C亚型共表达。本专利技术还提供在杀虫剂筛选测定法中使用的具有优选来自黑腹果蝇昆虫Siaker 通道和Hyperkinetic β亚基，优选H_kvi3亚基A或C亚型活性的多肽，提供编码具有昆虫 Shaker通道和Hyperkinetic β亚基，优选H_kvi3亚基A或C亚型活性的多肽的新核酸序列及其上述核酸序列的功能等同物。本专利技术此外还涉及具有昆虫Shaker通道和/或Hyperkinetic β亚基， 优选H_kvi3亚基A或C亚型活性的多肽分别在鉴定分别降低昆虫a^ker通道和 Hyperkinetic β亚基，优选H_kv β亚基A或C亚型活性的杀虫活性化合物中的方法和测定中的用途。此外，本专利技术涉及通过上述方法鉴定的杀虫化合物和这些化合物用作杀虫剂的用途。在另一实施方案中，本专利技术涉及具有优选来自黑腹果蝇酚乙醇胺受体活性的作为杀虫剂靶标的G蛋白偶联受体(GPCR)。本专利技术还提供杀虫剂的筛选测定法中使用的具有优选来自黑腹果蝇酚乙醇胺受体活性的多肽，提供编码具有优选来自黑腹果蝇酚乙醇胺受体活性的多肽的新核酸序列及其上述核酸序列的功能等同物。本专利技术还涉及具有选自优选来自黑腹果蝇oa2、Oamb, Oct-β和Oct-β _3R 的酚乙醇胺受体活性的多肽，在鉴定降低选自优选来自黑腹果蝇oa2、Oamb, Oct_i3-2R和 Oct-β-3R的酚乙醇胺受体活性的杀虫活性化合物的方法和测定中的用途。此外，本专利技术涉及通过上述方法鉴定的杀虫化合物和这些化合物用作杀虫剂的用途。在另一实施方案中，本专利技术涉及作为杀虫剂靶标的SK-通道。本专利技术此外提供作为杀虫剂靶标的具有昆虫小电导Ca2+激活钾通道活性的多肽，提供编码具有昆虫小电导Ca2+激活钾通道活性的多肽的新核酸序列及其上述核酸序列的功能等同物。本专利技术还涉及具有昆虫小电导Ca2+激活钾通道活性的多肽，在鉴定降低昆虫小电导Ca2+激活钾通道活性的杀虫活性化合物的方法和测定中的用途。此外，本专利技术涉及通过上述方法鉴定的杀虫化合物和这些化合物用作杀虫剂的用途.昆虫引起许多人和动物疾病。昆虫还引起相当大的农业和财产损害，导致经济损失。尽管使用和滥用了所有的昆虫毒药，但是昆虫还是每年破坏超过30 %的全球粮食作物。已经开发出许多方法以限制由昆虫引起的破坏。一种方法是使用用于昆虫控制的化学药品。许多杀虫剂如DDT的问题在于它们需要高浓度应用和它们具有非特异的广谱活性的事实。化学杀虫剂通常影响有益和无益的物种。它们当中许多久存于环境中并且因此在食物链中积累。另一种方法是表达杀虫毒素，例如来自细菌苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)蛋白质毒素的转基因作物。昆虫害虫有获得对所有杀虫剂抗性的倾向，因为它们具有适应其环境的罕见能力，这是因为它们具有在昆虫群体中引起快速出现抗性的机制，如短生活周期、高繁殖率和长距离行进的能力。现在，表现出杀虫剂抗性的害虫在日益增加。因此，仍然有寻找具有对昆虫害虫极其特异作用的有效且经济的杀虫剂的需求。 杀虫剂越有效，其造成的环境危险越小。这可以通过鉴定和分离编码将会控制昆虫发育和/或存活的蛋白质的基因实现。本专利技术提供昆虫电压门控性钾通道Sial (Shaker同族物1或Siaker样)和/或其辅助蛋白KChIP(钾通道相互作用蛋白)作为杀虫剂的新的靶标。本专利技术还提供用于鉴定降低昆虫电压门控性钾通道aial (Shaker同族物1或Smker样)和/或其辅助蛋白 KChIP(钾通道相互作用蛋白)活性的杀虫活性化合物的方法和测定法。在许多果蝇属胚胎和幼体神经元中发现的外向电压依赖性K+电流源于Siaker 家族成员 Shaw、Shab 和 Shal 产生的混合电流(Tsunoda，S.和 L. Salkoll (1995) J Neuroscience. March ；15 (3) 1741-1754)。Shal 产生这些宏观 K+ 电流的瞬时部分(“A-型” 电流)并且通过例如某些神经元中引起延缓的电流脉冲调整这些电流(Yu，D.，i^ng，C.和 A. Guo (1999) JNeurobiology. Aug ；40 (2) :158-70)。选择性剪接、翻译后修饰和其他 Shal 相关的加工可能部分地负责在这些神经元中观察到的广泛的调整(Choi，J. C.，Park，D.和 L. C. Griffith(2004)J Neurophysiology. 91 :2353-2365)。已经证明Kv4. X(Shal)辅助蛋白KChIP可能通过促进四聚体通道组装急剧增加 Shal向细胞膜的运输，和引起Sial通道门控特性的不同变化(KunjiIwar, K.，Strang, C. ， DeRubeis, D.禾口 P.J.Pfaffinger(2004)JBiological Chemistry. Dec ；279 (52) 54542-54551)。不管ami在神经元传导中的作用如何，对于该靶标的确认案例仍有待确立。我们的原位数据表明在胚胎腹神经索和内脏肌肉组织中低水平表达。位于Berkeley的果蝇属基因组计划显示在胚胎/幼体内脏肌肉、纵向内脏肌肉纤维、腹中线和胚胎中枢神经系统包括腹神经索中有染色。DmaiaImRNA是在胚胎中期表达达到高峰的罕见转录物(内部Lynx 数据)。在哈佛医学院果蝇保藏中心有两个内含子转座子插入系，但是没有与此相关的生存力数据，并且也得不到其它的Sial突变体。在公众领域也没有微列阵或者northern数据。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．鉴定分别降低昆虫电压门控性钾通道Ｓｈａｌ（Ｓｈａｋｅｒ同族物ｌ或Ｓｈａｋｅｒ样）和／或其辅助蛋白ＫＣｈＩＰ（钾通道相互作用蛋白）活性的杀虫活性化合物的方法，所述方法包括：ａ）在膜中装配最初不存在于所述膜中的、具有昆虫电压门控性钾通道Ｓｈａｌ（Ｓｈａｋｅｒ同族物ｌ或Ｓｈａｋｅｒ样）和／或其辅助蛋白ＫＣｈＩＰ（钾通道相互作用蛋白）活性的多肽，ｂ）在膜的一侧上应用怀疑具有抑制最初不存在于所述膜中的所述多肽活性的能力的化合物，ｃ）检测所述多肽的活性，和ｄ）鉴定在（ｂ）中应用的降低所述多肽活性的化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·贝尔纳斯科尼，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：DE