一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其具有6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰的峰面积最大；以该峰面积最大的所述特征峰为参照峰，6个所述特征峰的相对保留时间tg分别为：0.376，0.416，0.548，0.685，0.837，1.000，RSD％

A standard fingerprint of Rosewood hedgehog by HPLC and its construction method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用
本专利技术涉及红木真伪鉴定领域，特别是涉及一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用，该应用为刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱在鉴别刺猬紫檀真伪方面的应用。
技术介绍
刺猬紫檀(PterocarpuserinaceusPoir.)是一种紫檀属花梨木类数目。主要产地塞内加尔、几内亚比等热带非洲国家。是珍贵红木之一，是贵重家具及美术工艺品的原材料，由于其成材需要几十上百年的时间，加之自身材质耐用，能散发一定的香气，具有很高的市场价值和使用价值。市场所售刺猬紫檀常常会出现掺假现象，因此需要对其进行真伪鉴别。目前，珍贵红木鉴别的方法，主要是基于人工经验的传统植物学分类法即生物学显微结构检索表和计算机图像处理法，以及基于木材表面的光泽度、色度等物理指标的表观形态人工判别法，这些方法不仅费时费力，结果也具有主观不确定因素，难免出现误判。化学指纹图谱技术根据天然物质中化学物质整体信息为基础，借助数据挖掘技术和化学计量学算法进行指纹图谱构建，在天然物质的真伪鉴别上已经应用很广，特别是在中药材的质量控制、道地性和真伪鉴别方面受到国际社会的认可。目前还没有将化学指纹图谱技术应用在刺猬紫檀的真伪鉴别中。
技术实现思路
为解决现有技术中刺猬紫檀真伪鉴别费时费力，结果受主观不确定因素影响大的问题，本专利技术提供一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法，以及该刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱在鉴别刺猬紫檀真伪方面的应用。本专利技术公开了一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其具有6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰的峰面积最大；以该峰面积最大的所述特征峰为参照峰，6个所述特征峰的相对保留时间tg分别为：0.376，0.416，0.548，0.685，0.837，1.000，RSD％<0.3％。进一步地，6个所述特征峰的相对峰面积分别为：0.0336，0.0547，0.0090，0.0222，0.0039，1.000，RSD<1.5。进一步地，6个所述特征峰的保留时间分别为：31.862min、35.231min、46.415min、58.021min、63.243min、84.681min，RSD％<0.3％。本专利技术还公开了一种如上所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱的构建方法，其包括以下步骤：步骤一、供试品溶液的制备：称取刺猬紫檀心材部分木屑，加入甲醇、高纯水，震摇，超声提取，滤纸过滤，微孔滤膜过滤，得到所述供试品溶液；步骤二、HPLC检测：将所述步骤一得到的供试品溶液进行HPLC检测，色谱条件为：AgilentEclipseXDB-C18，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；以水为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0～20min，流动相B的体积百分含量由8％提高至23％，流动相A的体积百分含量由92％降低至77％；从20～33min,流动相B的体积百分含量为23％，流动相A的体积百分含量为77％；从33～43min，流动相B的体积百分含量由23％提高至30％，流动相A的体积百分含量由77％降低至70％；从43～53min,流动相B的体积百分含量30％，流动相A的体积百分含量为70％；从53～69min，流动相B的体积百分含量由30％提高至38％，流动相A的体积百分含量由70％降低至62％；从69～76min，流动相B的体积百分含量38％，流动相A的体积百分含量为62％；从76～91min，流动相B的体积百分含量由38％提高至49％，流动相A的体积百分含量由62％降低至51％；从91～92min，流动相B的体积百分含量49％，流动相A的体积百分含量为51％；从92～95min，流动相B的体积百分含量由49％降低至8％，流动相A的体积百分含量由51％提高至92％；从95～103min，流动相B的体积百分含量8％，流动相A的体积百分含量为92％；检测波长为290nm；柱温30℃；流速1.0mL/min；得到HPLC检测结果。进一步地，所述步骤一具体为：称取刺猬紫檀心材部分木屑0.2g，置于50mL离心管中，加入5mL甲醇、5mL高纯水，震摇5min，超声提取5min，滤纸过滤，再以0.2μm的微孔滤膜过滤，得到所述供试品溶液。进一步地，称取刺猬紫檀心材部分木屑精确至小数点后三位。进一步地，还包括步骤三、分析比较多批来源不同的刺猬紫檀的HPLC检测结果，得到由其共有特征峰构成的所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱。进一步地，所述步骤三具体为：将所述多批来源不同的刺猬紫檀的HPLC检测结果导入国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，选取时间窗宽度为0.2min，以中位数生成对照谱图，经过多点校正后自动匹配，生成刺猬紫檀指纹图谱共有模式，并计算所述多批来源不同的刺猬紫檀的HPLC检测结果与该刺猬紫檀指纹图谱共有模式的相似度，使得所述相似度在0.984以上。进一步地，还包括步骤四、所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱的精密度试验、重现性试验及稳定性试验。