The invention provides a glutamic acid-producing thermosensitive recombinant Corynebacterium glutamicum (C. glutamicum ATCC 13032), which obtains thermosensitive recombinant bacteria by modifying wild Corynebacterium glutamicum (C. glutamicum ATCC 13032) and knocking out two key genes UDP_N_enol acetylglucosaminyltransferase gene (murA) and UDP_N_acetylcellar acid dehydrogenase gene (murB) in its genome. The glutamic acid production of recombinant bacteria was significantly increased. The glutamic acid production of recombinant bacteria was 4 7g/L when the fermentation temperature was raised to 38.5 ~C.
【技术实现步骤摘要】
一种产谷氨酸的温敏型重组谷氨酸棒状杆菌及其应用
本专利技术属于基因工程及发酵工程领域，特别涉及利用基因工程技术对谷氨酸棒杆菌CorynebacteriumglutamicumATCC13032进行分子改造，获得产谷氨酸的温敏型重组菌。
技术介绍
谷氨酸是生物机体内氮代谢的基本氨基酸之一，在代谢上具有重要意义。在食品、医药与工业方面有广泛的用途。为了提高谷氨酸产率，谷氨酸生产菌的研究工作中最为突出的是高产谷氨酸菌的选育工作。从自然界分离得到的谷氨酸生产菌野生株，在生产性能方面往往不能满足发酵生产发展的要求。谷氨酸生产菌株具有较大的自然变异能力，通常负变异频率高于正变异频率，结果造成菌种的衰老和菌株活力减退，导致国内谷氨酸生产行业普遍存在着产酸率水平低、糖酸转化率低、成本高、能耗高等瓶颈问题，因此优良生产菌种的选育，一直是谷氨酸发酵工业上的主要研究课题之一。目前在我国谷氨酸工业生产中，大部分企业使用的菌株为谷氨酸温度敏感突变株，该菌株具有温度敏感的特性，在菌体进入指数生长期时提高培养温度，强制细胞由正常细胞转型为细胞壁合成缺陷的细胞，促进谷氨酸的分泌，从而达到大量合成...
【技术保护点】
1.一种产谷氨酸的温敏型重组谷氨酸棒状杆菌，其特征在于敲除野生型谷氨酸棒杆菌C.glutamicum ATCC 13032的UDP‑N‑烯醇式乙酰葡萄糖胺转移酶基因和UDP‑N‑乙酰胞壁酸脱氢酶基因，获得温敏型重组菌。
【技术特征摘要】
1.一种产谷氨酸的温敏型重组谷氨酸棒状杆菌，其特征在于敲除野生型谷氨酸棒杆菌C.glutamicumATCC13032的UDP-N-烯醇式乙酰葡萄糖胺转移酶基因和UDP-N-乙酰胞壁酸脱氢酶基因，获得温敏型重组菌。2.如权利要求1所述的一种产谷氨酸的温敏型重组谷氨酸棒状杆菌，其特征在于，以C.glutamicumATCC13032为出发菌株，通过PCR方法扩增得到murA基因上游同源臂和murB基因下游同源臂，并通过重叠PCR将上下游同源臂重叠，得到重叠片段；将重叠片段用EcoRI和HindIII双酶切，与同样双酶切的表达载体pK18mobsacB连接，构建重组质粒；将重组质粒电转化至菌株C.glutamicumATCC13032中；筛选出完成了两次同源重组的重组子，实现murA、murB基因的敲除，获得温敏型重组菌。3.权利要求1或2所述温敏型重组谷氨酸棒状杆菌的用途，其特征在于，用于发酵生产谷氨酸。4.一种利用权利要求1或2所述重组谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将菌体接种到斜面培养基中活化，32℃...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢希贤，陈宁，石拓，马跃超，徐庆阳，张成林，李燕军，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12
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