47个人类常染色体与Y染色体基因座的复合扩增试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及47个人类常染色体与Y染色体基因座的复合扩增试剂盒及其应用。本发明专利技术提供一种人类常染色体与Y染色体47个基因座的复合扩增体系，包括用于扩增47个基因座的特异性引物，所述47个基因座包括19个常染色体STR基因座、27个Y染色体STR基因座和1个性别识别基因座。利用六色荧光标记技术对47对特异性引物进行分组荧光标记，通过引物序列和工作浓度的设计和优化，实现了47个人类常染色体与Y染色体基因座的同时高效、特异、灵敏扩增。该复合扩增体系的检测结果具有很高的个体识别能力，且具有良好的数据兼容性，进而在实践上可以用于亲子鉴定和个体识别，有效降低了人类DNA分型的检测成本，提高了检测的工作效率。

Compound Amplification Kit of 47 Human Autosomal and Y Chromosome Loci and Its Application

The present invention relates to 47 human autosomal and Y chromosome loci multiplex amplification kits and their applications. The invention provides a multiplex amplification system of 47 loci of human autosomal and Y chromosome, including specific primers for amplifying 47 loci, which include 19 autosomal STR loci, 27 Y chromosome STR loci and 1 sex recognition locus. Seventy-seven pairs of specific primers were grouped by six-color fluorescence labeling technology. Through the design and optimization of primer sequence and working concentration, 47 human autosomal and Y chromosome loci were amplified simultaneously with high efficiency, specificity and sensitivity. The test results of the multiplex amplification system have high individual identification ability and good data compatibility, which can be used for paternity and individual identification in practice, effectively reducing the detection cost of human DNA typing and improving the detection efficiency.

