一种抗肿瘤的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术实施例公开了一种抗肿瘤的多肽及其应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本发明专利技术提供的多肽能够强有力地抑制β‑catenin蛋白的转录活性并抑制癌细胞的生长，并通过减少调节性T细胞(Treg)和增加CD103+树突细胞来促进细胞毒性T细胞的肿瘤内浸润，从而使癌细胞对免疫检查点抑制剂敏感。

ANTI-TUMOR POLYPEPTIDE AND ITS APPLICATION

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤的多肽及其应用
本专利技术实施例涉及生物
，具体涉及一种抗肿瘤的多肽及其应用。
技术介绍
Wnt/β-连环蛋白(β-catenin，β-cat)途径是Wnt途径中的一种，该途径会导致β-连环蛋白在细胞质中积累并最终会作为属于TCF的转录因子的转录共激活因子/LEF家族易位至细胞核。没有Wnt，β-连环蛋白不会在细胞质中积累，因为有一种破坏复合物通常会降解它。该破坏复合物包括以下蛋白质：Axin，腺瘤病大肠杆菌(APC)，蛋白磷酸酶2A(PP2A)，糖原合成酶激酶3(GSK3)和酪蛋白激酶1α(CK1α)。它通过将β-连环蛋白靶向泛素化而降解β-连环蛋白，随后将其送至蛋白酶体进行消化。Wnt/β-连环蛋白途径在癌症发生和发展中起关键作用。研究表明Wnt/β-cat在逃避免疫监视方面的新兴作用。因此，在肿瘤治疗中靶向该途径具有很好的治疗前景。然而，迄今为止测试的大多数Wnt抑制剂具有有限的功效或产生显着的不良副作用。除了靶向治疗之外，目前还有免疫检查点抑制剂，用于癌症治疗；然而，虽然一小部分患者对免疫疗法表现出前所未有的持久反应，但大多数患者没有反应。
技术实现思路
为此，本专利技术实施例提供一种抗肿瘤的多肽，以解决现有技术中Wnt抑制剂具有有限的功效和不良副作用，以及现有免疫疗法适应患者不响应的问题。为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：根据本专利技术实施例的第一方面提供一种抗肿瘤的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。在本专利技术中对所述多肽的制备方法不做严格限制，例如，可以通过人工合成的方法制备得到。根据本专利技术实施例的第二方面提供一种多肽抑制剂，所述多肽抑制剂包括所述的多肽。根据本专利技术实施例第三方面提供一种所述多肽抑制剂在抑制Wnt/β-cat途径中的应用。根据本专利技术实施例第四方面提供一种所述多肽或所述多肽抑制剂在制备Wnt/β-cat途径依赖性肿瘤药物中的应用。进一步地，所述肿瘤为结直肠癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤或肝癌。根据本专利技术实施例第五方面提供一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括所述多肽或所述多肽抑制剂。根据本专利技术实施例第六方面提供一种所述抗肿瘤药物和PD-1抗体药物联用在制备治疗Wnt/β-cat依赖性肿瘤药物中的应用。进一步地，所述肿瘤为结直肠癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤或肝癌。本专利技术实施例具有如下优点：本专利技术提供的多肽能够强有力地抑制β-cat的转录活性并抑制癌细胞的生长，并通过减少调节性T细胞(Treg)和增加CD103+树突细胞来促进细胞毒性T细胞的肿瘤内浸润，从而使癌细胞对免疫检查点抑制剂敏感。本专利技术提供的多肽还能够增加树突状细胞(DC)浸润，并增加结肠癌模型中活性CD8+T细胞，提高抗肿瘤的效果。附图说明为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。