一种通过形态优化定向提高丝状真菌代谢产量的突变菌株构建方法技术

一种通过形态优化定向提高丝状真菌代谢产量的突变菌株构建方法，包括：将丝状真菌在液体培养基中培养；提取全基因组；设计引物从丝状真菌全基因组中扩增目的形态基因片段；将目的基因片段与载体连接构建用于调控形态基因表达的载体；载体转化丝状真菌，利用载体上的抗性基因筛选转化子；将突变株接入种子瓶中，培养一定时间后，过滤收集菌丝，染色后显微镜观察形态；种子转接入发酵培养基后，隔一定时间取样，过滤收集菌丝，染色后显微镜观察形态；测定产物效价，筛选高产菌株。本发明专利技术改造菌菌丝皆多分枝且缠绕聚集成球，球外菌丝分枝较短，菌球致密，且大小均一，发酵液粘度较低。

A Mutant Strain Construction Method for Improving Metabolic Yield of Filamentous Fungi by Morphological Optimization and Orientation

【技术实现步骤摘要】
一种通过形态优化定向提高丝状真菌代谢产量的突变菌株构建方法
本专利技术涉及一种通过形态优化定向提高丝状真菌代谢产量的突变菌株构建方法，属于生物

技术介绍
人类利用真菌已经有相当长的历史，但是直到第一次世界大战以后，随着液体发酵技术的兴起，丝状真菌发酵才逐渐在工业领域蓬勃发展起来。现在丝状真菌已被广泛用于发酵工业中抗生素(青霉素、头孢霉素等)、有机酸(柠檬酸、葡萄糖酸、延胡索酸等)和酶制剂(淀粉酶、果胶酶、纤维素酶等)的生产，这些产品在医药、食品和其他工业领域都有着很大的需求。在发酵过程中，丝状菌形态变化情况复杂，在生长的不同阶段呈现出截然不同的形态特征。在生长初期，营养体结构通常是一根管状细丝，由孢子萌发而成，称为菌丝；随着菌体的生长，菌丝开始出现分叉，最终形成若干菌丝，称为菌丝体。在液体发酵中，菌丝体形态与多种因素相关，除了与控制该菌种形态相关的基因型有关外，还取决于接种体的性质和所处的发酵环境，包括培养基组成、温度、pH值和机械剪切力等等。菌丝或在培养基中呈离散状态生长，称为离散菌丝，或缠在一起形成聚集体，一般将松散的菌丝聚集体称为菌丝团而将结构紧密的聚集体称为菌丝球。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过形态优化定向提高丝状真菌代谢产量的突变菌株构建方法，其特征在于：包括下列步骤：步骤1：提取丝状真菌的全基因组DNA；步骤2：racA基因敲低菌的构建，包括以下步骤：第一步：以步骤1提取到的全基因组DNA为模板，以引物racAF和racAR进行扩增，纯化后与干扰载体pJL43‑RNAi分别使用限制性内切酶NcoI进行单酶切，并胶回收纯化酶切片段；RacAF：CCATG

【技术特征摘要】
1.一种通过形态优化定向提高丝状真菌代谢产量的突变菌株构建方法，其特征在于：包括下列步骤：步骤1：提取丝状真菌的全基因组DNA；步骤2：racA基因敲低菌的构建，包括以下步骤：第一步：以步骤1提取到的全基因组DNA为模板，以引物racAF和racAR进行扩增，纯化后与干扰载体pJL43-RNAi分别使用限制性内切酶NcoI进行单酶切，并胶回收纯化酶切片段；RacAF：CCATGCCATGGGCGGTAGGAAAGTATGTTGRacAR：CCATGCCATGGGAATACACTCTTCAGGTTGC第二步：将第一步得到的酶切纯化后的racA基因片段和pJL43-RNAi片段进行连接后，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，通过氨苄抗性LB平板筛选正确连接的阳性克隆；挑取阳性克隆，接种到含氨苄的LB液体培养基中，培养12-16h后从菌液中提取得到重组载体pracA-RNAi；第三步：将重组载体pracA-RNAi通过萌发孢子电转化的方法转至黑曲霉中，在含30μg/mL腐草霉素的CM平板上培养4～5d，筛选...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑之明，刘会，孙小雯，赵根海，王鹏，王丽，王晗，倪文枫，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：安徽,34