一种红细胞中游离铁含量测定方法技术

本发明专利技术提供了一种红细胞中游离铁含量测定方法，包括：标准溶液配制；样品试液的制备；空白样品的制备；在选定的工作参数下，采用火焰原子吸收光谱仪测定标准溶液，绘制工作曲线；测定样品试液，扣除空白后得到被测样品的吸光度，根据工作曲线可计算出样品中游离铁的含量。本发明专利技术优点在于：样品处理过程简单，灵敏度高，线性范围宽，专一性强，满足了科研实验中的需求。

【技术实现步骤摘要】
一种红细胞中游离铁含量测定方法
本专利技术涉及血液金属元素含量测定
，特别涉及一种红细胞中游离铁含量测定方法。
技术介绍
铁元素是人体含量最高的微量元素，几乎分布于全身的各个器官。人体内的铁大部分以血红蛋白的形式存在于血液红细胞中，剩余部分以肌红蛋白、铁蛋白等形式存在。铁在血液中的存在形式包括与血红蛋白结合的血红素铁、与运铁蛋白结合的血清铁等结合铁和游离铁。检测血液中铁的含量对于疾病诊断、掌握机体健康状况等具有重要意义。例如，慢性溶血性贫血患者的血清铁含量高于正常水平；机体在存在恶性肿瘤、肝硬化、阻塞性黄疸等疾病时，血清铁含量则低于正常水平。铁是组成血红蛋白不可缺少的元素，血红细胞中铁的含量与其携氧能力直接相关。当人体受到环境污染物胁迫等外来刺激时，机体可能会产生一系列反应，导致红细胞中血红蛋白的铁元素被释放出来，从结合态转变成游离态，从而引起红细胞携氧能力下降，危害人体健康。因此，进一步检测血液红细胞中的游离铁含量同样有着重要意义。目前，关于血红细胞游离铁含量的检测技术鲜有报道，已有检测血液中铁含量的方法主要针对全血或者血清：(1)分光光度法。该方法在血液样品中加入适当的试剂与铁离子络合，将络合态的铁离子与血液样品分离后加入显色剂使用紫外可见分光光度计测定吸光度，再通过标准曲线计算出铁的含量。这种方法虽然较常用，但检测的灵敏度和线性范围较低。(2)火焰原子吸收分光光度法。该方法将血液样品用酸直接消解或者直接灼烧干灰化，配置成一定体积的溶液，通过原子吸收分光光度计测定吸光度并计算得到铁含量。该方法虽然灵敏度较高，但不能很好地分离出血液中的游离铁。此外，薄层色谱法﹑电量滴定和氧化还原滴定法﹑原子发射光谱法等方法也被用于血液铁含量的检测，但也具有检出限﹑灵敏度较差，抗其他金属元素干扰能力弱，专一性不强等缺点。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的缺陷，提供了一种红细胞中游离铁含量测定方法，能有效地解决上述现有技术存在的问题。为了实现以上专利技术目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种红细胞中游离铁含量测定方法步骤1：标准溶液配制铁标准储备液配置：准确称取0.8631g硫酸铁铵，加水溶解，加1.00mL硫酸溶液(1+3)，移入100mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀。此铁溶液质量浓度为1000mg/L。铁标准中间液配置：准确吸取铁标准储备液10mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀。此铁溶液质量浓度为100mg/L。铁标准系列溶液：分别准确吸取铁标准中间液(100mg/L)0mL、0.100mL、0.200mL、0.300mL、0.400mL、0.500mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀。此铁标准系列溶液中铁的质量浓度分别为0mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.300mg/L、0.400mg/L、0.500mg/L。步骤2：样品试液的制备抽取一定量的血液样品放入预先抗凝的离心管中，加入3mL生理盐水，轻轻震荡后离心力400×g离心五分钟，弃上清液，重复3次；向离心管中加入去离子水至5mL，得到溶血液。相对离心力2000×g，将溶血液离心20分钟，吸取上清液3mL，相同条件下离心20分钟，取上清液2.4mL至超滤管中，相对离心力3500×g离心20分钟。收集1.6mL滤液，加入1.0mL硝酸和0.25mL过氧化氢，置于水浴锅95℃消解3h，去除有机物等其他干扰因素。所用超滤离心管过滤器材质为苯乙烯共聚物/丁二烯，滤膜为Ultracel低粘合性再生纤维素膜，滤出液管为聚丙烯，滤出液盖子及衬里为聚乙烯。步骤3：空白样品的制备在比色管中加入1.6mL水，加入1.0mL硝酸和0.25mL过氧化氢，置于水浴锅95℃消解3h。步骤4：测定在选定的工作参数下，采用火焰原子吸收光谱仪测定标准溶液，绘制出工作曲线；测定空白样品及样品试液的吸光度，扣除空白样品的吸光度以消除试剂干扰，根据工作曲线可计算出样品中游离铁的含量。作为优选，步骤2中红细胞最佳溶血时间为12h。作为优选，步骤2中所述超滤管为孔径30KD的超滤管。作为优选，步骤4选定的工作参数为：波长248.3nm，狭缝0.2nm，灯电流10mA，燃烧头高度3mm，空气流量9L/min，乙炔流量2L/min。作为优选，所述测定方法重复测定3次以上取平均值以提高准确度。与现有技术相比本专利技术的优点在于：提供了一种血液红细胞样品中游离铁的分离检测方法，样品处理过程简单，灵敏度高，线性范围宽，专一性强，满足了科研实验中的需求。该方法也可用于血清、全血中游离铁的测定。对于血清，取样分离出血清后，直接进行分离步骤即可；对于全血，取样加入去离子水制得溶血液后再进行分离步骤。附图说明图1为本专利技术实施例1样品经不同孔径的超滤管过滤后铁含量的比较；图2为本专利技术实施例1DBP(邻苯二甲酸二丁酯)染毒条件下SD大鼠血红细胞游离铁含量的测定结果。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图并举实施例，对本专利技术做进一步详细说明。一种红细胞中游离铁含量测定方法，包括以下步骤：步骤1：标准溶液配制铁标准储备液配置：准确称取0.8631g硫酸铁铵，加水溶解，加1.00mL硫酸溶液(1+3)，移入100mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀。此铁溶液质量浓度为1000mg/L。铁标准中间液配置：准确吸取铁标准储备液(1000mg/L)10mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀。此铁溶液质量浓度为100mg/L。铁标准系列溶液：分别准确吸取铁标准中间液(100mg/L)0mL、0.100mL、0.200mL、0.300mL、0.400mL、0.500mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀。此铁标准系列溶液中铁的质量浓度分别为0mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.300mg/L、0.400mg/L、0.500mg/L。步骤2：样品试液的制备抽取一定量的血液样品放入预先抗凝的离心管中，加入3mL生理盐水，轻轻震荡后以相对离心力400×g离心五分钟，弃上清液，重复操作3次；向离心管中加入去离子水至5mL，得到溶血液。以相对离心力2000×g，将溶血液离心20分钟，吸取上清液3mL，继续在相同条件下离心20分钟，再取上清液2.4mL，将两次离心得到的上清液移至超滤管中，以相对离心力3500×g离心20分钟。收集1.6mL滤液，加入1.0mL硝酸和0.25mL过氧化氢，置于水浴锅95℃消解3h。步骤3：空白样品的制备在比色管中加入1.6mL水，加入1.0mL硝酸和0.25mL过氧化氢，置于水浴锅95℃消解3h。步骤4：测定在选定的工作参数下(见表1)，采用火焰原子吸收光谱仪测定标准溶液，绘制出工作曲线；测定空白样品及样品试液的吸光度，扣除空白样品的吸光度以消除试剂干扰，根据工作曲线可计算出样品中游离铁的含量。表1火焰原子吸收光谱仪的工作参数本专利技术涉及操作步骤的关键在于尽量减少超滤离心过程中铁的损失，以便测出合理有效的结果。因此，有必要对操作条件进行优化，保证超滤效果。最佳溶血时间的确定在沉积红细胞中加入去离子水，红细胞吸水涨破得到溶血液，用离心机离心后，得到红本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种红细胞中游离铁含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：标准溶液配制铁标准储备液配置：准确称取0.8631g硫酸铁铵，加水溶解，加1.00mL硫酸溶液(1+3)，移入100mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀；此铁溶液质量浓度为1000mg/L；铁标准中间液配置：准确吸取铁标准储备液10mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀；此铁溶液质量浓度为100mg/L；铁标准系列溶液：分别准确吸取铁标准中间液(100mg/L)0mL、0.100mL、0.200mL、0.300mL、0.400mL、0.500mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀；此铁标准系列溶液中铁的质量浓度分别为0mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.300mg/L、0.400mg/L、0.500mg/L；步骤2：样品试液的制备抽取一定量的血液样品放入预先抗凝的离心管中，加入3mL生理盐水，轻轻震荡后以相对离心力400×g离心五分钟，弃上清液，重复操作3次；向离心管中加入去离子水至5mL，得到溶血液；以相对离心力2000×g将溶血液离心20分钟，吸取上清液3mL，继续在相同条件下离心20分钟，再取上清液2.4mL，将两次离心得到的上清液移至超滤管中，以相对离心力3500×g离心20分钟；收集1.6mL滤液，加入1.0mL硝酸和0.25mL过氧化氢，置于水浴锅95℃消解3h，去除有机物等其他干扰因素；所用超滤离心管过滤器材质为苯乙烯共聚物/丁二烯，滤膜为Ultracel低粘合性再生纤维素膜，滤出液管为聚丙烯，滤出液盖子及衬里为聚乙烯；步骤3：空白样品的制备在比色管中加入1.6mL水，加入1.0mL硝酸和0.25mL过氧化氢，置于水浴锅95℃消解3h；步骤4：测定在选定的工作参数下，采用火焰原子吸收光谱仪测定标准溶液，绘制出工作曲线；测定空白样品及样品试液的吸光度，扣除空白样品的吸光度以消除试剂干扰，根据工作曲线可计算出样品中游离铁的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种红细胞中游离铁含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：标准溶液配制铁标准储备液配置：准确称取0.8631g硫酸铁铵，加水溶解，加1.00mL硫酸溶液(1+3)，移入100mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀；此铁溶液质量浓度为1000mg/L；铁标准中间液配置：准确吸取铁标准储备液10mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀；此铁溶液质量浓度为100mg/L；铁标准系列溶液：分别准确吸取铁标准中间液(100mg/L)0mL、0.100mL、0.200mL、0.300mL、0.400mL、0.500mL于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)定容至刻度，混匀；此铁标准系列溶液中铁的质量浓度分别为0mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.300mg/L、0.400mg/L、0.500mg/L；步骤2：样品试液的制备抽取一定量的血液样品放入预先抗凝的离心管中，加入3mL生理盐水，轻轻震荡后以相对离心力400×g离心五分钟，弃上清液，重复操作3次；向离心管中加入去离子水至5mL，得到溶血液；以相对离心力2000×g将溶血液离心20分钟，吸取上清液3mL，继续在相同条件下离心20分钟，再取上清液2.4mL，将两次离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：池振兴，林宏伟，吴伟林，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学威海，
类型：发明
国别省市：山东,37