进一步地，精密度试验具体为：取同一供试品溶液，连续进样6次，以6号特征峰(峰面积最大的特征峰)为参照峰，计算出1～6号共有特征峰的相对保留时间RSD值小于3％和相对峰面积的RSD值小于1，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.90，表明仪器稳定，精密度良好。特征峰的编号以保留时间从短到长进行依次排序，即从1号到6号特征峰的保留时间依次增长。进一步地，重现性试验具体为：取同一批刺猬紫檀木屑，精密称取6份，按照步骤1供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，分别进样，同时用相似度评价软件计算各HPLC指纹图谱的相似度均大于0.90，以6号峰为参照峰，计算出1～6号共有指纹峰的相对保留时间RSD值小于3％和相对峰面积的RSD值小于1，表明所述刺猬紫檀HPLC指纹图谱的构建方法重现性良好。进一步地，稳定性试验具体为：取同一份供试品溶液，分别于0，3，6，9，15，24h进样检测，同时用相似度评价软件计算各HPLC指纹图谱的相似度均大于0.90，以6号峰为参照峰，计算出1～6号共有指纹峰的相对保留时间RSD％值小于3％和相对峰面积的RSD值小于1，表明供试品溶液在24小时内稳定。本专利技术还公开了如上所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱在鉴别刺猬紫檀真伪方面的应用。进一步地，其应用方法为：疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱与所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱对比，根据其共有特征峰的有无，进行刺猬紫檀真伪鉴别。进一步地，所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱的获得除色谱柱外，采用了如上所述的方法制备供试品溶液和进行HPLC检测；当所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱采用AgilentEclipseXDB-C18，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm时，将所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱通过相似度分析软件与所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱进行多点校正和共有特征峰匹配的方式分析，对于相似度≥0.9，且与共有特征峰对应的保留时间31.862min、35.231min、46.415min、58.021min、63.243min、84.681min，分别相比相对标准偏差R本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，具有6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰的峰面积最大；以该峰面积最大的所述特征峰为参照峰，6个所述特征峰的相对保留时间tg分别为：0.376，0.416，0.548，0.685，0.837，1.000，RSD％<0.3％。

【技术特征摘要】
1.一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，具有6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰的峰面积最大；以该峰面积最大的所述特征峰为参照峰，6个所述特征峰的相对保留时间tg分别为：0.376，0.416，0.548，0.685，0.837，1.000，RSD％<0.3％。2.如权利要求1所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，6个所述特征峰的相对峰面积分别为：0.0336，0.0547，0.0090，0.0222，0.0039，1.000，RSD<1.5。3.一种如权利要求1所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、供试品溶液的制备：称取刺猬紫檀心材部分木屑，加入甲醇、高纯水，震摇，超声提取，滤纸过滤，微孔滤膜过滤，得到所述供试品溶液；步骤二、HPLC检测：将所述步骤一得到的供试品溶液进行HPLC检测，色谱条件为：AgilentEclipseXDB-C18，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；以水为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0～20min，流动相B的体积百分含量由8％提高至23％，流动相A的体积百分含量由92％降低至77％；从20～33min,流动相B的体积百分含量为23％，流动相A的体积百分含量为77％；从33～43min，流动相B的体积百分含量由23％提高至30％，流动相A的体积百分含量由77％降低至70％；从43～53min,流动相B的体积百分含量30％，流动相A的体积百分含量为70％；从53～69min，流动相B的体积百分含量由30％提高至38％，流动相A的体积百分含量由70％降低至62％；从69～76min，流动相B的体积百分含量38％，流动相A的体积百分含量为62％；从76～91min，流动相B的体积百分含量由38％提高至49％，流动相A的体积百分含量由62％降低至51％；从91～92min，流动相B的体积百分含量49％，流动相A的体积百分含量为51％；从92～95min，流动相B的体积百分含量由49％降低至8％，流动相A的体积百分含量由51％提高至92％；从95～103min，流动相B的体积百分含量8％，流动相A的体积百分含量为92％；检测波长为290nm；柱温30℃；流速1.0mL/min；得到HPLC检测结果。4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤一具体为：称取刺猬紫檀心材部分木屑0.2g，置于50mL离心管中，加入5mL甲醇、5mL高纯水，震摇5min，超声提取5min，滤纸过滤，再以0.2μm的微孔滤膜过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏建华，梁希扬，魏霜，刘晓莹，吴剑光，
申请(专利权)人：汕头出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44