一种含有海藻糖冻干液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种含有海藻糖冻干液及其应用。一种含有海藻糖的用于人趋化因子的冻干液，以质量计含有：0.5～5%干酪素钠，1～10%甘露醇，1～10%海藻糖，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。本发明专利技术通过对冻干液配方的合理搭配，利用甘露醇和海藻糖，二者协同提高了蛋白成膜效果、减少了冻干后出现的冻干粉挂壁现象，提高冻干后产品的成型率。使得利用本发明专利技术的冻干液获得的冻干后产品，具有很好的成型效果，并且外观良好，不出现挂壁等不良现象。采用本发明专利技术的冻干液制成的人趋化因子CXCL13标准品保质期可以达到两年。

A Freeze-drying Fluid Containing Trehalose and Its Application

The invention discloses a trehalose-containing freeze-drying liquid and its application. A freeze-dried liquid containing trehalose for chemokines contains 0.5-5% sodium casein, 1-10% mannitol and 1-10% trehalose by mass. The remaining amount is a phosphate buffer with a concentration of 0.01 mol/L. The invention synergistically improves the effect of protein film formation, reduces the wall hanging phenomenon of freeze-dried powder after freeze-drying, and improves the forming rate of the product after freeze-drying by using mannitol and trehalose through rational matching of the formula of freeze-dried liquid. The product obtained by using the freeze-drying liquid of the invention has good forming effect, good appearance and no bad phenomenon such as wall hanging. The shelf life of the human chemokine CXCL13 standard product made from the freeze-dried liquid of the invention can reach two years.