图1为本专利技术实验例1中不同浓度的多肽、ICG-001、LGK-974和厄洛替尼与Colo320DM细胞存活率的关系图；图2为本专利技术实验例1中不同浓度的5-Fu，5-Fu和多肽与Colo320DM细胞存活率的关系图；图3为本专利技术实验例1中多肽对不同肿瘤细胞株的增殖统计图；图4为本专利技术实验例2中多肽处理荷瘤小鼠不同天数肿瘤体积变化图；图5为本专利技术实验例3中多肽对Treg细胞在CT26肿瘤内浸润的影响；图6为本专利技术实验例3中多肽对Treg细胞在LLC1肿瘤内浸润的影响；图7为本专利技术实验例3中多肽对Treg细胞在4T1肿瘤内浸润的影响；图8为本专利技术实验例4中与多肽预处理的CT26细胞共培养的Treg细胞的迁移情况；图9为本专利技术实验例4中与用靶向β-cat的对照非靶向(NT)shRNA或shRNA转导的CT26细胞共培养的Treg细胞的迁移情况；图10为本专利技术实验例4中多肽对CT26细胞中CCL20、CCL22和TGF-β的mRNA表达的影响；图11为本专利技术实验例4中靶向β-cat的对照非靶向(NT)shRNA或shRNA转导的CT26细胞中CCL22、CTNNB1、TGF-β的mRNA表达水平；图12为本专利技术实验例5中多肽处理和未处理的小鼠肿瘤组织中的CD103+树突状细胞所占比例；图13为本专利技术实验例5中、野生型、CT26-NT和CT26-shRNA的小鼠肿瘤组织中的CD103+树突状细胞所占比例；图14为本专利技术实验例5中多肽组和对照组的小鼠模型肿瘤组织中的CD8+/CD45+的表达情况；图15为本专利技术实验例5中多肽组和对照组的小鼠模型肿瘤组织中的CD8+/Treg的表达情况；图16为本专利技术实验例5中多肽组和对照组的小鼠模型肿瘤组织中的GranzymeB+CD8+的表达情况；图17为本专利技术实验例5中野生型、CT26-NT和CT26-shRNA的小鼠模型肿瘤组织中的GranzymeB+CD8+的表达情况；图18为本专利技术实验例5中多肽组和对照组的小鼠模型肿瘤组织中的效应性CD8+的表达情况；图19为本专利技术实验例5中野生型、CT26-NT和CT26-shRNA的小鼠模型肿瘤组织中的效应性CD8+的表达情况；图20为本专利技术实验例5中多肽对CT26细胞中CCL4的mRNA表达水平的影响；图21为本专利技术实验例5中靶向β-cat的对照非靶向(NT)shRNA或shRNA转导的CT26细胞中CCL4的mRNA表达水平；图22为本专利技术实验例6中不同药物处理LLC1模型肿瘤体积变化图；图23为本专利技术实验例6中不同药物处理4T1模型肿瘤体积变化图。图中：*为p＜0.5；**为p＜0.01；***为p＜0.001。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例为一种抗肿瘤多肽，该抗肿瘤多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，共由12个氨基酸组成，具体为：LeuGlnThrLeuArgXaaIleGlnArgXaaLeuAla，其中，Xaa为任意氨基酸，第12位丙氨酸为2-萘基丙氨酸(2-naphthylalanine)；在本专利技术的其他实施例中，本专利技术提供的多肽是如SEQIDNO.1所示氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。上述多肽用常规的Fmoc方法合成(MeienhoferJ.HormonalProteinsandPeptides.AcademicPress，NewYork.1973.SchroderG.LupkeK.ThePeptides.AcacemicPress，NewYork.1965.)。本专利技术又一实施例提供一种多肽抑制剂，该抑制剂包括上述的多肽。本专利技术提实施例还提供一种上述多肽抑制剂在抑制Wnt/β-cat途径中的应用。本专利技术实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗肿瘤的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。2.一种多肽抑制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的多肽。3.权利要求2所述的多肽抑制剂在抑制Wnt/β-cat途径中的应用。4.权利要求1所述的多肽或权利要求2所述的的多肽抑制剂在制备Wnt/β-cat依赖性肿瘤药物中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱棣，冯梅，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31