痰液标本中cfDNA的提取方法技术

本发明专利技术涉及DNA的提取方法领域，提供一种痰液标本中cfDNA的提取方法，其包括制备痰液中的cfDNA的提取样本和将提取样本使用提取cfDNA的试剂盒进行cfDNA的提取，所述痰液中cfDNA的提取样本的制备方法包括如下步骤：1)痰液收集；2)痰液标本质控；3)将痰液标本与化痰液混合，震摇至化痰完全，得到化痰混合液；4)将化痰混合液进行离心处理，分离上清液和底部沉淀，所述上清液即为无细胞上清液；5)将无细胞上清液进离心处理，收集上清液，得到提取样本。本发明专利技术的痰液标本中cfDNA的提取方法，提供了一种规范化的痰液标本中cfDNA的提取流程，能够从痰液标本中获取足量的cfDNA为后续基因改变检测提供基础。

Extraction of cfDNA from sputum samples

The invention relates to the field of DNA extraction methods, and provides a method for extracting cfDNA from sputum samples, which includes preparing cfDNA extraction samples from sputum and extracting cfDNA from sputum samples using a cfDNA extraction kit. The method for preparing cfDNA extraction samples from sputum includes the following steps: 1) sputum collection; 2) quality control of sputum samples; and 3) sputum samples and sputum resolving fluid. Mix and shake until the phlegm is removed completely to obtain the phlegm-resolving mixture; 4) centrifuge the phlegm-resolving mixture and separate the supernatant and bottom sediment. The supernatant is the acellular supernatant; 5) centrifuge the acellular supernatant and collect the supernatant to obtain the extraction sample. The method for extracting cfDNA from sputum samples provides a standardized process for extracting cfDNA from sputum samples, and can obtain sufficient cfDNA from sputum samples to provide a basis for subsequent gene change detection.

【技术实现步骤摘要】
痰液标本中cfDNA的提取方法
本专利技术涉及一种DNA的提取方法，具体地说，涉及一种痰液标本无细胞上清中游离DNA(CellFreeDNA，cfDNA)的提取方法。
技术介绍
近年来，应用靶向药物治疗非小细胞肺癌(Non-SmallCellLungCancer，NSCLC)已经是临床肿瘤治疗中的标准治疗方法，即所谓的“精准治疗”。应用靶向药物治疗均需进行不同的基因改变检测，针对携带的不同基因改变，进行相应的药物选择。靶向药物治疗耐药患者肿瘤进展后，仍需进行基因改变检测，用于指导后续治疗，所以基因改变检测贯穿NSCLC治疗的全过程。国内及国外NSCLC诊疗指南均推荐患者常规进行一组驱动基因改变检测，包括EGFR、ALK、ROS1、BRAF、RET、Her-2、C-MET等基因。以下涉及本文中几个重要的专业术语的定义：1)驱动基因：是指对肿瘤发生及发展起到关键作用的基因，驱动基因的突变是肿瘤发展或者发展的重要原因，所谓“驱动”了正常细胞恶变的过程。在中国NSCLC患者最常见的驱动基因为EGFR基因突变；2)靶向治疗：是针对一个肿瘤驱动基因改变或者蛋白水平的改变，设计相应的治疗药物，药物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种痰液中的cfDNA提取样本的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将痰液标本与化痰液混合，至化痰完全，得到化痰混合液；2)将化痰混合液进行离心处理，分离上清液和底部沉淀，所述上清液即为无细胞上清液；3)将无细胞上清液进离心处理，收集上清液，得到提取样本。

【技术特征摘要】
1.一种痰液中的cfDNA提取样本的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将痰液标本与化痰液混合，至化痰完全，得到化痰混合液；2)将化痰混合液进行离心处理，分离上清液和底部沉淀，所述上清液即为无细胞上清液；3)将无细胞上清液进离心处理，收集上清液，得到提取样本。2.根据权利要求1所述的痰液中的cfDNA提取样本的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的化痰液为生理盐水和二硫苏糖醇水溶液的混合液。3.根据权利要求1-2任一所述的痰液中的cfDNA提取样本的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述痰液标本、生理盐水和二硫苏糖醇水溶液的体积比为1～2:7～11:1，优选的，所述痰液标本、生理盐水和二硫苏糖醇水溶液的体积比为1:9:1。4.根据权利要求1-3任一所述的痰液中的cfDNA提取样本的制备方法，其特征在于，所述二硫苏糖醇水溶液的浓度为0.1-0.7mol/L。5.根据权利要求1-4任一所述的痰液中的cfDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：王征，刘东戈，张琳，施红，孙明君，崔娣，李琳，徐燕，王孟昭，邸婧，阮力，宋庆涛，
申请(专利权)人：北京医院，
类型：发明
国别省市：北京,11