一种胱抑素C检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种胱抑素C检测试剂盒，属于免疫检测分析技术领域。所述试剂盒包含有样本稀释液、洗涤液、显色液及终止液、酶标记物，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体，所述检测试剂盒还包括：多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品、可溶性胱抑素C质控品、以及微孔反应板，所述微孔反应板包被可溶性胱抑素C单克隆抗体。所述试剂盒中的多种不同浓度的可溶性胱抑素C标准品无需进行稀释处理可以直接使用，简化了操作步骤，缩短了检测时间，实现了高效、快速检测，同时可溶性胱抑素C质控品可以鉴定检测结果是否准确，不同浓度的胱抑素C标准品可以得到不同规格的检测试剂盒，适应不同客户的使用需求。

A Kit for Cystatin C Detection

The invention relates to a cystatin C detection kit, which belongs to the field of immunoassay and analysis technology. The kit comprises sample dilution solution, detergent solution, chromogenic solution and terminating solution, enzyme marker, and soluble cystatin C monoclonal antibody labeled with horseradish peroxidase. The detection kit also comprises a plurality of different concentrations of soluble cystatin C standard products, soluble cystatin C quality control products, and microporous reaction plates, and the microporous reaction plate is coated. Soluble cystatin C monoclonal antibody. A variety of different concentrations of soluble cystatin C standard products in the kit can be directly used without dilution treatment, simplifying the operation steps, shortening the detection time, realizing efficient and rapid detection. At the same time, the quality control products of soluble cystatin C can identify whether the test results are accurate, and different concentrations of cystatin C standard products can obtain different specifications of test kits. To meet the needs of different customers.

