一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂制造技术

本发明专利技术公开了一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂，属于洗涤剂领域。本发明专利技术提供了一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂，该复合稳定剂以柠檬酸铵钙、APG0810和APG1214组成。相比于硼砂，本发明专利技术提供的复合稳定剂能够显著提高液体洗衣液中的蛋白酶在常温以及40℃条件下的酶活保持率。

A Compound Stabilizer for Stabilizing Protease in Laundry Solution

The invention discloses a composite stabilizer for stabilizing protease in laundry liquid, which belongs to the field of detergent. The invention provides a composite stabilizer for stabilizing protease in laundry solution, which is composed of calcium ammonium citrate, APG0810 and APG1214. Compared with borax, the composite stabilizer provided by the invention can significantly improve the activity retention rate of protease in liquid laundry solution at room temperature and 40 C.

【技术实现步骤摘要】
一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂
本专利技术涉及一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂，属于洗涤剂领域。
技术介绍
蛋白酶是洗涤剂工业中应用最广泛的酶制剂，但在洗衣液中的稳定性远远低于其在洗衣粉中的稳定性。硼砂曾经被广泛用于液体加酶洗衣液中，但目前硼砂已被欧洲禁止在加酶洗涤剂中使用；因此非常需要寻求硼砂的替代品或者通过其它途径提高蛋白酶在洗衣液中的稳定性。影响蛋白酶在洗衣液中的稳定性的因素，除了洗衣液中的活性成分如一些非离子表面活性剂，最主要的还是蛋白酶本身的酶学性质。目前，帮助蛋白酶在洗涤剂中保持一定稳定性的途径包括：改造生产蛋白酶菌株的基因、将蛋白酶固定化以及添加稳定剂。改造蛋白酶基因以及将酶进行固定化，都存在技术复杂和成本较高的问题。加入稳定剂来保持酶活的方法较为简便，但稳定性能好的稳定剂或复配稳定剂较少。有的稳定剂需要合成而合成工艺保密；有的稳定剂的效果属于公认较好的如硼砂，又被各种原因限制甚至禁止使用。蛋白酶和粉状洗涤剂即表面活性剂共存或者在极稀水溶液(如洗涤环境)中容易被稳定剂稳定。但一定浓度范围的表面活性剂却容易使酶失活。因此加酶液体洗涤剂如加酶洗衣液中蛋白酶的稳定剂选取一直是个困扰工业界的问题。学界常常只注意单一表面活性剂或者低浓度表面活性剂对酶活的影响，或者选取的检测条件是酶的最佳酶活条件而不是洗衣液(那样硼砂或其它稳定剂的稳定效果都自然会好)；实际上，必须将酶置于洗涤剂中，在洗涤剂浓度下，以硼砂为阳性对照，选取稳定效果超过或者与硼砂接近的稳定剂，才能真正有助于选取蛋白酶的稳定剂。从对蛋白质的亲和力分析，可能的稳定剂有二羧酸盐、多元醇、多元酸以及一些无机盐类。无机盐类中，硼酸盐类稳定剂如硼砂的效果相对较好，室温下能一定程度地保持加酶洗衣液的酶活，曾经被广泛用于液体加酶洗衣液中；但目前硼砂已被欧洲禁止在加酶洗涤剂中使用。公开号为CN107815354A的专利申请中公开了利用多元醇胺、多元醇、卤化钙、多元酸钠、磺酸盐、柠檬酸配伍得到的活性保持剂能够为蛋白酶提供一个长期稳定的生存环境；但该专利申请公开的方法同时使用的稳定剂太多，给配方中表面活性剂的配伍带来了不确定性；而且需要严格控制反应体系的酸碱度才能使得活性保持剂对蛋白酶的作用发挥到最大。CN201810585252.3公开了一种超浓缩洗衣液及其制备方法，所述超浓缩洗衣液的各原料及其重量份数配比为：水20-40份、椰油酸钾10-20份、非离子表面活性剂40-70份、椰油酰胺DE1-5份、丙二醇1-5份、蛋白酶0.1-1份、纤维素酶0.1-1份、EDT0.1-1份、柠檬酸0.1-1份、防腐剂0.1-1份、香精0.1-1份；没有提及蛋白酶的稳定性。公开号为CN105154253A公开了利用柠檬酸、丙二醇、氢氧化钠为稳定剂来保证多酶的储藏时间并缩短多酶分解有机物及油污的时间，没有和表面活性剂复配作为洗衣液使用。因此，广泛和深入地研究稳定剂、表面活性剂和环境因素对酶活的影响，并且给出切实有效的提高蛋白酶在洗衣液中的稳定性的方案有着重要的实际意义。
技术实现思路
[技术问题]本专利技术要解决的技术问题是提供一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂。[技术方案]本专利技术提供了一种用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂，包括以洗衣液总质量计的0.5％-2％柠檬酸铵钙、0.5％-1％APG0810、0.5％-2％APG1214。所述柠檬酸铵钙是将柠檬酸铵与柠檬酸钙按照摩尔比为(25-20)：1的比例复配得到的。所述稳定洗衣液蛋白酶，是指在25～40℃的保存条件下，复合稳定剂能够减少酶活的损失。针对市场上使用较多的洗涤剂用蛋白酶，专利技术人选择了几种在液体洗涤剂中稳定性较弱的蛋白酶来攻克。专利技术人在实验中发现柠檬酸铵钙和柠檬酸钙对洗衣液中的蛋白酶的酶活保持率具有显著的促进作用，特定的混合柠檬酸盐比硼砂对几种市售洗涤剂专用蛋白酶的稳定作用更强，这可能是由于钙离子作为酶的辅基能够与酶的活性中心结合，使蛋白酶活性中的疏水结构向蛋白酶内部转移，让酶的分子结构变得更为紧密而利于蛋白酶的酶活的提高。就柠檬酸钙而言，其效果虽好，却难以直接加入；以柠檬酸铵钙的形式来使用则可以解决这个问题。和其它离子型表面活性剂相比，非离子表面活性剂对酶活的损伤最低。考虑到APG系列作为有一定去污能力的非离子表面活性剂，可同时用于洗衣液中作为去污剂。专利技术人将柠檬酸铵钙和广分布的烷基葡萄糖糖苷表面活性剂APG(即不同碳链产品的混合物)复配后，获得了一种优良的柠檬酸铵钙-APG0810-APG1214三元复合稳定剂，对所示蛋白酶在洗衣液中有超过柠檬酸铵钙和硼砂的稳定作用。在本专利技术的一种实施方式中，所述蛋白酶是Purafect4000L时，所述复合稳定剂包括2％柠檬酸铵钙、1％APG0810、2％APG1214。在本专利技术的一种实施方式中，所述蛋白酶是PurafectPrime4000L时，所述用于洗衣液的蛋白酶复合稳定剂，包括2％柠檬酸铵钙、0.5％APG0810、0.5％APG1214。在本专利技术的一种实施方式中，所述用于稳定洗衣液蛋白酶的复合稳定剂中还可以添加AEO。例如AEO7、AEO9。本专利技术还提供了使用所述用于稳定洗衣液中蛋白酶的复合稳定剂的方法，所述复合稳定剂与酶的质量比例是(0.5-5):1。[有益效果]在25～40℃的保存条件下，复合稳定剂能够比公认稳定作用很好的硼砂更好地减少酶活的损失。例如，在pH7和37℃下，用硼砂做稳定剂，Purafect4000L和PurafectPrime4000L的3周酶活保持率分别为2.87％和13.5％；而应用本专利技术提供的蛋白酶复合稳定剂，同样条件下的3周酶活保持率分别为47.1％和42.0％。在pH7和25℃下，本专利技术提供的蛋白酶复合稳定剂可分别使Purafect4000L和PurafectPrime4000L的3周酶活保持率达到84.3％和71.5％，仍然高于同样条件下硼砂所致的65.7％和68.4％。附图说明图1柠檬酸铵钙及其它稳定剂对蛋白酶的稳定作用对比，a：Purafect4000L，b：EFFECTENZP150，c：PurafectPrime4000L。图2表面活性剂对蛋白酶酶活的影响，a：Purafect4000L，b：PurafectPrime4000L。图3混合表面活性剂对Purafect4000L和PurafectPrime4000L酶活的影响。具体实施方式测定蛋白酶酶活的方法：Folin法。具体地，将1％的酪蛋白溶液1mL置于试管中，于40℃恒温水浴中恒温15min，加入1mL稀释一定倍数的酶液。反应15min后，加入2mL三氯乙酸(0.4mol/L)终止反应。继续放置于水浴中恒温15min，过滤。移取滤液1mL，加入5mL碳酸钠溶液(0.4mol/L)和稀释好的福林试剂1mL，摇匀后继续置于40℃恒温水槽中20min，恢复至室温后于紫外分光光度计测定波长660nm处的吸光度。在40℃下每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸所需要的酶量，定义为1个蛋白酶酶活单位。酶活单位为U/mL。式中，A，由样品测得的吸光度，与标准曲线比对可得到相应的酪氨酸质量(μg)；4，从4mL反应中取出1mL溶液测定；t，反应时间，min；N，酶稀释倍数。除本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于稳定洗衣液中的蛋白酶的复合稳定剂，其特征在于，包含柠檬酸铵钙和烷基糖苷表面活性剂，所述柠檬酸铵钙是由柠檬酸铵与柠檬酸钙按照比例复配得到的。

