The invention belongs to the field of biotechnology. The invention provides a method for separating and extracting thylakoid membranes of mesophyll cells and vascular bundle sheath cells of C4 plants. The thylakoid membranes of mesophyll cells and vascular bundle sheath cells are obtained respectively by mechanical action of different grades of wall breaker. The process is simple and easy to operate. Compared with enzymatic hydrolysis, the process of extracting thylakoid membrane is simple, the extracting time is short, and the amount of treatment is large. Finally, the thylakoid membrane of mesophyll cells and the thylakoid membrane of vascular bundle sheath cells can be obtained by the process of extracting thylakoid membrane of mesophyll cells, respectively, and the required protein can be obtained.
【技术实现步骤摘要】
C4植物叶肉细胞、维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法
本专利技术属于生物
,具体涉及一种C4植物的叶肉细胞与维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法。
技术介绍
光合作用是地球上最大规模的能量和物质转换过程,是几乎一切生命生存和发展的物质基础。光合作用分成两个过程。第一个过程是在类囊体膜上,太阳光激发光合电子传递系统中的叶绿素吸收太阳光,把光能转化成化学能,生成能量分子ATP和NADPH,这个过程叫光反应。第二个过程叫暗反应,在酶的催化下,消耗ATP提供的能量和NADPH,将二氧化碳和水合成碳水化合物。根据固碳方式的不同可以将植物分为碳三植物(C3植物),如小麦、大豆、水稻、烟草、棉花等;碳四植物(C4植物),例如玉米、甘蔗、高粱等。碳三植物固碳效率低,碳四植物中有一种特殊的花环结构,这种结构特征将光合作用反应分在两种不同类型的细胞内,叶肉细胞和维管束鞘细胞,维管束鞘细胞环绕维管组织,与此同时,一个外部的叶肉细胞环包绕维管束并与细胞间隙相邻。C4植物把用于碳固定和碳还原的细胞分开的类囊体膜结构对于二氧化碳的吸收和高效的进行光合作用是十分必要的。叶绿体是植物及某些高等藻类进行光合作用的主要场所。植物叶绿体内部由基质和类囊体组成,基质是光合作用暗反应的场所,类囊体是光合作用光反应的场所,是光捕获、光合电子传递、质子易位及ATP合成的位点,因此大部分与光合作用有关的蛋白质和蛋白复合物均定位于类囊体膜及类囊体腔中,类囊体膜系统主要包括四种高丰度的多亚基膜蛋白复合体,即PSI、PSII、Cytb6f及ATP合酶。叶绿体类囊体膜中的蛋白质复合体是植物进行光能吸收、 ...
【技术保护点】
1.一种C4植物叶肉细胞和维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取C4植物的叶片,清洗后擦掉水分,去掉叶片中间的叶脉,将叶片剪成0.5‑1cm小条;(2)取剪碎的叶片放入在冰箱提前预冷的破壁机中,加入预冷后的捣碎液,破碎至叶片外层的叶肉细胞80‑90%掉落;(3)低温过滤,捣碎液涮洗破壁机,再过滤,合并滤液,即为叶肉细胞;(4)将步骤(3)的滤渣加入预冷后的捣碎液,继续破碎至叶肉细胞90‑99%及以上掉落;过滤,留滤渣,弃滤液;(5)将步骤(4)的滤渣加入预冷后的捣碎液,破碎至维管束鞘细胞80‑95%及以上掉落,过滤,滤液即为维管束鞘细胞;(6)将步骤(3)的叶肉细胞,离心,加入预冷后的涨破液,搅拌,离心,加贮存液,放入液氮迅速冷冻放‑80℃冰箱保存,得到叶肉细胞的类囊体膜;(7)将步骤(5)得到的维管束鞘细胞,离心,加入预冷后的涨破液,搅拌,离心,加贮存液,放入液氮迅速冷冻放‑80℃冰箱保存,得到维管束鞘细胞的类囊体膜。
【技术特征摘要】
1.一种C4植物叶肉细胞和维管束鞘细胞的类囊体膜的分离提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取C4植物的叶片,清洗后擦掉水分,去掉叶片中间的叶脉,将叶片剪成0.5-1cm小条;(2)取剪碎的叶片放入在冰箱提前预冷的破壁机中,加入预冷后的捣碎液,破碎至叶片外层的叶肉细胞80-90%掉落;(3)低温过滤,捣碎液涮洗破壁机,再过滤,合并滤液,即为叶肉细胞;(4)将步骤(3)的滤渣加入预冷后的捣碎液,继续破碎至叶肉细胞90-99%及以上掉落;过滤,留滤渣,弃滤液;(5)将步骤(4)的滤渣加入预冷后的捣碎液,破碎至维管束鞘细胞80-95%及以上掉落,过滤,滤液即为维管束鞘细胞;(6)将步骤(3)的叶肉细胞,离心,加入预冷后的涨破液,搅拌,离心,加贮存液,放入液氮迅速冷冻放-80℃冰箱保存,得到叶肉细胞的类囊体膜;(7)将步骤(5)得到的维管束鞘细胞,离心,加入预冷后的涨破液,搅拌,离心,加贮存液,放入液氮迅速冷冻放-80℃冰箱保存,得到维管束鞘细胞的类囊体膜。2.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员:林雪乔,刘明媚,李秀秀,秦晓春,
申请(专利权)人:济南大学,
类型:发明
国别省市:山东,37
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