一种生鲜食材的预处理方法及氨基酸含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种生鲜食材的预处理方法及氨基酸含量测定方法，生鲜食材的预处理方法为：利用微波消解对生鲜食材进行酸水解，包括以下步骤：(a)样品提取；(b)微波水解；(c)粗测水解液浓度；(d)测定液制备。本发明专利技术还公开了一种生鲜食材氨基酸含量测定方法，该方法取自预处理方法制备的测定液，利用全自动氨基酸分析仪测量氨基酸含量，包括以下步骤，(1)标准上机液配置；(2)标准上机液测定；(3)生鲜食材中氨基酸含量的测定。本发明专利技术预处理过程简单、样品水解速度快，具有操作安全、无污染等优点。

A Pretreatment Method and Amino Acid Content Determination Method for Fresh Food Material

【技术实现步骤摘要】
一种生鲜食材的预处理方法及氨基酸含量测定方法
本专利技术涉及生鲜食材预处理
，尤其涉及一种生鲜食材的预处理方法及氨基酸含量测定方法。
技术介绍
氨基酸是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后的化合物，氨基酸分子中含有氨基和羧基两种官能团。与羟基酸类似，氨基酸可按照氨基连在碳链上的不同位置而分为α～，β～，γ～...w～氨基酸，但经蛋白质水解后得到的氨基酸都是α～氨基酸，而且仅有二十几种，他们是构成蛋白质的基本单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。氨基酸分为必需氨基酸和非必需氨基酸。必需氨基酸是指人体自身(或其它脊椎动物)不能合成或者合成速度不能满足人体需要，必须从食物中摄取的氨基酸。它是人体(或其它脊椎动物)必不可少，而机体又不能合成的，必须从食物中补充的氨基酸，称为必需氨基酸。非必需氨基酸可在动物体内合成，作为营养源不需要从外部补充的氨基酸。现有的氨基酸试样水解是在水解管中加10～15ml6mol/L盐酸溶液，苯酚3～4滴，将水接管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近0Pa)，然后充入氮气，重复抽真空～充入氮气3次后，在充氮气状态下封口或柠紧螺丝盖，将已封口的水解管放在110℃±1℃的电热鼓风恒温箱或水解炉内，水解22h后，取出，冷却至室温。步骤相对较繁琐复杂，前处理过程时间较长，导致氨基酸的测定时间较长，增加检测成本，减低检测效率。因此，专利技术人致力于设计一种生鲜食材的预处理方法及氨基酸含量测定方法以解决上述问题。
技术实现思路
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本专利技术的目的在于：提供一种生鲜食材的预处理方法，快速水解样品，制备样品测定液，缩短预处理时间，降低预处理成本。本专利技术的另一个目的在于：提供一种生鲜食材的氨基酸含量测定方法，快速、准确并高效测量氨基酸含量。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种生鲜食材的预处理方法，包括以下步骤：(a)样品提取：称取0.1～2.0g样品，置于微波消解罐中，加入5～15ml体积分数为50％盐酸水溶液，再加入30～50mg苯酚，混合均匀；所述步骤(a)中，加入苯酚的作用在于：苯酚与溶液中的溶解氧反应生成醌，从而保护水解的氨基酸。(b)微波水解：迅速安装微波消解罐于微波消解仪上进行微波水解，设置微波消解仪在50℃～70℃温度中保持反应，防止溶液爆沸，然后再升至140℃～160℃的水解温度中保持水解反应，反应完成后，停止加热，待温度显示至室温时，取出微波消解罐，水解制成水解液；微波消解仪原理：在微波电场的作用下，以每秒24.5亿次的速率不断改变其正负方向，使分子产生高速的碰撞和摩擦而产生高热，同时在微波电场的作用下，溶液体系中的离子定向流动，形成离子电流，离子在流动过程中与周围的分子和离子发生高速摩擦和碰撞,使微波能转为热能。本专利技术利用微波消解仪的微波加热优势和特性，向消解罐中的待水解样中加入盐酸，形成强酸溶液，利用微波体加热性质，溶液内外同时加热，加热更快速，更均匀，提高了效率，同时，在密闭高压的微波消解罐中进行，压力体系能产生过热现象(加热到比常压下沸点更高的温度)，大大提高水解速度。