一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生化检测技术领域，特别涉及一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡及其制备方法。该干片检测试剂卡包含三个叠层，依次为支持层、显色层和扩散层；显色层中的试剂包括亲水性胶体、表面活性剂、色原A、色原B、色原C；扩散层中的试剂包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂、颗粒物质、次血红素六肽。本发明专利技术定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡，可定量检测食品中过氧化氢的残留量；干片检测试剂卡包含三个叠层，依次为支持层、显色层和扩散层；显色体系采用双色原体系，即提高了检测的线性范围，又降低了干片检测试剂卡的检测低限；用次血红素六肽代替过氧化物酶，使检测卡不需添加辅助因子、降低成本、储存条件宽泛不易失活。

A dry tablet reagent card for quantitative determination of hydrogen peroxide concentration and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡及其制备方法
本专利技术涉及生化检测
，特别涉及一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡及其制备方法。
技术介绍
过氧化氢(H2O2)，又称双氧水，是一种具有强氧化性、腐蚀性的无色透明液体。过氧化氢作为一种重要的化工产品常用作为消毒剂、漂白剂、氧化剂、液体燃料等在食品、医药、国防、纺织品、造纸、化学合成以及环保等领域中广泛应用。国家卫生和计划生育委员会在食品添加剂使用标准GB2760-2014中规定，食品中不允许有过氧化氢残留。但是，一些食品生产企业将过氧化氢作为廉价的氧化剂、漂白剂，超量或非法使用，导致食品中过氧化氢残留超标，有时甚至会引起食物中毒。过氧化氢生产和使用企业的不标准排放可导致对人体和环境造成危害。因此，对农、副业产品及环境中过氧化氢检测具有重要意义。目前，关于过氧化氢浓度的分析方法主要依赖于过氧化氢的氧化作用，通过过氧化物酶(Peroxidase，POD)的催化，使生产的物质用于比色、发光、荧光或电化学信号检测。其中，常规滴定法中的碘量法是工厂实践中最广泛用于检测漂白过程中过氧化氢含量的方法，该方法操作简单，但灵敏度较低，干扰因素多，且终点色变不明显。化学法具有灵敏度高、专一性好，但测定线性范围窄，或者检测低限不够。大多数以现代仪器分析和液体试剂配合的过氧化氢含量测定方法，需要昂贵的设备，操作复杂，缺乏应用的广泛性和普遍适用性。POD作为生物催化剂具有底物特异性高、条件温和及高效的显著优点。但是，POD作为天然酶是不稳定的，很容易发生变性(如在高温、强酸性和碱性条件下等)，导致分析误差；同时它亦存在纯化难、不易储存和价格昂贵的问题。干片检测试剂卡具有简便、快速、灵活以及无需专业人员操作等优点。目前国内基本为定性或半定量测定，这种干片检测试剂卡均是由滤纸、纤维素片、多孔胶膜等一类片层物质预先固定全部试剂，两层和三层经过堆叠、粘合、冲压等处理结合。测量线性范围不大。有许多分析测试中的试剂不能预先混合，而且复杂测试液需要预处理，这就限制了干片检测试剂卡应用领域。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡及其制备方法。该干片检测试剂卡显色体系采用双色原体系，即提高了检测的线性范围，又降低了干片检测试剂卡的检测低限；用次血红素六肽代替过氧化物酶，使检测卡不需添加辅助因子、降低成本、储存条件宽泛不易失活。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡，干片检测试剂卡包含三个叠层，依次为支持层、显色层和扩散层；显色层中的试剂包括亲水性胶体、表面活性剂、色原A、色原B、色原C；色原A为4-氨基安替比林，色原B为1,7-二羟基萘，色原C选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种；扩散层中的试剂包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂、颗粒物质、次血红素六肽。以4-氨基安替比林、3,5-二氯羟基苯磺酸钠、1,7-二羟基萘组成的双显色体系为例，本专利技术检测原理为：液体样本滴加在试剂片扩散层，均匀分布，同时在扩散层通过次血红素六肽(DhHP-6)催化，样本中的过氧化氢分解出氧的游离基，使显色层中的4-氨基安替比林和3,5-二氯羟基苯磺酸钠、4-氨基安替比林和1,7-二羟基萘分别氧化为红色醌型化合物，在510nm波长下，经反射分光光度法测量反射率的变化，通过标准曲线计算过氧化氢的浓度。测定在5分钟内即可完成。在扩散层滴加样本，在相反的一面测定，显色强度高，减少加样端测定产生的气泡，过量液体、浊度而造成的干扰。同时由于显色层为亲水胶体，具有很高的显色匀度。一般显色体系采用色原由A和B组成，A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种。此种显色体系检测过氧化氢线性范围一般只能在3-100mg/L。本专利技术显色体系采用双色原体系，即色原由A、B和C组成，A为4-氨基安替比林，B为1,7-二羟基萘，C选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种。本专利技术显色体系检测过氧化氢线性范围可达到0.3-400mg/L即提高了检测的线性范围，又降低了干片检测试剂卡的检测低限。次血红素六肽(Deuterohemin-AlaHisThrValGluLys，DhHP-6)是以血红素为辅基的具有过氧化物酶活性的模拟物，其结构式如下：DhHP-6是一种含His的过氧化物酶肽类模拟物，具有分子结构稳定，分子量小，DhHP-6可催化H2O2氧化4-AAP-苯酚显色体系，模拟过氧化物酶的催化特性。