甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用；一种抗副猪嗜血杆菌药物，它包括：甘草查尔酮A，以及药学上可接受的辅料和辅助性成分；实验结果表明，不同浓度甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌体外生长的抑制作用没有明显差异，同时对细菌生物被膜的形成也没有影响；体内实验结果发现甘草查尔酮A可适当增强小鼠免疫器官指数以及提高小鼠肠道菌群的丰度和菌群结构；可以提高小鼠清除副猪嗜血杆菌，同时增强保护感染作用的能力，可以延迟感染副猪嗜血杆菌小鼠的死亡时间。

Application of licorice chalcone A in the preparation of anti Haemophilus Haemophilus

【技术实现步骤摘要】
甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用
本专利技术属活性成分抗菌应用
，具体涉及甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用。
技术介绍
副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis）是共栖于猪上呼吸道的一种革兰阴性小杆菌，引发猪副猪嗜血杆菌病或猪格拉斯病（Glasser’sdisease），临床上以多发性浆膜炎、关节炎或败血症为典型症状的全身性病变。2周龄～4月龄猪群是副猪嗜血杆菌的主要感染对象，发病率和死亡率最高分别可达40%和50%。由于副猪嗜血杆菌存在多种血清型，副猪嗜血杆菌疫苗的交叉免疫效果并不理想，目前尚无有效的预防和控制副猪嗜血杆菌爆发与流行的最有效措施。在新型抗菌药物和药物靶标开发中，植物是最主要的来源之一。现在，世界上大约60%人口仍然依靠植物药作为主要的健康保证，而传统中药是植物药宝库中的主要部分。所以，寻找有新作用机制的抗副猪嗜血杆菌中药提取化合物显得尤为重要。甘草是一种多年生草本植物，被历代名医尊称为“众药之王”，素有“十方九草”之称，具有泻火解毒、健脾补气、润肺止咳、缓急止痛和缓和药性等功效。现代医学研究也表明，甘草除了可以作为甜味剂、抗氧化剂和美白剂外，还具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌、抗高血脂以及增强细胞免疫等多种药理活性。甘草有效成分主要有黄酮类、三萜类和多糖类化合物。多糖是一种由糖苷键连接起来的醛糖或酮糖组成的天然大分子，天然植物活性多糖具有激活、增强、调节和修复机体免疫能力以及抵抗炎症抗炎、病毒和肿瘤等多种生理功能。甘草多糖是甘草中的一类α-D-吡喃多糖，研究证明其能够促进淋巴细胞增殖、增强吞噬细胞的吞噬功能。甘草查尔酮A(licochalconeA)是一种甘草中的黄酮类化合物，大量分布于甘草根茎中；1975年，SaitohT等首次从甘草中分离得到了甘草查尔酮A，并证明了它的结构，在随后的临床及药理研究中表明，甘草查尔酮A具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗利什曼原虫病（尤指黑热病）、抗肿瘤、免疫促进和雌激素样等多种生物活性，在食品和医药工业中有广泛的用途。由于甘草对多种疾病表现了良好的预防和治疗作用且毒副作用较小，近年来对甘草潜在的多种药理活性的研究和挖掘一直是国内外药理界的研究热点。甘草查尔酮A可通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞转移和侵袭、抑制肿瘤血管生成以及诱导肿瘤细胞自噬等多种机制发挥抗肿瘤活性。同时，甘草查尔酮A对恶性疟原虫、利什曼原虫和刚地弓形虫，白色念珠菌、革兰氏阳性球菌、杆菌和棒型菌具有一定的活性，研究表明甘草查尔酮A对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离株有很好的抵抗活性，对悬浮菌MICs值和MBCs值分别为1-8μg/mL和2-16μg/mL，而对生物被膜的MIBCs值和MBBCs值分别为8-64μg/mL和≥1024μg/mL。此外，甘草查耳酮A对微球菌、肠系膜串珠菌、结核分枝杆菌和幽门杆菌起到一定的杀菌作用。甘草查尔酮A对金黄色葡萄菌在内的细菌表现出一定的抗菌能力；国外研究还发现甘草查耳酮A体外具有抗幽门杆菌和MRSA的活性。但是国内外未见甘草查耳酮A抗副猪嗜血杆菌的相关研究报道，这严重阻碍了甘草查耳酮A作为细菌抑制剂的进一步开发和利用，所以对甘草查耳酮A抗副猪嗜血杆菌的研究和应用迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术目的是提供甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用。甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用。一种抗副猪嗜血杆菌药物，它包括：甘草查尔酮A，以及药学上可接受的辅料和辅助性成分。