The invention relates to a pair of buoyancy microsphere probes for quantitative screening of gangliosides on cell surface and a preparation method thereof. The buoyant microsphere probe comprises an extraction probe and a collection probe. The extraction probe was based on maleimide modified silica buoyancy microspheres, on which DNA molecules with endonuclease cleavage sites and boric acid terminal were covalently bound. Through the covalent recognition of boric acid and sialic acid on cell surface, the biological molecules containing sialic acid on cell surface can be extracted by buoyancy. Under the action of endonuclease, the extracted biological molecule can be released into the solution, and the gangliosides bound to nucleic acid fragments can be collected by the collection probe of octadecane silylation through hydrophobic interaction. The fluorescence quantification of gangliosides can be further carried out by in vitro hybridization chain reaction.
【技术实现步骤摘要】
一对用于细胞表面神经节苷脂定量筛查的浮力微球探针及其制备方法一、
本专利技术涉及一对用于细胞表面神经节苷脂定量筛查的浮力微球探针及其制备方法。二、
技术介绍
神经节苷脂是一种包含一个或多个唾液酸末端寡糖链的鞘糖脂。它们通过神经酰胺部分的烷烃链嵌在细胞膜上,调节细胞结构,细胞粘附和信号传导,同时作为微生物毒素、细菌和病毒的受体位点。细胞表面的神经节苷脂通过对应的高特异性的酶以增加或减少糖单元的方式不断地被合成和降解。其异常的糖基化生物通路与一些疾病相关,如遗传性疾病和癌症的恶性转化。不同亚类的神经节苷脂的异常过表达还与肿瘤的类型和进程密切相关。因此,筛查细胞表面的神经节苷脂对揭示其相关的生物过程和潜在的肿瘤进程具有重要的意义。为了实现对细胞表面神经节苷脂的定量检测,该专利制备了一对功能化的浮力微球探针,实现了对细胞表面神经节苷脂的非破坏性定量筛查。三、
技术实现思路
本专利技术的目的是:基于硼酸介导的共价识别细胞表面唾液酸和十八烷基分子介导的疏水作用,分别设计了包含核酸切割酶位点和硼酸末端的提取探针和包含十八烷基分子的收集探针。利用提取探针非破坏性地提取细胞表面含唾液酸的生物分子,并通过核酸切割酶将提取物释放到溶液中。再利用收集探针收集释放物中的脂类物质,即神经节苷脂,通过神经节苷脂上结合的核酸片段进行杂交链反应,获得可供定量的荧光信号。以MCF-7乳腺癌细胞系为模型,制备的探针实现了对细胞表面神经节苷脂的定量。本专利技术提出的可对细胞表面神经节苷脂定量筛查的浮力微球探针如图1所示。以羟基化的二氧化硅浮力微球为载体,在其表面逐步进行氨基硅烷化,组装琥珀酰亚胺和马 ...
【技术保护点】
1.一对用于细胞表面神经节苷脂定量筛查的浮力微球探针,其特征为以二氧化硅浮力微球为载体,分别负载具有核酸内切酶Eco47III切割位点和硼酸末端的功能DNA分子(提取探针)和十八烷基碳链(收集探针)。
【技术特征摘要】
1.一对用于细胞表面神经节苷脂定量筛查的浮力微球探针,其特征为以二氧化硅浮力微球为载体,分别负载具有核酸内切酶Eco47III切割位点和硼酸末端的功能DNA分子(提取探针)和十八烷基碳链(收集探针)。2.根据权利要求1所述的提取探针,其特征在于功能DNA分子由DNA1和DNA2杂交形成。DNA1的3’端为巯基,通过琥珀酰亚胺和马来酰亚胺双修饰的聚乙二醇链连接到氨基硅烷化的二氧化碳浮力微球上;5’端的羧基共价结合氨基苯硼酸分子,用于特异性识别提取细胞表面含唾液酸基团的分子。DNA2与DNA1...
【专利技术属性】
技术研发人员:鞠熀先,陈云龙,刘惠普,
申请(专利权)人:南京大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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