一种可识别假阳性的农药残留检测方法及卡技术

本发明专利技术公开了一种可识别假阳性的农药残留检测方法及卡。发明专利技术人经研究发现脂肪酶对农药不敏感，普通有机磷和氨基甲酸酯类农药不会抑制脂肪酶的酶活，而蔬菜中的次生代谢物质能抑制广泛应用于农残检测领域的胆碱酯酶的活性。基于此发现，发明专利技术人突破性地将脂肪酶引入农药残留的检测中，从而实现无需预反应直接显色的目的；而脂肪酶的显色结果可以充当对照比色和次生物质检测双重作用，对照和检测通用一种样品液，极大方便地了农药残留检测并可有效识别假阳性。

A False Positive Pesticide Residue Detection Method and Card

【技术实现步骤摘要】
一种可识别假阳性的农药残留检测方法及卡
本专利技术涉及农药残留检测领域，特别涉及一种可识别假阳性的农药残留检测方法及卡。
技术介绍
为有效防治农产品生产过程中的病虫害，一般需要使用农药。目前主要的农药为有机磷、氨基甲酸酯类和菊酯类农药。符合规范地使用农药既可以有效防治病虫害，也不会对人们的健康构成危害。然而，随着农药的长期使用，越来越多的病虫害具有越来越强的抗药性，为了取得令人满意的防治效果，往往需要使用毒性更大的农药，同时使用量、使用频率也越来越高。导致药残留超标现象越来越普遍，严重危害人们的健康。有机磷和氨基甲酸酯类农药会与胆碱酯酶的酶活中心丝氨酸残基结合，导致胆碱酯酶酶活受抑制。胆碱酯酶可水解2,6-二氯靛酚乙酸酯形成使反应体系由红色变为蓝色，形成明显颜色变化过程，而受农药抑制的胆碱酯酶则水解不充分或彻底不水解。利用该原理可制备成农药残留快速检测卡，如刘畅等人发表的期刊文献：试纸法快速检测果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留，该文献详细描述了农残卡制作方法。目前农残速测卡普遍需要预反应10-15min，使农药充分抑制酶活后再重叠显色剂片与酶片进行反应显色，所需时间较长，显色结果需要比色，一般需要另外做空白对照组。与此同时，胆碱酯酶也会受到植物次生物质的抑制而导致假阳性现象，而植物次生物质在果蔬中普遍存在且随着贮存期延长不断增加，不同果蔬所含次生物质对酶活影响程度不一，导致利用胆碱酯酶制作的农残检测卡均有假阳性的现象发生。如作为目前蔬菜检测标准的酶抑制率法国家标准GB/T5009.199-2003及国家食品样品监督管理局发布的《蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测》(KJ201710)，其中蔬菜样品经磷酸盐缓冲液处理后得到的样品待测液含有较多的叶绿素和叶黄素，叶黄素与酶反应的产生的颜色接近，对检测结构影响特别大。特别是颜色较深的蔬菜，处理液颜色更深。一些特殊的蔬菜含有对胆碱酯酶有抑制作用的次生代谢物，在检测中易造成假阳性现象，检测结果不可靠同样会造成不利影响。为识别农药残留检测过程中的假阳性，一般需要对处理液进行相应的处理，如吸附其中的色素、去除其中的次生代谢物等。这些操作一般都比较复杂，耗时较长。这进一步导致检测时间的延长，不利于农药残留的快速检测。脂肪酶是一种脂肪水解酶类，在精细化工、食品加工、油脂工业等领域有广泛应用。脂肪酶作为一种生物源性食品添加剂应用于烘焙面制品中取代其他化学添加剂，改善产品的质量；在洗涤领域可促进脂肪类污渍的快速分解，提高洗涤剂的洗涤能力。开发出一种操作简便同时可以有效识别假阳性的农药残留速测卡具有非常实际的意义。参考文献：葛静,王素利,钱传范,等.韭菜中农药残留酶速测法假阳性消除研究[J].食品科学,2008,29(4):299-301.桑园园,柴丽娜,魏朝俊,等.酶抑制法检测4种辛辣蔬菜农药残留假阳性消除的研究[J].中国农学通报,2009,25(11):60-64.
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便同时可以有效识别假阳性的农药残留速测方法及卡。专利技术人经研究发现脂肪酶对农药不敏感，普通有机磷和氨基甲酸酯类农药不会抑制脂肪酶的酶活，而蔬菜中的次生代谢物质能抑制广泛应用于农残检测领域的胆碱酯酶的活性。基于此发现，专利技术人突破性地将脂肪酶引入农药残留的检测中，从而实现无需预反应直接显色的目的，脂肪酶的显色结果可以充当对照比色和次生物质检测双重作用，对照和检测通用一种样品液。本专利技术所采取的技术方案是：一种可识别假阳性的农药残留检测方法，包括如下步骤：1)制取农药残留待测液；2)将农药残留待测液、胆碱酯酶、显色剂混合，反应显色；3)将农药残留待测液、脂肪酶、显色剂混合，反应显色；4)比较胆碱酯酶和脂肪酶的显色情况，确定农药残留的检测结果。作为上述农药残留检测方法的进一步改进，显色剂为2,6-二氯靛酚乙酸酯。