【技术实现步骤摘要】
47个人类常染色体与Y染色体基因座的复合扩增试剂盒及其应用
本专利技术涉及分子遗传学和生物检测
，具体涉及47个人类常染色体与Y染色体基因座的复合扩增试剂盒及其应用。
技术介绍
短串联重复序列基因座(ShortTandemRepeat，STR)是目前普遍应用的遗传标记。其广泛存在于原核及真核生物基因组中，是一类由2～6个核苷酸为重复单元组成的几十至一百多个的核苷酸重复序列。不同数目的核心序列呈串联重复排列，其长度呈现遗传多态性。根据两端保守性序列，设计引物，进行PCR，然后可以通过聚丙烯酰胺、琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳等检测STR遗传标记的多态性。STR标记与其他遗传标记物相比，STR基因座片段小、容易扩增，更适用于微量和降解检材，各基因座的扩增条件相近而能够复合扩增，因而具有快速、高效、准确、灵敏、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，与以往RFLP等技术相比，STR复合扩增技术具有极大的优越性。随着国内STR人类身份识别试剂盒和DNA数据库建库工程的发展，可以实现在一次扩增检测中同时获得人类常染色体与Y染色体两套STR基因座分型数据的试剂盒产品，越来越受到客户的喜爱。随着数据库建设市场的扩大，亟需一个的个体识别率更高，检测基因座数更多、兼容性更好的试剂盒。利用五色荧光检测技术的常染色体、Y染色体的STR试剂盒已无法满足目前市场的需求，六色荧光检测技术的建立、应用和改进，能够更好地满足常染色体与Y染色体的STR基因座荧光检测试剂盒的需要。随着STR检测试剂盒的应用越来越广泛，快速扩增也是试剂盒性能提升的重要性能，扩增速度的提高大大减少了时间成本的浪费，提高了工作效率。传统的试剂盒扩增时间在3～4小时左右，申请人前期开发的Goldeneye20A试剂盒扩增时间也在2.5小时左右。因此，仍需进一步缩短扩增时间，提升试剂盒的性能和工作效率。综上所述，DNA鉴定领域亟需开发能够实现一个反应同时扩增更多基因座、能提供更多信息量、具有更好兼容性和更快扩增速度的基因座扩增体系。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的复合扩增同时检测的STR基因座的数量限制、试剂盒的兼容性差等技术问题，本专利技术提供一种能够同时检测47个人类常染色体与Y染色体基因座的复合扩增试剂盒及其应用。一方面，本专利技术提供一种用于人类染色体DNA分型的基因座分子标记，其特征在于，所述分子标记包括如下47个基因座：19个常染色体STR基因座：D7S820、TH01、D6S1043、TPOX、PentaE、D16S539、CSF1PO、D19S433、FGA、PentaD、D8S1179、D18S51、D3S1358、vWA、D5S818、D13S317、D21S11、D2S1338、D12S391；27个Y染色体STR基因座：DYS392、DYS389I、DYS456、DYS389II、DYS19、DYS460、DYS518、DYS437、DYS576、DYS439、Y_GATA_H4、DYS533、DYS391、DYS627、DYS570、DYS635、DYS481、DYS393、DYS390、DYS448、DYS438、DYS458、DYF387S1、DYS385、DYS449；1个性别识别基因座Amelogenin。另一方面，本专利技术提供一种人类常染色体与Y染色体47个基因座的复合扩增试剂盒，其包括所述的47个基因座的扩增引物。本领域技术人员应当理解，用于复合扩增所述47个基因座的产品可以根据需要制备为不同的形式，其包括但不限于检测试剂、试剂盒、检测或扩增体系，所有包括所述47个基因座的扩增引物且能够实现所述47个基因座的复合扩增的产品均在本专利技术的保护范围内。优选的，所述复合扩增试剂盒的引物成分为所述47个基因座的扩增引物所组成的引物混合物。优选的，所述扩增引物的序列如SEQIDNO.1～94所示：其中，19对常染色体STR基因座的扩增引物序列如下：D7S820、SEQIDNO.1～2；TH01、SEQIDNO.3～4；D6S1043、SEQIDNO.5～6；TPOX、SEQIDNO.7～8；PentaE、SEQIDNO.9～10；D16S539、SEQIDNO.11～12；CSF1PO、SEQIDNO.13～14；D19S433、SEQIDNO.15～16；FGA、SEQIDNO.17～18；PentaD、SEQIDNO.19～20；D8S1179、SEQIDNO.21～22；D18S51、SEQIDNO.23～24；D3S1358、SEQIDNO.25～26；vWA、SEQIDNO.27～28；D5S818、SEQIDNO.29～30；D13S317、SEQIDNO.31～32；D21S11、SEQIDNO.33～34；D2S1338、SEQIDNO.35～36；D12S391、SEQIDNO.37～38；27对Y染色体SYR基因座的扩增引物序列如下：DYS392、SEQIDNO.39～40；DYS389I、SEQIDNO.41～42；DYS456、SEQIDNO.43～44；DYS389II、SEQIDNO.45～46；DYS19、SEQIDNO.47～48；DYS460、SEQIDNO.49～50；DYS518、SEQIDNO.51～52；DYS437、SEQIDNO.53～54；DYS576、SEQIDNO.55～56；DYS439、SEQIDNO.57～58；Y_GATA_H4、SEQIDNO.59～60；DYS533、SEQIDNO.61～62；DYS391、SEQIDNO.63～64；DYS627、SEQIDNO.65～66；DYS570、SEQIDNO.67～68；DYS635、SEQIDNO.69～70；DYS481、SEQIDNO.71～72；DYS393、SEQIDNO.73～74；DYS390、SEQIDNO.75～76；DYS448、SEQIDNO.77～78；DYS438、SEQIDNO.79～80；DYS458、SEQIDNO.81～82；DYF387S1a、SEQIDNO.83～84；DYF387S1b、SEQIDNO.85～86；DYS385a、SEQIDNO.87～88；DYS385b、SEQIDNO.89～90；DYS449、SEQIDNO.91～92；1对性别识别基因座的扩增引物序列如下：Amelogenin、SEQIDNO.93～94。更优选的，所述复合扩增试剂盒中的引物在扩增时的工作浓度如下：19对常染色体STR基因座的工作浓度：D7S8200.07μM、TH010.1μM、D6S10430.12μM、TPOX0.09μM、PentaE0.13μM、D16S5390.11μM、CSF1PO0.13μM、D19S4330.18μM、FGA0.09μM、PentaD0.15μM、D8S11790.2μM、D18S510.03μM、D3S13580.04μM、vWA0.05μM、D5S8180.04μM、D13S3170.06μM、D21S110.09μM、D2S13380.13μM、D12S3910.16μM。27对Y染色体STR基因座的工作浓度：DYS3920.04μM、DYS389I本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于人类常染色体与Y染色体DNA分型的基因座分子标记，其特征在于，所述分子标记包括如下人类常染色体与Y染色体的47个基因座：19个常染色体STR基因座：D7S820、TH01、D6S1043、TPOX、Penta E、D16S539、CSF1PO、D19S433、FGA、Penta D、D8S1179、D18S51、D3S1358、vWA、D5S818、D13S317、D21S11、D2S1338、D12S391；27个Y染色体STR基因座：DYS392、DYS389I、DYS456、DYS389II、DYS19、DYS460、DYS518、DYS437、DYS576、DYS439、Y_GATA_H4、DYS533、DYS391、DYS627、DYS570、DYS635、DYS481、DYS393、DYS390、DYS448、DYS438、DYS458、DYF387S1、DYS385、DYS449；1个性别识别基因座Amelogenin。

