一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法技术

本发明专利技术提供一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该技术方案首先探究了肺炎克雷伯氏菌的特异性分子标记，获得了一种对肺炎克雷伯氏菌具有专一指向性的蛋白质片段，以其作为标志物可用于肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌、鼻硬结克雷伯氏菌的种间鉴别。相对于现有技术的培养法和涂片法而言，本发明专利技术准确性更高，且可通过标志物蛋白含量近似性的推算肺炎克雷伯氏菌含量，从而在一定程度上实现定量检测。在以上技术方案的基础上，本发明专利技术开发了专用的取样装置，基于琼脂糖凝胶的附着作用和滤膜的拦截作用，在气流通过的过程中实现微生物的固着，再通过洗脱的方式将微生物分散至无菌水中，从而作为生物检材用于质谱分析。

A Rapid Detection Method for Suspended Microorganisms in Air

【技术实现步骤摘要】
一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法
本专利技术涉及微生物检测
，具体涉及一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法。
技术介绍
空气环境是微生物生存的重要场所，也是人类与微生物接触的主要环境，因此对空气中悬浮微生物检测，对于疾病防控、环境质量监测具有重要意义。空气中的微生物主要来自人类的生活和生产过程。它们附着于尘埃或液滴上，随载体悬浮于空气中。在湿度大、灰尘多、通气不良、日光不足的情况下，空气中的微生物不仅数量较多，而且存活时间也较长。微生物污染空气，可使空气成为传播呼吸道传染病的媒介。要检测空气中微生物的种类和数量，需要特殊装置的采样器采样，然后将采得的空气样品通过培养基的培养进行计数。影响微生物计数的因素很多，包括空气中微生物的捕获方法、捕获过程中对微生物的杀灭作用以及培养温度和培养基的选择等。当下还不能找到一种能培养所有微生物的培养基，特别是立克次体和病毒不能在无生命的培养基中生长，因此，一般都是以细菌和真菌作为空气微生物检测的目标。克雷伯氏菌是一类革兰氏阴性杆菌，其中肺炎克雷伯氏菌(K.peneumoniae)对人致病性较强，是重要的条件致病菌和医源性感染菌之一，可引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该方法应用到取样装置，所述取样装置包括壳体(1)，通道(2)，风机(3)，滤膜(4)，筛网(5)，其中壳体(1)围成一通道(2)，所述通道(2)具有两个端口，在所述两个端口处分别连接有风机(3)和滤膜(4)，在所述通道(2)中固定连接有若干筛网(5)；其特征在于所述检测方法包括以下步骤：1)将所述取样装置的壳体(1)、风机(3)、滤膜(4)、若干筛网(5)分别灭菌；将琼脂糖凝胶灭菌后降温至70℃，在无菌环境下将若干筛网(5)浸泡于灭菌后的琼脂糖凝胶中，取出筛网(5)在无菌环境下降至室温；2)在无菌环境下组装所述取样装置；将所述取样装置移至待测地点，启...

【技术特征摘要】
1.一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，该方法应用到取样装置，所述取样装置包括壳体(1)，通道(2)，风机(3)，滤膜(4)，筛网(5)，其中壳体(1)围成一通道(2)，所述通道(2)具有两个端口，在所述两个端口处分别连接有风机(3)和滤膜(4)，在所述通道(2)中固定连接有若干筛网(5)；其特征在于所述检测方法包括以下步骤：1)将所述取样装置的壳体(1)、风机(3)、滤膜(4)、若干筛网(5)分别灭菌；将琼脂糖凝胶灭菌后降温至70℃，在无菌环境下将若干筛网(5)浸泡于灭菌后的琼脂糖凝胶中，取出筛网(5)在无菌环境下降至室温；2)在无菌环境下组装所述取样装置；将所述取样装置移至待测地点，启动风机(3)，以恒定的风速运行1min；而后拆卸所述取样装置的滤膜(4)和筛网(5)，将所述滤膜(4)和筛网(5)浸泡于70℃的无菌水中，恒温保持1min，另取新鲜无菌水冲洗滤膜(4)和筛网(5)，合并洗液，再用新鲜无菌水定容至300mL，得到待测样品；3)将所述待测样品离心取沉淀；分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用；检测所述上清液中是否含有氨基酸序列为MLGGDAWPYEGC的肺炎克雷伯氏菌标志性蛋白质片段。2.根据权利要求1所述的一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，其特征在于步骤3)中所述检测是氨基酸序列测定。3.根据权利要求1所述的一种用于空气中悬浮微生物的快速检测方法，其特征在于步骤3)中所述检测包括以下步骤：对所述上清液进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中是否含有序列为MLGGDAWPYEGC的肺炎克雷伯氏菌标志性蛋白质...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄华斌，蔡尽忠，傅奇，周艳丽，
申请(专利权)人：厦门华厦学院，
类型：发明
国别省市：福建,35