检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒及其应用制造技术

一种检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒及其应用，所述检测试剂盒包含：检测有效量WISP1浓度的试剂；选自下组的一种或多种物质：乙二胺四乙酸二钠、清洗液、生物素化抗体、链霉亲和素溶液、基质试剂和终止液，透过比较健康者及罹患乳癌患者血清样本中WISP1的浓度变化，以定义WISP1的浓度改变对于罹患乳癌风险高低之关联性，做为该试剂盒预测高罹患乳癌风险及复发侦测。

Detection of WISP1 Concentration in Biological Samples and Preparation of Test Kit for Breast Cancer Screening and Detection of Recurrence and Its Application

【技术实现步骤摘要】
检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒及其应用
本专利技术为一种检测乳癌的相关预测试剂盒及其应用，尤指一种检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒及其应用，可藉由测定生物样本中的WISP1的浓度多寡来检测乳癌筛检、疗效及复发与否。
技术介绍
乳癌是女性最常被诊断的恶性肿瘤，即使接受了积极的治疗，大部分晚期的乳癌的受试者最后仍然会产生乳癌复发及转移，造成了愈后不佳。因此乳癌的早期诊断，复发的早期发现，以及对于乳癌治疗疗效的评估，是对于乳癌愈后改善的3大重点方向。然而到目前为止，并没有好的肿瘤指标可以满足上述的要求，现今最常用的乳癌肿瘤指标是CEA以及CA153，而这2者对乳癌的早期诊断及复发侦测的敏感度及特异度都不能让人满意。根据上述缺失，先前技术仍有改善空间。
技术实现思路
本专利技术系提供一种检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒及其应用，所述WISP1系指可被Wnt-1诱导的蛋白质1(Wnt-1inducedsecretedprotein1)，至少包括：该试剂盒检测源自检测者之血清样本中WISP1的浓度；比较健康者及罹患乳癌患者血清样本中WISP1的浓度变化，以定义WISP1的浓度改变对于罹患乳癌风险高低之关联性；预测参考值以健康者血清中WISP1的浓度平均值为631.5pg/ml，罹患乳癌患者血清中WISP1的浓度平均值为934.5pg/ml，因此，当检测者血清中WISP1的浓度等于或高于934.5pg/ml时，可做为该试剂盒预测高罹患乳癌风险及复发侦测。其中WISP1的浓度低于934.5pg/ml时，表示乳癌患者手术、化疗或标靶治疗有效(预后良好)；WISP1的浓度等于或高于934.5pg/ml时，表示乳癌患者接受乳癌治疗后有复发及转移之高度风险(预后不良)，透过测量WISP1的浓度变化，可作为乳癌患者治疗反应和健康恢复状况的指标。本专利技术之优点在于：首先，本专利技术之WISP1能快速评估药物疗效，经由确认受试者WISP1之浓度即可确认，若WISP1浓度等于或高于934.5pg/ml则表示受试者为乳癌患者之高风险群，若WISP1浓度低于934.5pg/ml则表示受试者属于乳癌患者之低风险族群。再者，本案之WISP1有高度的敏感度57％及特异性96％，藉由受试者的血清比较健康受试者血清中的WISP1浓度，即可评估是否为罹患乳癌肿瘤的高危险群，因此WISP1系为较佳评估乳癌肿瘤的指标。接下来列举一较佳实施例，并配合图式及图号，对本专利技术做进一步的说明，期能使贵审查委员对本专利技术有更详细的了解，并使熟悉该项
者能据以实施。附图说明图1：为本案之乳癌受试者及健康受试者血清中的WISP1浓度的中位数。图2：为本案之乳癌受试者手术前后血清中WISP1、CEA及CA153浓度的平均值。图3：为本案之乳癌受试者手术后血清中WISP1和健康受试者WISP1浓度的平均值。图4：为本案之乳癌受试者及健康受试者中的WISP1之ROC分析曲线。具体实施方式参阅图1～图4，本专利技术揭露一种检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的试剂盒中的应用。其特征在于，所述生物样品选自于获自对象的血液或血清样本，所述检测血清样本的方法为酵素结合免疫吸附分析法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。本专利技术另提供一种检测试剂盒，其包含：检测有效量WISP1浓度的试剂；选自下组的一种或多种物质：乙二胺四乙酸二钠、清洗液、生物素化抗体、链霉亲和素溶液、基质试剂和终止液。