双基因表达载体及其制备方法和应用技术

本申请提供了双基因表达载体及其制备方法和应用。本申请的双基因表达载体包含第一筛选单元、第一目的蛋白表达单元、第二筛选单元和第二目的蛋白表达单元。本申请还涉及包含该双基因表达载体的动物细胞，以及使用该动物细胞产生多聚体蛋白质例如抗体的方法。

Bigene expression vector and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
双基因表达载体及其制备方法和应用
本申请涉及生物
，具体涉及一种用于动物细胞的双基因表达载体、该表达载体的构建方法、用该表达载体转染的动物细胞、该表达载体在制备药物中的应用和用该表达载体转染的动物细胞生产抗体的方法。
技术介绍
在治疗癌症等适应症的靶向药物中，越来越多的药物是通过基因重组技术生产的生物制品。在通过基因工程生产生物制品的工艺中，外源基因在宿主细胞中高效表达目的蛋白或多肽是研究开发蛋白质或多肽类药物的先决条件。用于表达重组蛋白的表达体系有微生物细胞例如细菌和酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞和动物细胞等。具有正常生物学活性的蛋白往往只能在动物细胞中合成。与大肠杆菌、酵母及昆虫细胞相比，动物细胞表达的外源基因产物与天然蛋白在结构、糖基化类型和糖基化方式上几乎相同，并可大规模、高密度培养来生产正确组装的目的蛋白，特别是多亚基蛋白。另外，癌症的分子病理学研究表明，癌症的发展涉及多靶标的分子生物学通路。因此，针对一种癌症的致病机制通路上的多个靶点的药物成为癌症治疗领域的重要发展趋势。很多多聚物性质的药物由多个不同亚单位构成。然而，在基因工程领域中，通常使用的采用单一目的蛋白表达载本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双基因表达载体，包含顺次连接的分别处于不同的启动子控制之下的第一筛选单元、第一目的蛋白表达单元、第二筛选单元和第二目的蛋白表达单元，其中，所述第一筛选单元的启动子的功能被弱化以使第一目的蛋白和第二目的蛋白的表达量升高，并且第二目的蛋白的表达量高于所述第一目的蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种双基因表达载体，包含顺次连接的分别处于不同的启动子控制之下的第一筛选单元、第一目的蛋白表达单元、第二筛选单元和第二目的蛋白表达单元，其中，所述第一筛选单元的启动子的功能被弱化以使第一目的蛋白和第二目的蛋白的表达量升高，并且第二目的蛋白的表达量高于所述第一目的蛋白。2.如权利要求1所述的双基因表达载体，其中：(i)所述第一筛选单元包含启动子A、第一筛选基因和多聚腺苷酸(polyA)加尾信号1；(ii)所述第一目的蛋白表达单元包含启动子B、内含子、多克隆位点(MCS)1和polyA加尾信号2；(iii)所述第二筛选单元包含polyA加尾信号2、第二筛选基因、启动子C；并且(iv)所述第二目的蛋白表达单元包含启动子D、多克隆位点(MCS)2和polyA加尾信号3；其中，所述第二筛选单元相对于所述第一筛选单元、所述第一目的蛋白表达单元和所述第二目的蛋白表达单元反向插入，并且所述第一目的蛋白表达单元和所述第二筛选单元共用所述polyA加尾信号2。3.如权利要求2所述的双基因表达载体，其中任选地，所述第一筛选基因是编码宿主细胞缺陷酶的基因，所述第二筛选基因为抗生素抗性基因，并且所述编码宿主细胞缺陷酶的基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因或谷氨酰胺合成酶(GS)基因，所述第二筛选基因包括新霉素(neo)抗性基因、嘌呤霉素抗性基因或潮霉素抗性基因。4.如权利要求2～3任一项所述的双基因表达载体，其中所述启动子A是SV40早期启动子或衍生自SV40早期启动子，所述polyA加尾信号1是SV40早期polyA或衍生自SV40早期polyA；所述启动子B是CMV启动子或衍生自CMV启动子，所述内含子是CMV内含子或衍生自CMV内含子；所述启动子C是SV40启动子或衍生自SV40启动子，所述polyA加尾信号2是SV40晚期polyA或衍生自SV40晚期polyA；并且所述启动子D是hEF1-α启动子或衍生自hEF1-α启动子，所述polyA加尾信号3是BGHpolyA或衍生自BGHpolyA。5.一种构建如权利要求2～4任一项所述的双基因表达载体的方法，包括扩增程序和拼接程序，其中所述扩增程序包括步骤：(a)PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：高荣凯，韩化敏，金瑾，
申请(专利权)人：拜西欧斯北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11