作为上述农药残留检测方法的进一步改进，调节胆碱酯酶和脂肪酶的用量或反应活性，使两者在无抑制状态下的反应显色结果相同。作为上述农药残留检测方法的进一步改进，调节脂肪酶反应活性的化合物选自氯化钙和氯化钴中的至少一种。一种可识别假阳性的农药残留检测卡，包括上封膜、显色底物片、酶片和下封膜，其中一酶片上的酶为胆碱酯酶，另一酶片上的酶为脂肪酶。作为上述农药残留检测卡的进一步改进，显色底物为2,6-二氯靛酚乙酸酯。作为上述农药残留检测卡的进一步改进，显色底物片上涂覆有水溶性隔离胶膜。作为上述农药残留检测卡的进一步改进，酶片还具有显色调节剂，使胆碱酯酶和脂肪酶在无抑制状态下的反应显色结果相同。作为上述农药残留检测卡的进一步改进，调节脂肪酶反应活性的化合物选自氯化钙和氯化钴中的至少一种。一种可识别假阳性的农药残留检测试剂盒，包括显色底物、胆碱酯酶，还包括脂肪酶。作为上述农药残留检测试剂盒的进一步改进，显色底物为2,6-二氯靛酚乙酸酯。作为上述农药残留检测试剂盒的进一步改进，农药残留检测试剂盒还包括显色调节剂，使胆碱酯酶和脂肪酶在无抑制状态下的反应显色结果相同。作为上述农药残留检测试剂盒的进一步改进，调节脂肪酶反应活性的化合物选自氯化钙和氯化钴中的至少一种。本专利技术的有益效果是：本专利技术的农药残留检测方法及卡，可以直接使用待测样品进行检测，无需空白对照即可有效区分农药残留速测过程中的假阳性，大大提高了检测效率。附图说明图1是实施例1农残速测纸条的实物照片及检测结果。具体实施方式一种可识别假阳性的农药残留检测方法，包括如下步骤：1)制取农药残留待测液；2)将农药残留待测液、胆碱酯酶、显色剂混合，反应显色；3)将农药残留待测液、脂肪酶、显色剂混合，反应显色；4)比较胆碱酯酶和脂肪酶的显色情况，确定农药残留的检测结果。如胆碱酯酶和脂肪酶的显色反应都受到抑制，说明待测液中存在同时影响两种酶的次生代谢物质；如胆碱酯酶的显色反应受到抑制，而脂肪酶的显色反应不受抑制，说明待测液中农药残留超标；如胆碱酯酶和脂肪酶的显色反应都不受抑制，说明待测液中农药残留在标准内并没有次生代谢物质。作为上述农药残留检测方法的进一步改进，显色剂为2,6-二氯靛酚乙酸酯。作为上述农药残留检测方法的进一步改进，调节胆碱酯酶和脂肪酶的用量或反应活性，使两者在无抑制状态下的反应显色结果相同。具体的调节方法包括但不限于根据单位胆碱酯酶和脂肪酶水解显色剂的速率调整总酶活；由于脂肪酶的反应活性一般较低，可以通过添加不影响显色的化合物，提高脂肪酶的反应速度。胆碱酯酶和脂肪酶两者在无抑制状态下的反应显色结果相同，可以更为方便地对比并区分检测结果。作为上述农药残留检测方法的进一步改进，调节脂肪酶反应活性的化合物选自氯化钙和氯化钴中的至少一种。氯化钙和氯化钴可以提高脂肪酶的反应活性，减少脂肪酶的用量。可以根据实际情况，结合使用脂肪酶反应活性调节剂和调节脂肪酶的用量，使胆碱酯酶和脂肪酶两者在无抑制状态下的反应显色结果相同。一种可识别假阳性的农药残留检测卡，包括上封膜、显色底物片、酶片和下封膜，其中一酶片上的酶为胆碱酯酶，另一酶片上的酶为脂肪酶。作为上述农药残留检测卡的进一步改进，显色底物为2,6-二氯靛酚乙酸酯。作为上述农药残留检测卡的进一步改进，显色底物片上涂覆有水溶性隔离胶膜。作为上述农药残留本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可识别假阳性的农药残留检测方法，包括如下步骤：1)制取农药残留待测液；2)将农药残留待测液、胆碱酯酶、显色剂混合，反应显色；3)将农药残留待测液、脂肪酶、显色剂混合，反应显色；4)比较胆碱酯酶和脂肪酶的显色情况，确定农药残留的检测结果。

【技术特征摘要】
1.一种可识别假阳性的农药残留检测方法，包括如下步骤：1)制取农药残留待测液；2)将农药残留待测液、胆碱酯酶、显色剂混合，反应显色；3)将农药残留待测液、脂肪酶、显色剂混合，反应显色；4)比较胆碱酯酶和脂肪酶的显色情况，确定农药残留的检测结果。2.根据权利要求1所述的农药残留检测方法，其特征在于：显色剂为2,6-二氯靛酚乙酸酯。3.根据权利要求1所述的农药残留检测方法，其特征在于：调节胆碱酯酶和脂肪酶的用量或反应活性，使两者在无抑制状态下的反应显色结果相同。4.根据权利要求3所述的农药残留检测方法，其特征在于：调节脂肪酶反应活性的化合物选自氯化钙和氯化钴中的至少一种。5.一种可识别假阳性的农药残留检测卡，包括上封膜、...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷达，张联裕，
申请(专利权)人：广州聚佰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44