【技术实现步骤摘要】
一种胱抑素C检测试剂盒
本专利技术涉及一种胱抑素C(CysC)检测试剂盒，属于免疫检测分析

技术介绍
肾脏疾病是临床上一种常见的疾病，迄今为止，早诊断、早治疗以及逆转损伤的肾功能是唯一能阻止肾脏疾病恶化的途径。临床评价肾脏疾病进展和严重程度一般以肾功能为参考，以肾小球滤过率(GFR)作为反映肾功能最重要的指标。胱抑素C，是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ-微量蛋白或γ-后球蛋白，且是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，其分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，为反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液。因此，可以通过血液中胱抑素C的浓度来反映肾小球的过滤速率。而且，胱抑素C血清浓度不受敏症过程、性别、年龄和肌肉重量影响，是反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物，并逐步发展为评估肾功能的一项敏感性好、特异性高的指标。因此，对胱抑素C的快速、全面、准确、特异检测显得尤为重要。到目前为止，商品的胱抑素C检测手段都尚存在一定局限性。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种胱抑素C检测试剂盒，所述试剂盒可胱抑素C进行快速、全面、准确、特异的检测。为实现本专利技术的目的，提供以下技术方案。一种胱抑素C检测试剂盒，所述试剂盒包含有样本稀释液、洗涤液、显色液及终止液、酶标记物，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体；所述检测试剂盒还包括：多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品、可溶性胱抑素C质控品、以及微孔反应板，所述微孔反应板包被可溶性胱抑素C单克隆抗体。所述多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品的浓度依次为0ng/ml、6.4ng/ml、16ng/ml、40ng/ml、100ng/ml和200ng/ml。优选的，所述可溶性胱抑素C标准品的制备方法为：以胎牛血清处理基质对可溶性胱抑素C抗原进行稀释，配制得到可溶性胱抑素C标准品。优选的，所述可溶胱抑素C质控品包括低值范围质控品和高值范围质控品，所述低值范围质控品浓度为24～36ng/ml，所述高值范围质控品浓度为48～72ng/ml。优选的，所述低值范围质控品浓度为30ng/ml，所述高值范围质控品浓度为60ng/ml。优选的，所述质控品的制备方法为：以胎牛血清处理基质对可溶胱抑素C抗原进行稀释，配制得到可溶性胱抑素C质控品。一种本专利技术所述胱抑素C检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)制备可溶性胱抑素C标准品和可溶性胱抑素C质控品：使用胎牛血清处理基质将可溶性胱抑素C抗原稀释得到可溶胱抑素C标准品，同时使用胎牛血清处理基质将可溶性胱抑素C稀释得到质控品；(2)制备可溶胱抑素C单克隆抗体包被的微孔反应板：吸取可溶性胱抑素C单克隆抗体，加入0.01mol/L，pH＝7.2的磷酸盐溶液中进行稀释，4℃储存备用；取微孔板，每孔加入100μL稀释后的可溶性胱抑素C单克隆抗体，覆膜后置于4℃包被18～22小时；甩去孔内液体，每孔加入200μL内含1～3％牛血清白蛋白、3～5％蔗糖、0.05～0.15％Priclin300的0.01mol/L，pH＝7.4的磷酸盐溶液，覆膜后置于4℃封闭18～22小时；甩去孔内液体，并在吸水纸上拍干，室温下干燥2～4天后真空密封包装，得到可溶性胱抑素C单克隆抗体包被的微孔反应板，所述微孔反应板保存于4℃。(3)制备辣根过氧化物酶标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体：称取辣根过氧化物酶2mg，溶解于1mL去离子水中，加入1～2mL浓度为0.05mol/L的过碘酸钠溶液，4℃缓慢摇动30～60min；用浓度为0.001mol/L，pH＝4.4的醋酸钠溶液透析18～22小时；加入2mg可溶性胱抑素C单克隆抗体，4℃避光振荡18～22小时；加入400μL浓度为0.2mol/L的NaBH4溶液，用浓度为0.02mol/L，pH＝7.4的磷酸缓冲液透析18～22小时；用HPLC二次纯化，收集蛋白峰，加入等体积甘油，得到辣根过氧化物酶标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体，于-20℃保存。(4)制备样本稀释液：取磷酸二氢钠1.409g、磷酸氢二钠4.372g、氯化钠8.5g、牛血清白蛋白5g、吐温-200.5mL、加水定容至1L，用氢氧化钠调pH至7.4±0.1；(5)制备洗涤液：取磷酸二氢钠28.18g、磷酸氢二钠87.44g、氯化钠170g、吐温-2010mL，加水定容至1L，使用时用水稀释20倍；(6)制备显色液：称取100gTMB，用10mLDMSO和10mL无水乙醇配成的混合液溶解，4℃避光保存备用；配制0.1mol/LpH4.0～5.0的柠檬酸溶液；向1000mL所述配制的柠檬酸溶液中加入100～200mg过氧化氢尿素；溶解充分后，加入PVP，使其终浓度为0.2～0.6％，4℃放置18～22小时；加入事先溶解的TMB混合液，并加入2～4％聚乙二醇，加水定容至1000mL，4℃避光保存；(7)制备终止液：量取50mL浓硫酸沿烧杯壁缓慢地注入870mL水中，混匀，使其被稀释18.4倍，4℃保存。有益效果本专利技术提供了一种胱抑素C检测试剂盒，试剂盒中的多种不同浓度的可溶性胱抑素C标准品无需进行稀释处理可以直接使用，简化了操作步骤，缩短了检测时间，实现了高效、快速检测，同时可溶胱抑素C质控品可以鉴定检测结果是否准确，多个不同浓度的可溶性胱抑素C微孔反应板使用的可溶性胱抑素C单克隆抗体具有高度特异性，且可溶性胱抑素C标准品可以实现对样本中的可溶性胱抑素C蛋白分子进行专一的定量检测；提供的不同浓度的可溶性胱抑素C标准品可以得到标准曲线，根据标准曲线可以得到待测样品中可溶性胱抑素C的浓度；试剂盒可与全自动酶联反应分析仪相结合，可以进一步有效缩短检测时间，降低检测成本和人力花费。具体实施方式一种胱抑素C检测试剂盒，包含有微孔反应板、酶标记物、样本稀释液、显色液、终止液、洗涤液、可溶性胱抑素C标准品、可溶性胱抑素C质控品，其中，酶标记物为辣根过氧化物酶标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体，可溶性胱抑素C标准品是以胎牛血清处理基质对可溶性胱抑素C抗原进行稀释得到，可溶性胱抑素C质控品是以胎牛血清处理基质对可溶性胱抑素C抗原进行稀释得到，微孔反应板为包被可溶性胱抑素C单克隆抗体；本试剂盒中的不同浓度可溶性胱抑素C标准品可以直接使用绘制标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线得到样品对应的浓度，可溶性胱抑素C质控品用来鉴定检测结果是否准确，酶标记物也无需稀释处理，操作简单，可以有效缩短检测时间，进而降低检测成本和人力花费。上述胎牛血清处理基质的制备方法为：取适量研细后的硫酸铵于室温下边搅拌边加入胎牛血清中，使其终浓度为100～300g/L，4℃放置18～22小时；10,000转离心20～40分钟，取上清液滤纸过滤；将滤后上清液装透析袋，于4℃下在10倍体积的生理盐水中透析，每隔3～5小时更换一次透析液，一共三次；转入10体积的0.05mol/L硼酸溶液中进行透析，每隔3～5小时更换一次透析液，一共四次；将透析后的液体放入干净容器内，于56℃热灭活1～2小时；加入0.05～0.15％的Proclin300和0.05～0.15％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含有样本稀释液、洗涤液、显色液及终止液、酶标记物，所述酶标记物为辣根过氧化物酶或标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体；所述检测试剂盒还包括：多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品、可溶性胱抑素C质控品、以及微孔反应板，所述微孔反应板包被可溶性胱抑素C单克隆抗体；所述多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品的浓度依次为0ng/ml、6.4ng/ml、16ng/ml、40ng/ml、100ng/ml和200ng/ml。

【技术特征摘要】
1.一种胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含有样本稀释液、洗涤液、显色液及终止液、酶标记物，所述酶标记物为辣根过氧化物酶或标记的可溶性胱抑素C单克隆抗体；所述检测试剂盒还包括：多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品、可溶性胱抑素C质控品、以及微孔反应板，所述微孔反应板包被可溶性胱抑素C单克隆抗体；所述多个不同浓度的可溶性胱抑素C标准品的浓度依次为0ng/ml、6.4ng/ml、16ng/ml、40ng/ml、100ng/ml和200ng/ml。2.根据权利要求1所述的一种胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述可溶胱抑素C质控品包括低值范围质控品和高值范围质控品，所述低值范围质控品浓度为24～36ng/ml，所述高值范围质控品浓度为4...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰成杰，陶剑，
申请(专利权)人：天津康尔克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12