一种融合基因、重组表达载体、抗原及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于兽用生物制品技术领域，公开了一种融合基因，碱基序列如序列表SEQ ID NO：1所示；该融合基因采用禽流感H9亚型HA基因、腺病毒4型fiber2基因、特异性连接肽片段基因进行融合，该基因对应的表达蛋白抗原能够诱导家禽产生高水平的特异性抗体，保护家禽免受禽流感和禽腺病毒的感染，同时，本发明专利技术还公开了一种重组表达载体、抗原及其制备方法和应用。

A Fusion Gene, Recombinant Expression Vector, Antigen and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种融合基因、重组表达载体、抗原及其制备方法和应用
本专利技术涉及兽用生物制品
，特别涉及融合基因、重组表达载体、抗原及其制备方法和应用。
技术介绍
禽流感病毒(AvianinfluenzavirusAIV)是禽类及一些哺乳动物的呼吸系统的重要病原，在分类学上属于正粘病毒科流感病毒属。根据表面的蛋白抗原性不同，禽流感病毒被分为17种亚型血凝素(HA)和10种亚型神经氨酸酶(NA)，其中，H9N2亚型禽流感病毒在世界范围内广泛流行，引起蛋鸡产蛋量显著下降，饲料报酬降低等，给养禽业造成了巨大的经济损失，并且对人类健康造成危险。流感病毒对宿主的致病性是由多个基因决定的，其中HA基因及其编码的蛋白尤为重要，在病毒吸附及穿膜过程中起着关键作用，是重要的表面抗原，它刺激机体产生中和抗体，可中和病毒的感染。禽腺病毒(FAV)呈世界性分布，血清型众多，该病毒引起的肉鸡心包积水综合症就是由禽腺病毒-C血清4型腺病毒感染引起，全国各地对于该病均有报道，3～5周龄肉鸡发病尤为危害，严重时死亡率突然上升至80％以上，严重危害我国养禽业健康发展。目前针对以上两种对家禽养殖业危害极大的疫病，疫苗防控是最有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合基因，其特征在于：碱基序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种融合基因，其特征在于：碱基序列如序列表SEQIDNO：1所示。2.一种融合抗原，其特征在于：所述的融合抗原具有：a)禽流感病毒HA蛋白；b)禽腺病毒fiber2蛋白；c)位于所述的禽流感病毒HA蛋白和禽腺病毒fiber2蛋白之间的特异性连接肽；所述的特异性连接肽的氨基酸序列如序列表SEQIDNO：2所示。3.根据权利要求2所述的融合抗原，其特征在于：所述的融合抗原的氨基酸序列表如序列表SEQIDNO：3所示。4.一种重组表达载体，其特征在于：所述的重组表达载体含有如权利要求1所述的融合基因。5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述的重组表达载体为：将如权利要求1所述的融合基因通过内切酶ECORⅠ和NOTⅠ采用双酶切反应连接于巴斯德毕赤酵母表达载体pPic9k上而得到的重组表达载体。6.一种如权利要求2或3所述的融合抗原的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：合成融合表达基因序列，构建重组表达载体；将如权利要求1所述的融合基因序列进行合成，并且在融合基因序列两端加上限制性酶切位点ECORⅠ和NOTⅠ，同时采用限制性内切酶ECORⅠ和NOTⅠ对巴斯德毕赤酵母表达载体pPic9k进行双酶切，得到9263bp大小的片段，将合成的融合基因序列和双酶切回收的巴斯德毕赤酵母表达载体pPic9k的片段用T4DNAligase进行连接得到连接产物；步骤2：将步骤1中的连接产物转化大肠杆菌DH5α，挑菌落采用PCR的方法进行阳性克隆验证，并且对目的片段进行测序验证；步骤3：步骤2测序成功之后对菌落提质粒得到重组质粒，采用电转化法，将重组质粒导入毕赤酵母GS11中得到菌体；步骤4：将步骤3中的菌体收集并挑取能够在抗性平板上正常生长的转化子，对转化子提取基因组，对目的片段进行PCR扩增；步骤5：确定有目的片段后，再次活化转化子，进行发酵诱导培养，得到含融合抗原的蛋白液；步骤6：对蛋白液体进行纯化沉淀得到融合抗原。7.根据权利要求6所述的融合抗原的制备方法，其特征在于：所述的步骤2具体为：将步骤1中的连接产物转化大肠杆菌DH5α,取100μl在冰上融化的大肠杆菌DH5α细胞于圆底5ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞爱，李延鹏，温良海，蔡仕君，李鹏杰，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，华农肇庆生物产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44