本专利技术提供了甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用；一种抗副猪嗜血杆菌药物，它包括：甘草查尔酮A，以及药学上可接受的辅料和辅助性成分；实验结果表明，不同浓度甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌体外生长的抑制作用没有明显差异，同时对细菌生物被膜的形成也没有影响；体内实验结果发现甘草查尔酮A可适当增强小鼠免疫器官指数以及提高小鼠肠道菌群的丰度和菌群结构；可以提高小鼠清除副猪嗜血杆菌，同时增强保护感染作用的能力，可以延迟感染副猪嗜血杆菌小鼠的死亡时间。附图说明图1甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌生长速率的影响；图2分光光度法(A)和(B)平板法观察甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌生物被膜形成的影响；图中a、b、c、d、e和f分别代表10μg/mL，10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL甘草查尔酮A；图3甘草查尔酮A对小鼠肠道菌群组成(门水平)的影响；A、B、C和D分别代表对照组、低剂量、中剂量和高剂量组；图4甘草查尔酮A对小鼠肠道菌群组成(纲水平)的影响；A、B、C和D分别代表对照组、低剂量、中剂量和高剂量组。具体实施方式本专利技术实验材料来源：1）副猪嗜血杆菌H12L1株，河南科技大学洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室；2）清洁级6-8周龄昆明小鼠（18.0±2.0g），郑州中原动物实验中心；3）甘草查尔酮A（含量：20mg，HPLC≥98%，货号：RS1011-20MG），北京酷来搏科技有限公司产品。实施例1甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌的体外抑制作用实验1、甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌生长速度的影响将活化好的副猪嗜血杆菌转接种于TSA液体培养基（含新生牛血清和NAD），于37°C200r/min振荡培养过夜；然后将菌液（106CFU/mL）分别转接于终浓度为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL甘草查尔酮A的新鲜液体培养基中，于37°C培养，每1h取出100μL菌液用无菌PBS连续10倍稀释，然后取100μL菌液涂布于含新生牛血清和NADTSB固体培养基，每个稀释度重复3次，培养过夜后计数，绘制生长曲线；甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌生长速率的影响如图1所示，10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL的甘草查尔酮A在不同时间点与空白对照组相比对副猪嗜血杆菌的生长速率差异无统计学意义。2、甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌生物被膜形成的影响细菌生物被膜的形成采用96孔微孔板结晶紫染色法进行；挑取副猪嗜血杆菌单菌落接种于TSA液体培养基（含新生牛血清和NAD），37°C培养过夜，按1:20比例转接于96孔细胞培养板，分别加入终浓度为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL的甘草查尔酮A，同时做空白对照孔，每孔重复3次。孵育48h后，未附着的细菌用无菌PBS轻轻洗涤3次除去，甩干后加入1%结晶紫染色45min，蒸馏水三次水洗以去除孔中的浮色重复，37°C放置10min干燥，然后200μL/孔乙醇溶解，在D590nm波长下检测吸光度值。同时将单菌落培养的菌液转接到含有40mg/L刚果红和20mg/L考马斯亮蓝的无NaCl的LB固体培养基上，37°C恒温倒置培养48h，观察细菌的菌落形态。分光光度法观察甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌生物被膜形成的影响，在同一时间点，与空白对照组相比，当添加不同浓度甘草查尔酮A后，并不会显著影响副猪嗜血杆菌在聚乙烯板孔内形成生物被膜的量（图2）。实施例2甘草查尔酮A对小鼠生长和肠道菌群的影响1、甘草查尔酮A对小鼠生长的影响72只小鼠随机平均分为低剂量组、中剂量组、高剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.甘草查尔酮A在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用。2.一种抗副猪嗜血...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨裕，杨志强，杨春雷，贾永鑫，
申请(专利权)人：山西省农业科学院饲料兽药研究所，
类型：发明
国别省市：山西,14