一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法技术

本发明专利技术提供了一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基，LB固体培养基，MRS固体培养基。步骤2，酵母菌发酵液体菌制备：枯草芽孢杆菌发酵液体菌制备：植物乳杆菌发酵液体菌制备：步骤3，称取菊苣粉，以步骤2制作的发酵液为发酵菌种，按照菌种体积比组合酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌的其中一种或几种发酵；发酵水分为40～60％、发酵温度为25～35℃、发酵时间为24～72h。本发明专利技术优点在于：无环境污染，无能耗，无有害物质产生的方式对其进行处理，提高了提取量。

A Fermentation Method for Increasing the Extraction Quantity of Chlorogenic Acid from Chicory

【技术实现步骤摘要】
一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法
本专利技术涉及绿原酸提取
，特别涉及一种通过固体发酵增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法。
技术介绍
菊苣(CichoriumintybusL.)，别名蓝菊，属于菊科菊苣属多年生植物，原产于国外，在世界上多个国家均有种植，我国的“三北”等地区也有种植。菊苣干物质中粗蛋白(CP)、粗纤维(CF)、粗脂肪(EE)、无氮浸出物等营养物质的含量丰富，均比一般的牧草含量高一些，而且菊苣具有良好的适口性，是种植广泛的经济牧草。由于菊苣含有丰富的营养物质，因此菊苣在畜牧生产中被广泛应用。杨以猪作为试验动物，在猪的饲料中添加一定量的菊苣，结果发现，添加菊苣能够提高猪的生长性能，提高肉品质，降低生产成本。以蛋鸡作为试验动物，在饲料中添加菊苣残渣，结果发现，产蛋率提高，蛋黄蛋白质含量也有显著提高。以鹅作为试验动物，在饲料添加不同比例的菊苣，结果发现，添加适量的菊苣能够提高屠宰性能和肉品质，还能够提高鹅肉脂肪酸的营养价值。以育肥牛作为试验动物，在饲料中添加菊苣，结果表明，育肥牛的平均日增重提高，饲料成本有所降低。菊苣中含有多种活性成分，如绿原酸、多糖、黄酮等，不同活性成分具有不同的作用。有机酸是菊苣中含有的重要活性成分，菊苣中的有机酸以绿原酸及绿原酸衍生物为主，研究表明绿原酸具有抑制病菌、抑制病毒扩散、清除自由基、降血压，还可以用来治疗肿瘤。绿原酸又称咖啡单宁酸，化学名为3-O-咖啡酰奎尼酸，是植物中的一种苯丙素类化合物。绿原酸常温条件下微溶于水，容易溶解于乙醇等极性溶剂中，而且绿原酸见光容易氧化，因此绿原酸应该在阴暗避光条件下保存。绿原酸作为菊苣中的重要活性成分具有多种作用：(1)抗氧化作用。研究表明绿原酸分子中含有活性基团，在形成抗氧化基团后，可以清除自由基，减少机体组织因为氧化而产生的损伤，通过减少血管内皮细胞损伤，从而起到对心血管的保护作用。(2)降血糖作用。目前绿原酸的降血糖机制并没有被完全确定，经过试验推测绿原酸能够降低血糖可能与绿原酸与体内胰岛素起协同作用有关。(3)降脂作用。研究表明绿原酸能够降低血液中胆固醇含量以及甘油三酯的含量。(4)抗辐射作用。研究表明绿原酸可以保护皮肤中的胶原蛋白不被破坏，从而起到抗辐射作用。(5)抗菌作用。研究表明绿原酸对伤寒杆菌、肺炎球菌等病菌有很好的抑制作用。(6)抗白血病。研究表明能够抑制病原细胞的过度生长,从而达到预防白血病的效果。(7)抗癌作用。大量的试验证明，绿原酸能够通过抑制致癌物质在机体内的运输和利用效率，从而达到预防和治疗癌症的效果。(8)具有免疫调节作用，可以提高免疫力。此外，绿原酸还有抗炎、利尿补肾、保肝利胆、抑制脂肪酶之功效。菊苣中绿原酸的提取方法有很多，常用的提取方法有水提取法、有机溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等。水提取法就是用水作为溶剂，在适当的条件下使用浸提法或回流法等方法提取绿原酸。有机溶剂提取法就是用乙醇等极性较强的有机溶剂，利用绿原酸自身的理化性质进行提取，有机溶剂提取法的绿原酸提取量一般高于水提取法。超声波辅助提取法就是在水或有机溶剂作为提取溶剂的基础上用超声波作为辅助条件，通过超声波发射器和转换器，将高频率振动的声波转换为高频率的机械振动，通过增加分子的运动速度和提取溶剂的穿透力达到提取有效成分的目的。微波辅助提取法同样是在水或有机溶剂作为提取溶剂的基础上以微波作为辅助条件，通过微波产生的作用下加速绿原酸的扩散，加快提取速度。但是，植物中绿原酸的提取量受到多种条件的影响，已经有研究表明，不同的干燥条件和预处理均能够影响植物中绿原酸含量。研究微生物发酵处理对菊苣中绿原酸含量影响的研究较少。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的缺陷，提供了一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法，能有效的解决上述现有技术存在的问题。为了实现以上专利技术目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法，包括以下步骤：步骤1，微生物培养基配制；YPD固体培养基配制：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母膏1g，固体培养基添加琼脂2g，灭菌备用，用于培养酵母菌种。LB固体培养基配制：NaCl1g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养枯草芽孢杆菌菌种。MRS固体培养基配制：葡萄糖2g，乙酸钠0.75g，蛋白胨1.5g，硫酸镁0.03g，牛肉膏1.5g，柠檬酸铵0.2g，酵母膏0.75g，磷酸氢二钾0.2g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养植物乳杆菌菌种。步骤2，发酵液体菌种制备；酵母菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个酿酒酵母的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，30℃，200r/min转速下震荡培养培养12h，按照2％的体积比接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12h左右，至活菌数1×109CFU/mL，收集酵母菌发酵液备用。