【技术实现步骤摘要】
一种含有海藻糖冻干液及其应用
本专利技术属于生物体外诊断试剂制备领域，更具体地，涉及一种含有海藻糖冻干液及其应用。
技术介绍
酶联免疫吸附(ELISA)作为国际公认的蛋白定量金标准，具有灵敏度高，特异性好等特点。其中标准品是ELISA试剂盒构成的一个关键，标准品的保质期直接影响到试剂盒的货架期。目前ELISA标准品的保存方法有甘油-20℃保存法和真空冷冻干燥法，此两种方法对蛋白的稳定性有一定的延长作用，但难以满足试剂盒长时间的保存需求。市面上一般的试剂盒的保存时间为半年，严重制约试剂盒的生产应用。同时，真空冷冻干燥法得到的冻干粉剂，现存通常有两种产品，一种是散的粉剂，一种是结合得相对紧密的粉剂，即冻干粉之间能形成一个良好的型状，通常是饼型。而前者比较容易获得，但在开盖时容易使冻干粉飘出，后者则需要在赋型剂等作用下经过配方的优化获得，并且可能出现塌陷等成型问题。另外，在实际生产中发现，不同蛋白对于同种冻干液表现出来的保存效果存在着显著的差异。这就需要针对不同蛋白开发最适合的冻干液。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术缺乏针对人细胞因的冻干液及其使用方法，提供一种含有海藻糖冻干液及其应用。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种含有海藻糖的用于人趋化因子的冻干液，以质量计含有：0.5～5％干酪素钠，1～10％甘露醇，1～10％海藻糖，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。本专利技术的冻干液对多种人趋化因子都有很好的冻干效果。优选地，所述磷酸缓冲液的pH值为7.4。优选地，所述干酪素钠的质量分数为1％。优选地，所述甘露醇的质量分数为5％。优选地，所述海藻糖的质量分数为5％。以上任一项所述冻干液在制备含有人趋化因子的冻干粉中的应用。本专利技术的冻干液适用于人趋化因子标准品的制备，其保质期可以达到两年。优选地，所述人趋化因子为人趋化因子CXCL13。一种含有海藻糖的冻干液的制备方法，以质量计，将0.5～5％干酪素钠、1～10％甘露醇、1～10％海藻糖溶解于0.01mol/L的磷酸缓冲液中得到。以上所述制备方法制备得到的冻干液也属于本专利技术的保护范围。以上所述冻干液的使用方法，将冻干液与蛋白的水溶液混合，然后装入西林瓶置于真空冻干机至完全干燥。优选地，蛋白的终浓度为10～100ng/ml。最优选地，蛋白的终浓度为50ng/ml。优选地，包括以下步骤：S1.对冷冻干燥的相关设备，例如西林瓶、架子、托盘进行预冷，预冷至4℃；S2.将人趋化因子用水溶解后，配制成母液，母液用冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至S1.已预冷的西林瓶中，轻盖上盖子；S4.将S3.盖好盖子的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥。现有技术中，为了确保冻干效果良好，通常不会在冻干瓶(西林瓶)中添加过多的蛋白溶液，因为如果溶液体积过多，液面高度过大，会使冻干变得困难，冻干效果变差。而本专利技术的优选配方，则是可以在液面较高时，依然保持较好的冻干效果，优选的，3mL的西林瓶中加入1mL冻干液与蛋白的水溶液混合液。优选地，冻干条件如表1。表1：温度℃-40-40-35-30-20-15-1003725时间min060180300420660760108011401400与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术通过对冻干液配方的合理搭配，利用甘露醇和海藻糖，二者协同提高了蛋白成膜效果、减少了冻干后出现的冻干粉挂壁现象，提高冻干后产品的成型率。使得利用本专利技术的冻干液获得的冻干后产品，具有很好的成型效果，并且外观良好，不出现挂壁等不良现象。采用本专利技术的冻干液制成的人趋化因子CXCL13标准品保质期可以达到两年。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例一种用于人趋化因子的冻干液及其使用方法一、冻干液的制备将干酪素钠，甘露醇，海藻糖，溶解于pH＝7.4的0.01mol/L的磷酸缓冲液(PBS)。具体配方见表2，以下各组分均为质量百分数。表2：二、使用方法将冻干液与50μg/ml的蛋白溶液混合，得到稀释后的蛋白液，然后3mL的西林瓶中加入1mL蛋白液，置于真空冻干机至完全干燥。冻干条件为如表3.表3：温度℃-40-40-35-30-20-15-1003725时间min060180300420660760108011401400具体包括以下步骤：S1.对冷冻干燥的相关设备，例如西林瓶、架子、托盘进行预冷，预冷至4℃；S2.将CXCL13标准蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各上一步制备的冻干液稀释至目标浓度(50ng/ml)，得到标准浓度蛋白溶液；S3.将S2得到的标准浓度蛋白溶液分装至S1已预冷的容积为3mL西林瓶中，每瓶内装入1mL蛋白溶液，轻盖上盖子；S4.将S3盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到人细胞因子CXCL13冻干标准品。对比例一种用于人趋化因子的冻干液及其使用方法一、冻干液的制备将干酪素钠，甘露醇，海藻糖，溶解于pH＝7.4的0.01mol/L的磷酸缓冲液(PBS)。具体配方见表4，以下各组分均为质量百分数。表4：二、使用方法同实施例。应用例1外观检查一、实验方法按照实施例和对照例的方法制备CXCL13冻干标准品，重复20次，对其外形进行观察，并统计成型率和溶解情况(超纯水溶解)。二、实验结果结果见表5，实施例相对于对比例具有更好的外观形态，成型率也更好，冰洁具有很好的复溶效果。表5：应用例1蛋白老化试验及活性测试一、实验方法采用ELISA法对实施例和对照例制备的人细胞因子CXCL13冻干标准品的蛋白活性进行测试，每一个浓度测试6个样品，对比冻干后，加速老化14天与冻干前活性比值。二、实验结果结果见表6，含有海藻糖的冻干液可以提升细胞因子的保存效果。冻干前后的活性损失率小于10％，根据阿伦尼乌斯公式结论，采用本专利技术制备的人细胞因子CXCL13冻干标准品用于ELISA试剂盒4℃可保存2年以上。当不选用本专利技术所述的配方时，冻干标准品加速老化后的活性损失率升高，保存时间缩短。表6加速老化14天后活性OD值/加速老化前的活性OD值：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有海藻糖的用于人趋化因子的冻干液，其特征在于，以质量计含有：0.5～5%干酪素钠，1～10%甘露醇，1～10%海藻糖，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种含有海藻糖的用于人趋化因子的冻干液，其特征在于，以质量计含有：0.5～5%干酪素钠，1～10%甘露醇，1～10%海藻糖，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。2.根据权利要求1所述冻干液，其特征在于，所述干酪素钠的质量分数为1%。3.根据权利要求1所述冻干液，其特征在于，所述甘露醇的质量分数为5%。4.根据权利要求1所述冻干液，其特征在于，所述海藻糖的质量分数为5%。5.权利要求1至4任一项所述冻干液在制备含有人趋化因子的冻干粉中的应用。6.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕利军，朱国峰，张晓莉，温姌婷，姚青青，李燕，黄健乐，苏欣莹，
申请(专利权)人：广东云天抗体生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44