(c)粗测水解液浓度：将水解液转移至50ml比色管中，用体积分数为50％的盐酸水溶液定容至刻度，制成待测液，将待测液与标准液进行比色，粗略测出待测液浓度；(d)测定液制备：准确移取1～2ml待测液于15ml试管内，在40～50℃水浴下氮吹干，形成残留物，加入1～3ml去离子水，溶解残留物，再次在水浴下氮吹干，重复加入去离子水并水浴氮吹干，加入1～2mlpH2.2柠檬酸钠缓冲溶液，将试管放置于超声波溶解仪中，超声波溶解处理，用孔径为0.22μm的聚醚砜滤膜过滤，制成样品测定液。上述步骤(d)中，孔径为0.22μm的聚醚砜滤膜为水系滤膜，由于该测定液主体是水，故选择水系滤膜，过滤膜的主要作用是除去测定液中的固体杂质，防止杂质堵塞色谱柱。超声波溶解原理：主要是"空化效应"引起的,空化效应使溶液产生局部高温和高压,空化效应在溶液中形成的气泡破裂后,形成强大的冲击波,使溶液湍流加速,同时,超声波引起溶剂的机械振动,可以加快热传递,使溶剂受热均匀,使溶质整体受热均匀,同时加快了溶质分散,也加快了溶解。进一步，所述步骤(b)具体为，迅速安装微波消解罐于微波消解仪上进行微波水解，微波消解仪设定在4～6min内从室温逐渐升高至50℃～70℃，保持50℃～70℃持续加热3～10min,防止爆沸，调整微波消解仪温度，使其温度在3～5min内从50℃～70℃升至140℃～160℃，保持140℃～160℃持续微波加热15～25min，停止加热，待温度显示至室温时，取出微波消解罐。进一步，所述步骤(b)中，微波水解功率为800～1200W，以便提高水解效率，同时使水解过程更加节能、环保，该微波水解功率根据处理的样品量选取，当微波消解仪满负荷运行时，微波水解功率选择1200W，当样品量低于1/3时，微波水解功率选择800W。进一步，所述步骤(c)中，水解液转移至50ml比色管的方法为：将微波消解罐中的水解液倒入50ml比色管中，用15～25ml体积分数为50％的盐酸水溶液至少分三次洗涤微波消解罐，使微波消解罐中的残留样品在酸性环境下迅速水解成氨基酸，将微波消解罐的洗涤液倒入50ml比色管中，混合均匀。进一步，所述步骤(d)中，超声波溶解仪的超声波强度为0.3～1W/cm2,超声波溶解温度为20～60℃，超声处理时间为3～10min。本专利技术的另一个目的通过下述技术方案实现：一种生鲜食材的氨基酸含量测定方法，该测定方法取自上述生鲜食材预处理方法制得的样品测定液测定生鲜食材的氨基酸含量，所述生鲜食材的氨基酸含量测定方法包括如下步骤：(1)标准上机液配置：取2.5μmol/ml的混合氨基酸标准储备液0.5ml于5mL容量瓶中，用0.1mol/L的盐酸溶液定容至刻度，混合均匀，制成浓度为100nmol/ml标准上机液或分别制成浓度为5、25、100、250、1000nmol/ml(即为0.1、0.5、2、5、20nmol/20μL)的标准上机液；(2)标准上机液测定：吸取浓度为100nmol/ml的标准上机液注入全自动氨基酸分析仪，采用外标法单点校正测定峰面积，或分别吸取不同浓度的标准上机液注入全自动氨基酸分析仪，采用外标法测定峰面积并制作标准曲线；(3)生鲜食材中氨基酸含量的测定：取所述预处理方法制得的样品测定液，注入全自动氨基酸分析仪，采用外标法定量计算样品中氨基酸的含量。进一步，所述步骤(2)和(3)中，全自动氨基酸分析仪的色谱条件为，色谱柱填充材料为磺酸型阳离子树脂，柱温为45～65℃，进样体积15～25uL，检测波长为440nm和570nm。进一步，所述步骤(2)和(3)中，全自动氨基酸分析仪采用梯度洗脱，并发生衍生化反应，洗脱流速为0.3～0.5ml/min，梯度洗脱程序如下：，其中，B1为5.8～6.5g柠檬酸钠、0.22～0.25g氢氧化钠、5.4～5.9g氯化钠、19～21g柠檬酸、128～142ml乙醇和3.5～4.5ml聚氧乙烯月桂醚混合均匀并用水定容至1000mL制备而成的混合溶液，B2为7.0～8.0g柠檬酸钠、0.7～0.9g氢氧化钠、6.7～7.4g氯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生鲜食材的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)样品提取：称取0.1～2.0g样