The invention discloses a preparation method of protoplast of Verbena rotundifolia, which belongs to the field of plant cell engineering. The preparation method includes the following steps: S1: take the young leaves of Verbena rotundifolia, wash them with aseptic seawater, and then temporarily raise them to get the raw material 1; S2: soak the raw material 1 from S1 into the pretreatment solution to get the raw material 2; S3: take out the raw material 2 from S2, absorb the water, cut it into pieces, add the enzyme solution to enzymatic hydrolysis, and get the enzymatic hydrolysis tissue from S3; S4: enzymatic hydrolysis tissue from S3. S5: centrifuge the filtrate from S4, discard the supernatant, suspend and precipitate with W5 solution, centrifuge, discard the supernatant, and get the precipitation; S6: suspend the precipitation from S5 with MMG solution to get the protoplast of Verbena rotundifolia. The invention first establishes a preparation method of the protoplast of Verbena rotundifolia. The protoplast obtained by the method has high yield and high survival rate.
【技术实现步骤摘要】
一种圆叶丝粉藻原生质体的制备方法
本专利技术属于植物细胞工程领域,具体涉及一种圆叶丝粉藻原生质体的制备方法。
技术介绍
海草是一种生活在热带和温带海域浅海中的单子叶大型沉水植物,属于沼生目。它们具有高等植物的一般特征,能够在水中完成生活史。海草的初级生产力很高,是浅海水域生态系统——海草场的重要组成。海草场资源独特,其生态经济价值主要表现在:(1)海草可以加快海水中的悬浮物的沉降、吸收海水中的营养盐和重金属等,进而改善水质;(2)海草通过减缓水流,进而增加水中悬浮物的沉降,达到稳定底质的效果;(3)海草场为众多海洋生物供庇护场所、栖息地、育幼以及觅食场所;(4)海草场能够维持全球碳、氮、磷平衡;(5)海草是提炼碘、铁、钙、氯化钾等物质的廉价原料。我国的海草分布可分为北方海域海草分布区和南方海域海草分布区。北方海域分布区包括辽宁、河北、天津和山东等省市沿海,约含有3属9种3属9种;南方海域分布区包括海南省、广西壮族自治区、广东省、香港特别行政区、台湾省和福建省沿海,约含有9属15种。海南是中国海草场分布面积最大的省份,占我国海草总面积的64%,且主要集中于东部沿岸,如文昌、琼海、陵水、三亚。其中,陵水黎安港以圆叶丝粉藻作为优势种。近年来,受自然因素和人类活动干扰的影响,我国海草场迅速缩减,许多优质海草资源受到严重破坏、繁殖率降低。原生质体是植物细胞中除细胞壁以外的被细胞膜包围的“裸露细胞”,能够长成一个完整的植株个体,具有胚性。可应用于构建细胞融合、克服有性杂交障碍、培育植物新品种。另外,原生质体为植物学研究、作物遗传改良和种质资源保存提供了极为有利的试验材 ...
【技术保护点】
1.一种圆叶丝粉藻原生质体的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:S1:选取圆叶丝粉藻幼叶,用无菌海水清洗后暂养,得到原材料1;S2:将S1中得到的原材料1放入预处理液中浸泡,得到原材料2;S3:取出S2中得到的原材料2,吸干水分后切成块,加入酶液进行酶解,得到酶解组织;S4:将S3中得到的酶解组织过滤,得到过滤液;S5:将S4中得到的过滤液离心,弃上清液,用W5溶液悬浮沉淀,离心,弃上清液,得到沉淀;S6:将S5中得到的沉淀用MMG溶液悬浮,得到圆叶丝粉藻原生质体。
【技术特征摘要】
1.一种圆叶丝粉藻原生质体的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:S1:选取圆叶丝粉藻幼叶,用无菌海水清洗后暂养,得到原材料1;S2:将S1中得到的原材料1放入预处理液中浸泡,得到原材料2;S3:取出S2中得到的原材料2,吸干水分后切成块,加入酶液进行酶解,得到酶解组织;S4:将S3中得到的酶解组织过滤,得到过滤液;S5:将S4中得到的过滤液离心,弃上清液,用W5溶液悬浮沉淀,离心,弃上清液,得到沉淀;S6:将S5中得到的沉淀用MMG溶液悬浮,得到圆叶丝粉藻原生质体。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤S1中暂养的条件为:温度20-25℃、光照强度800-1200lx、光照时间8-12小时/天,暂养的时间为1-3天,培养基包括24.3mg/LNaNO3、3.75mg/LKH2PO4。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤S2中的预处理液包括:0.05-0.2g/L磷脂酶和80-120mmol/LEDTA;所述的浸泡时间为1-4小时。4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤S2中的预处理液包括:0.1g/L磷脂酶和100mmol/LEDTA;所述的浸泡的时间为2小时。5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤S3中的酶液包括:1.0-2.0wt...
【专利技术属性】
技术研发人员:王道儒,
申请(专利权)人:海南省海洋与渔业科学院海南省海洋开发规划设计研究院,
类型:发明
国别省市:海南,46
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