The invention discloses a composite hydrogel loaded with exosome and a preparation method thereof, which belongs to the field of Biomedical Engineering technology. The preparation method first isolates and purifies the exosome from C57 mouse mesenchymal stem cells, then uniformly disperses it in the oxidized hyaluronic acid solution, and cross-links the dialdehyde group of oxidized hyaluronic acid with the hydrazide group of diacylhydrazide oxalate to form a composite hydrogel loaded with the exosome. The preparation method of this application is simple, rapid and highly repeatable. The prepared hydrogel loaded with exosin has the advantages of high concentration and low toxicity. It has tumor permeability and long residence time. Besides, the composite hydrogel loaded with exosulfan also has injectable property, biodegradability and drug release ability, and its gel time is fast and can be controlled.
【技术实现步骤摘要】
一种负载外泌体的复合水凝胶及其制备方法
本专利技术属于生物医学工程
,特别涉及一种负载外泌体的复合水凝胶及其制备方法。
技术介绍
无论是可切除或不可切除的肿瘤,局部缓释在术前控制和术后辅助化疗和都发挥重要作用,其主要优点是:药物与肿瘤直接接触,大幅提高药物在肿瘤细胞内的有效浓度;最大限度降低全身毒副作用;药物持续释放,无需频繁给药。1996年美国药监局批准使用一种可植入的载药晶圆(Wafer)治疗复发的Gliomas,该Wafer由一种可降解的聚合物负载3.8%卡莫司汀组成。研究人员将该载药Wafer沿着Gliomas切除后的缺口边缘植入,增加了药物在残留肿瘤细胞中的浓度;这种直接给药方式提高了患者约2个月的中期存活率(11.9升至13.6个月);在30个月的疗程观察中,降低了29%的死亡风险。而这种技术的主要缺陷在于药物扩散面积较小。另一种直接给药方式是导管介导的增强对流给药,通过正压输液注入化疗药物到脑组织的技术,这种技术扩大了化疗药物在脑组织中的分布面积;同时,给药速度也能够精确调控。但是,这两种局部给药平台都缺乏组织粘附性,药物作用时间短,降低肿瘤治疗效果。因此,需要构建新型的局部给药平台以期增加组织粘附性和药物作用时间。水凝胶作为一种药物投递平台,已经被广泛应用于药物缓释和组织工程领域。注射型水凝胶可以克服传统局部给药平台的缺点,通过微创注射器植入病灶部位,减低了开创手术给患者带来的疼痛感及感染几率。透明质酸是人体细胞基质的重要成分,具有优良的生物相容性、生物降解性和酶响应特性。200610076650.X公开了一种用于脑损伤修复的透明质酸 ...
【技术保护点】
1.一种负载外泌体的复合水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:外泌体提取、纯化:从C57小鼠充间质干细胞培养液中提取外泌体,采用差速超速离心法将得到的外泌体重悬于10mM PBS溶液中,‑80℃保存备用;S2:电转载药:将配置好的药物溶液与步骤S1中的外泌体均匀混合,按电穿孔仪要求及电穿孔皿规格加入相应体积,按照预设电压参数,进行电穿孔载药;S3:孵育:继步骤S2电穿孔载药之后将样品置于细胞培养箱中避光孵育30min,得到混合液;S4:纯化:将步骤S3的混合液以100,000‑140,000g离心力超速离心60‑100min,取沉淀物,得到负载药物的外泌体,用10mM PBS重悬沉淀备用;S5:将透明质酸与高碘酸钠在无光条件下进行氧化反应24小时,透析后冻干,得到氧化透明质酸;S6:将步骤S5的氧化透明质酸与步骤S4的负载药物的外泌体混合后,加入乙二酸二酰肼进行反应,得到负载外泌体的复合水凝胶。
【技术特征摘要】
1.一种负载外泌体的复合水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:外泌体提取、纯化:从C57小鼠充间质干细胞培养液中提取外泌体,采用差速超速离心法将得到的外泌体重悬于10mMPBS溶液中,-80℃保存备用;S2:电转载药:将配置好的药物溶液与步骤S1中的外泌体均匀混合,按电穿孔仪要求及电穿孔皿规格加入相应体积,按照预设电压参数,进行电穿孔载药;S3:孵育:继步骤S2电穿孔载药之后将样品置于细胞培养箱中避光孵育30min,得到混合液;S4:纯化:将步骤S3的混合液以100,000-140,000g离心力超速离心60-100min,取沉淀物,得到负载药物的外泌体,用10mMPBS重悬沉淀备用;S5:将透明质酸与高碘酸钠在无光条件下进行氧化反应24小时,透析后冻干,得到氧化透明质酸;S6:将步骤S5的氧化透明质酸与步骤S4的负载药物的外泌体混合后,加入乙二酸二酰肼进行反应,得到负载外泌体的复合水凝胶。2.根据权利要求1所述的负载外泌体的复合水凝胶的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述C57小鼠充间质干细胞培养液为无外泌体血清或不含血清。3.根据权利要求1所述的负载外泌体的复合水凝胶的制备方法,其特征在于,步骤S2中所述电穿孔载药的条件为:电压0-3...
【专利技术属性】
技术研发人员:谢茂彬,王金恒,陈晓明,周苗,
申请(专利权)人:广州医科大学附属口腔医院,
类型:发明
国别省市:广东,44
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