【技术特征摘要】
1.一种用于人类常染色体与Y染色体DNA分型的基因座分子标记，其特征在于，所述分子标记包括如下人类常染色体与Y染色体的47个基因座：19个常染色体STR基因座：D7S820、TH01、D6S1043、TPOX、PentaE、D16S539、CSF1PO、D19S433、FGA、PentaD、D8S1179、D18S51、D3S1358、vWA、D5S818、D13S317、D21S11、D2S1338、D12S391；27个Y染色体STR基因座：DYS392、DYS389I、DYS456、DYS389II、DYS19、DYS460、DYS518、DYS437、DYS576、DYS439、Y_GATA_H4、DYS533、DYS391、DYS627、DYS570、DYS635、DYS481、DYS393、DYS390、DYS448、DYS438、DYS458、DYF387S1、DYS385、DYS449；1个性别识别基因座Amelogenin。2.一种人类常染色体与Y染色体47个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的47个基因座的扩增引物。3.根据权利要求2所述的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述扩增引物的序列如SEQIDNO.1～94所示：其中，19对常染色体STR基因座的扩增引物的序列如下：D7S820、SEQIDNO.1～2；TH01、SEQIDNO.3～4；D6S1043、SEQIDNO.5～6；TPOX、SEQIDNO.7～8；PentaE、SEQIDNO.9～10；D16S539、SEQIDNO.11～12；CSF1PO、SEQIDNO.13～14；D19S433、SEQIDNO.15～16；FGA、SEQIDNO.17～18；PentaD、SEQIDNO.19～20；D8S1179、SEQIDNO.21～22；D18S51、SEQIDNO.23～24；D3S1358、SEQIDNO.25～26；vWA、SEQIDNO.27～28；D5S818、SEQIDNO.29～30；D13S317、SEQIDNO.31～32；D21S11、SEQIDNO.33～34；D2S1338、SEQIDNO.35～36；D12S391、SEQIDNO.37～38；27对Y染色体STR基因座的扩增引物序列如下：DYS392、SEQIDNO.39～40；DYS389I、SEQIDNO.41～42；DYS456、SEQIDNO.43～44；DYS389II、SEQIDNO.45～46；DYS19、SEQIDNO.47～48；DYS460、SEQIDNO.49～50；DYS518、SEQIDNO.51～52；DYS437、SEQIDNO.53～54；DYS576、SEQIDNO.55～56；DYS439、SEQIDNO.57～58；Y_GATA_H4、SEQIDNO.59～60；DYS533、SEQIDNO.61～62；DYS391、SEQIDNO.63～64；DYS627、SEQIDNO.65～66；DYS570、SEQIDNO.67～68；DYS635、SEQIDNO.69～70；DYS481、SEQIDNO.71～72；DYS393、SEQIDNO.73～74；DYS390、SEQIDNO.75～76；DYS448、SEQIDNO.77～78；DYS438、SEQIDNO.79～80；DYS458、SEQIDNO.81～82；DYF387S1a、SEQIDNO.83～84；DYF387S1b、SEQIDNO.85～86；DYS385a、SEQIDNO.87～88；DYS385b、SEQIDNO.89～90；DYS449、SEQIDNO.91～92；1对性别识别基因座的扩增引物序列如下：Amelogenin、SEQIDNO.93～94。4.根据权利要求2或3所述的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述复合扩增试剂盒中的引物在扩增时的工作浓度如下：所述19对常染色体STR基因座的扩增引物的工作浓度：D7S8200.07μM、TH010.1μM、D6S10430.12μM、TPOX0.09μM、PentaE0.13μM、D16S5390.11μM、CSF1PO0.13μM、D19S4330.18μM、FGA0.09μM、PentaD0.15μM、D8S11790.2μM、D18S510.03μM、D3S13580.04μM、vWA0.05μM、D5S8180.04μM、D13S3170.06μM、D21S110.09μM、D2S13380.13μM、D12S3910.16μM；所述27对Y染色体STR基因座的扩增引物的工作浓度：DYS3920.04μM、DYS389I0.03μM、DYS4560.05μM、DYS389II0.06μM、DYS190....

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：基点认知技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11