枯草芽孢杆菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个枯草芽孢杆菌的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，37℃，200r/min转速震荡培养12h，按照2％的比例接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12小时，至活菌数5×109CFU/mL，收集枯草芽孢杆菌发酵液备用。植物乳杆菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个植物乳杆菌的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，37℃，密闭静置培养12h，按照2％的比例接种到装液量90％的三角瓶液体培养基中，静置培养12小时，至活菌数5×109CFU/mL，收集植物乳杆菌发酵液备用。步骤3，准确称取50g的菊苣粉，放置于500mL锥形瓶中。以步骤2制作的发酵液为发酵菌种，按照菌种体积比组合酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌的其中一种或几种进行发酵；发酵水分为40～60％、发酵温度为25～35℃、发酵时间为24～72h。作为优选，步骤3中发酵菌种选择枯草芽孢杆菌和酵母，发酵水分40％，发酵温度35℃，发酵时间72h。作为优选，步骤3中发酵菌种为产朊假丝酵母和枯草芽孢杆菌，其接种量为10％(2个菌种液体体积比1:1)，发酵水分40％，发酵温度35℃，发酵时间72h。与现有技术相比本专利技术的优点在于：无环境污染，无能耗，无有害物质产生的方式对其进行处理，提高了提取量。附图说明图1是本专利技术实施例绿原酸标准曲线。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图并列举实施例，对本专利技术做进一步详细说明。材料菊苣采集自河南科技大学实验牧场，采集新鲜的菊苣室内自然干燥后粉碎。菌种：产朊假丝酵母(C.utilis，CICC32211)，枯草芽孢杆菌(B.subtilis，LN)、植物乳杆菌(L.plantarum，BNCC192567)均为河南科技大学宏翔生物饲料实验室保存，使用前活化。绿原酸标准品(贵州迪大生物科技有限责任公司)，其他试剂均为分析纯。恒温培养箱(DNP-9272BS，上海新苗)，摇床培养箱(SKY-2102，上海苏坤)，离心机(ThermoMicro21R)，电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9243BS，上海新苗)，自动蒸汽灭菌锅(LDZX-50KSB，上海申安)，电泳仪(JY600C，北京君意)，超净工作台(SW-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基配制：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母膏1g，固体培养基添加琼脂2g，灭菌备用，用于培养酵母菌种；LB固体培养基配制：NaCl1g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养枯草芽孢杆菌菌种；MRS固体培养基配制：葡萄糖2g，乙酸钠0.75g，蛋白胨1.5g，硫酸镁0.03g，牛肉膏1.5g，柠檬酸铵0.2g，酵母膏0.75g，磷酸氢二钾0.2g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养植物乳杆菌菌种；步骤2，发酵液体菌种制备；酵母菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个酿酒酵母的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，30℃，200r/min转速下震荡培养培养12h，按照2％的体积比接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12h左右，至活菌数1×10

【技术特征摘要】
1.一种增加菊苣中绿原酸提取量的发酵处理方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基配制：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母膏1g，固体培养基添加琼脂2g，灭菌备用，用于培养酵母菌种；LB固体培养基配制：NaCl1g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养枯草芽孢杆菌菌种；MRS固体培养基配制：葡萄糖2g，乙酸钠0.75g，蛋白胨1.5g，硫酸镁0.03g，牛肉膏1.5g，柠檬酸铵0.2g，酵母膏0.75g，磷酸氢二钾0.2g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养植物乳杆菌菌种；步骤2，发酵液体菌种制备；酵母菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个酿酒酵母的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，30℃，200r/min转速下震荡培养培养12h，按照2％的体积比接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12h左右，至活菌数1×109CFU/mL，收集酵母菌发酵液备用；枯草芽孢杆菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个枯草芽孢杆菌的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，37℃，200r...

【专利技术属性】
技术研发人员：李旺，何万领，丁轲，曹平华，赵龙妹，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：河南,41