【技术特征摘要】
1.一种用于稳定洗衣液中的蛋白酶的复合稳定剂，其特征在于，包含柠檬酸铵钙和烷基糖苷表面活性剂，所述柠檬酸铵钙是由柠檬酸铵与柠檬酸钙按照比例复配得到的。2.根据权利要求1所述的一种用于稳定洗衣液中的蛋白酶的复合稳定剂，其特征在于，所述柠檬酸铵钙是由柠檬酸铵与柠檬酸钙按照摩尔比为(25-20)：1的比例复配得到的。3.根据权利要求1所述的一种用于稳定洗衣液中的蛋白酶的复合稳定剂，其特征在于，所述柠檬酸铵钙对烷基糖苷表面活性剂的质量比为1:1-1.5。4.根据权利要求1或2所述的一种用于稳定洗衣液中的蛋白酶的复合稳定剂，其特征在于，所述烷基糖苷表面活性剂是C8-10的烷基葡萄糖糖苷APG0810和C12-14烷基葡萄糖糖苷APG1214的混合物，APG0810和APG1214的质量比为1:(0.25-4)。5.根据权利要求1或2或4所述的一种用于稳定洗衣液中的蛋白酶的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂与酶的质量比例是(0.5-5):1。6.根据权利要求1或2或...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏咏梅，李磊，吴美娜，何文广，方云，胡学一，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32