具有不需要辅助因子、价值便宜、不易失活的特点，可降低过氧化氢测定试剂的成本，有利于提高试剂的稳定性。作为优选，色原C为3,5-二氯羟基苯磺酸钠。作为优选，显色层中的试剂用量如下：优选地，显色层中的试剂用量如下：作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、纤维素酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或几种。优选地，亲水性胶体选自聚乙烯醇、黄原胶、壳聚糖、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。作为优选，扩散层中的试剂用量如下：优选地，扩散层中的试剂用量如下：作为优选，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、醋酸纤维素、硝酸纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇缩丁醛、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或几种。优选地，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、醋酸纤维素、硝酸纤维素中的一种或几种。作为优选，颗粒物质选自二氧化钛、硫酸钡、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或几种。优选地，颗粒物质选自二氧化钛、纤维素酯中的一种或两种。作为优选，表面活性剂为山梨醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯20、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。优选地，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯20。作为优选，支持层为聚对苯二甲酸乙二醇酯的聚合物，厚度为50～300微米。优选地，支持层厚度为100～200微米。更优选地，支持层厚度为150～200微米。优选地，支持层的表面经过涂覆底层处理。本专利技术还提供了该干片检测试剂卡的制备方法，包括如下步骤：将显色液试剂涂覆在支持层上，首次干燥；将扩散液试剂喷涂在支持层上，再次干燥，得到包括支持层、显色层和扩散层的干片检测试剂卡。作为优选，首次干燥的温度为40～60℃，首次干燥的时间为3～5min；再次干燥的温度为40～50℃，再次干燥的时间为5～10min。本专利技术提供了一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡及其制备方法。该干片检测试剂卡包含三个叠层，依次为支持层、显色层和扩散层；显色层中的试剂包括亲水性胶体、表面活性剂、色原A、色原B、色原C；色原A为4-氨基安替比林，色原B为1,7-二羟基萘，色原C选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种；扩散层中的试剂包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂、颗粒物质、次血红素六肽。本专利技术具有的技术效果如下：本专利技术定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡，可定量检测食品中过氧化氢的残留量；干片检测试剂卡包含三个叠层本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡，其特征在于，所述干片检测试剂卡包含三个叠层，依次为支持层、显色层和扩散层；所述显色层中的试剂包括亲水性胶体、表面活性剂、色原A、色原B、色原C；所述色原A为4‑氨基安替比林，所述色原B为1,7‑二羟基萘，所述色原C选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5‑二氯羟基苯磺酸钠中的一种；所述扩散层中的试剂包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂、颗粒物质、次血红素六肽。

【技术特征摘要】
1.一种定量检测过氧化氢浓度的干片检测试剂卡，其特征在于，所述干片检测试剂卡包含三个叠层，依次为支持层、显色层和扩散层；所述显色层中的试剂包括亲水性胶体、表面活性剂、色原A、色原B、色原C；所述色原A为4-氨基安替比林，所述色原B为1,7-二羟基萘，所述色原C选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种；所述扩散层中的试剂包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂、颗粒物质、次血红素六肽。2.根据权利要求1所述的干片检测试剂卡，其特征在于，所述显色层中的试剂用量如下：3.根据权利要求1或2所述的干片检测试剂卡，其特征在于，所述亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、纤维素酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的干片检测试剂卡，其特征在于，所述扩散层中的试剂用量如下：5.根据权利要求1或4所述的干片检测试剂卡，其特征在于，所述亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、醋酸纤维素、硝酸纤维素、聚乙烯醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：王菁菁，刘璐，崔建华，董理，张香丽，
申请(专利权)人：长春汇力生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22