其特征在于，当检测结果显示健康者血清中WISP1的浓度平均值为631.5pg/ml，罹患乳癌患者血清中WISP1的浓度平均值为934.5pg/ml，因此，当检测者血清中WISP1的浓度等于或高于934.5pg/ml时，可做为该试剂盒预测高罹患乳癌风险及复发侦测。当WISP1的浓度低于934.5pg/ml时，表示乳癌患者手术、化疗或标靶治疗有效，表示预后良好；WISP1的浓度等于或高于934.5pg/ml时，表示乳癌患者接受乳癌治疗后有复发及转移之高度风险，表示预后不良，透过测量WISP1的浓度变化，可作为乳癌患者治疗反应和健康恢复状况的指标。以下为实施WISP1浓度使用酵素结合免疫吸附分析法进行检测，其步骤如下：1.从患者血液采集至含有乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsaltdihydrate,EDTA-2Na)的容器，再进行3000g、15分钟的离心，接着收取100ul的上清液，此上清液即为血浆。2.将上述100ul的血浆填入well(培养皿)中，并置放于震荡器上，以室温下反应2.5小时后，再将well内的液体去掉。3.加入300ul的清洗液(1Xwashbuffer)至well中清洗三次，于第三次时将well中的液体完全去除。4.加入100ul的生物素化抗体(biotinylatedantibody)于well中，并置于震荡器上，在室温反应1小时候将well中的液体去除。5.加入300ul的清洗液(1Xwashbuffer)至well中清洗三次，于第三次时将well中的液体完全去除。6.加入100ul的链霉亲和素溶液(streptavidinsolution)于well中，并置于震荡器上，在室温下反应45分钟后，将well中的液体去除。7.再次加入300ul的1X清洗液(1Xwashbuffer)至well中清洗三次，于第三次时将well中的液体完全去除。8.加入100ul的TMB一步骤基质试剂(TMBOne-StepSubstrateReagent)于well中，并置于震荡器上，在室温下反应30分钟。9.加入50ul的终止液(Stopsolution)于well中。10.接着将well置入酵素免疫分析测读仪中，以波长450nm读取结果。本专利技术根据乳癌筛检结果进行治疗、追踪及评估如下：乳癌筛检：当健康检查时，若个体血清中WISP1的浓度等于或高于934.5pg/mL，要怀疑有乳癌发生的可能性，应立即安排其它检查。乳癌治疗后追踪:若乳癌患者在治疗后的追踪期间血液中WISP1的浓度等于或高于934.5pg/mL，要强烈怀疑复发或转移，马上安排进一步检查。乳癌治疗疗效评估:对乳癌病人接受手术、化疗、标靶或其它治疗，若血清中WISP1的浓度降至934.5pg/mL以下，代表此治疗有疗效，若WISP1的浓度没有降至934.5pg/mL以下，建议立即改换其它治疗方式。图1系将14位乳癌受试者及31位健康受试者血清中的WISP1浓度取中位数进行比较，31位的健康受试者血清中WISP1浓度之中位数是587.8pg/ml，而乳癌受试者血清中WISP1浓度之中位数是939.5pg/ml，明显可得到乳癌受试者血清中WISP1浓度之中位数高于健康受试者的WISP1浓度。图2揭露乳癌受试者手术前后血清中WISP1、癌胚抗原(carcino-embryonicantigen，CEA)及癌症抗原15-3(CancerAntigenCA15-3，CA153)浓度的变化。乳癌受试者手术前CA153的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测生物样品中WISP1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的试剂盒中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物样品选自于获自对象的血液或血清样本。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测血清样本的方法为酵素结合免疫吸附分析法。4.一种用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒，其包含：检测有效量WISP1浓度的试剂；选自下组的一种或多种物质：乙二胺四乙酸二钠、清洗液、生物素化抗体、链霉亲和素溶液、基质试剂和终止液。5.如权利要求4所述的试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：江坤俊，叶俊男，庄宏亨，叶大森，
申请(专利权)人：长庚医疗财团法人基隆长庚纪念医院，长庚大学，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71