品，置于微波消解罐中，加入5～15ml体积分数为50％盐酸水溶液，再加入30～50mg苯酚，混合均匀；(b)微波水解：迅速安装微波消解罐于微波消解仪上进行微波水解，设置微波消解仪在50℃～70℃温度中保持反应，然后再升至140℃～160℃的水解温度中保持反应，反应完成后，停止加热，待温度显示至室温时，取出微波消解罐，水解制成水解液；(c)粗测水解液浓度：将水解液转移至50ml比色管中，用体积分数为50％盐酸水溶液定容至刻度，制成待测液，将待测液与标准液进行比色，粗略测出待测液浓度；(d)测定液制备：准确移取1～2ml待测液于15ml试管内，在40～50℃水浴下氮吹干，形成残留物，加入1～3ml去离子水，溶解残留物，再次在水浴下氮吹干，重复加入去离子水并水浴氮吹干，加入1～2ml pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液，将试管放置于超声波溶解仪中，超声波溶解处理，用孔径为0.22μm的聚醚砜滤膜过滤，制成样品测定液。

【技术特征摘要】
1.一种生鲜食材的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)样品提取：称取0.1～2.0g样品，置于微波消解罐中，加入5～15ml体积分数为50％盐酸水溶液，再加入30～50mg苯酚，混合均匀；(b)微波水解：迅速安装微波消解罐于微波消解仪上进行微波水解，设置微波消解仪在50℃～70℃温度中保持反应，然后再升至140℃～160℃的水解温度中保持反应，反应完成后，停止加热，待温度显示至室温时，取出微波消解罐，水解制成水解液；(c)粗测水解液浓度：将水解液转移至50ml比色管中，用体积分数为50％盐酸水溶液定容至刻度，制成待测液，将待测液与标准液进行比色，粗略测出待测液浓度；(d)测定液制备：准确移取1～2ml待测液于15ml试管内，在40～50℃水浴下氮吹干，形成残留物，加入1～3ml去离子水，溶解残留物，再次在水浴下氮吹干，重复加入去离子水并水浴氮吹干，加入1～2mlpH2.2柠檬酸钠缓冲溶液，将试管放置于超声波溶解仪中，超声波溶解处理，用孔径为0.22μm的聚醚砜滤膜过滤，制成样品测定液。2.根据权利要求1所述的生鲜食材的预处理方法，其特征在于，所述步骤(b)具体为，迅速安装微波消解罐于微波消解仪上进行微波水解，微波消解仪设定在4～6min内从室温逐渐升高至50℃～70℃，保持50℃～70℃持续加热3～10min，调整微波消解仪温度，使其温度在3～5min内从50℃～70℃升至140℃～160℃，保持140℃～160℃持续微波加热15～25min，停止加热，待温度显示至室温时，取出微波消解罐。3.根据权利要求1所述的生鲜食材的预处理方法，其特征在于，所述步骤(b)中，微波水解功率为800～1200W。4.根据权利要求1所述的生鲜食材的预处理方法，其特征在于，所述步骤(c)中，水解液转移至50ml比色管的方法为：将微波消解罐中的水解液倒入50ml比色管中，用15～25ml体积分数为50％的盐酸水溶液至少分三次洗涤微波消解罐，将微波消解罐的洗涤液倒入50ml比色管中，混合均匀。5.根据权利要求1所述的生鲜食材的预处理方法，其特征在于，所述步骤(d)中，超声波溶解仪的超声波强度为0.3～1W/cm2,超声波溶解温度为20～60℃，超声处理时间为3～10min。6.一种生鲜食材的氨基酸含量测定方法，其特征在于，取如权利要求1～5中任一项所述生鲜食材的预处理方法制得的样品测定液测定生鲜食材的氨基酸含量，所述生鲜食材的氨基酸含量测定方法包括如下步骤：(1)标准上机液配置：取2.5μmol/ml的混合氨基酸标准储备液0.5ml于5mL容量瓶中，用0.1mol/L的盐酸溶液定容至刻度，混合均匀，制成浓度为100nmol/ml标准上机液或分别制成浓度为5、25、100、250、1000nmol/ml的标准上机液；(2)标准上机液测定：吸取浓度为100nmol/ml的标准上机液注入全自动氨基酸分析仪，采用外标法单点校正测定峰面积，或分别吸取不...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄同珍，
申请(专利权)人：东莞市中鼎检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44