外周血记忆T细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及一种外周血记忆T细胞培养方法，所述方法包括：a)将由外周血分离得到的PBMC进行磁珠分选得到CD8

Culture method of memory T cells in peripheral blood

【技术实现步骤摘要】
外周血记忆T细胞培养方法
本专利技术涉及细胞培养
，具体而言，涉及一种外周血记忆T细胞培养方法。
技术介绍
T细胞根据其分化程度可分为初始T细胞，记忆T细胞，效应T细胞。初始T细胞在胸腺中发育成熟迁移至外周淋巴组织中(如脾脏、淋巴结)。肿瘤患者体内初始T细胞接触肿瘤细胞表面肿瘤相关抗原(TAA)，在APC细胞的识别和呈递下，以及一系列的信号通路，增殖分化为效应T细胞和记忆T细胞。效应T细胞和记忆T细胞有着不同的功能，前者分泌穿孔素、颗粒素酶和颗粒溶素等物质，并通过Fas配体直接杀伤肿瘤细胞，但在体内存活时间较短(3～4个月)，且无法继续增殖。高度分化的细胞毒性T细胞(CytotoxicLymphocyte，CTL)是效应T细胞，在体内的半衰期大约只有15天。记忆T细胞能够在血液系统中长期存在(10～20年)，遇到TAA后还能再次被激活，并分裂增殖为具有杀伤功能的效应性T细胞(CTL)。免疫记忆是获得性免疫应答的主要特征。机体对抗原初次应答后，形成的效应信息可存留在机体免疫系统。免疫记忆的物质基础是处于静息态的记忆T细胞和记忆B细胞，其中记忆T细胞尤为重要，是机体有效清除各种病原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种外周血记忆T细胞培养方法，其特征在于，包括：a)将由外周血分离得到的PBMC进行磁珠分选得到CD8

【技术特征摘要】
1.一种外周血记忆T细胞培养方法，其特征在于，包括：a)将由外周血分离得到的PBMC进行磁珠分选得到CD8+T细胞；将所述CD8+T细胞接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中含4％～6％自体血浆，且细胞因子主要包括IFN-γ900U/mL～1100U/mL以及IL-2900U/mL～1100U/mL；b)换液进行扩增培养，新培养体系中含4％～6％自体血浆，且细胞因子主要包括IL-2900U/mL～1100U/mL，IL-1a900U/mL～1100U/mL，IL-7900U/mL～1100U/mL，IL-1515ng/mL～25ng/mL；c)将扩增好的T细胞与DC细胞共培养；其中所述DC细胞预先与自体肿瘤抗原共培养。2.根据权利要求1所述的外周血记忆T细胞培养方法，其特征在于，所述磁珠分选包括：a1)将所述PBMC计数后离心，用磁珠分选液重悬PBMC并孵育得到孵育液；以所述PBMC为107cells计，所述磁珠分选液主要包含80μL～100μLMACSbuffer以及8μL～12μLCD8+T细胞Biotin-antibody；a2)将所述孵育液与17μL～23μLAnti-biotinmicrobeads接触并再次孵育；a3)过分选柱，弃去流下来的细胞，用MACSbuffer冲洗柱子，收集流下的液体得到CD8+T细胞。3.根据权利要求1所述的外周血记忆T...

【专利技术属性】
技术研发人员：张权，
申请(专利权)人：北京安溢生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11