一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法技术方案

本发明专利技术提供了一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法，属于植物转基因技术领域。将含目标重组载体发根农杆菌的菌液固液分离，得到的含目标重组载体发根农杆菌菌体重悬，用得到的发根农杆菌悬浮液注射到经济植物幼苗的茎部，注射后10～12d，经济植物幼苗茎部伤口处生长出愈伤组织；幼苗继续培养28～35d，当愈伤组织分化为再生毛状根时剪断原始毛状根系。本发明专利技术所述构建方法适用多种经济植物，且毛状根的再生率和愈伤组织再生率较高。所述构建方法提供非常快速有效的基因系统功能分析、次生代谢物工程和植物应激反应研究。构建的根系转基因系统只有根是转基因的而不是整株植物，这也为研究根和茎之间信号转导的良好系统。

A Construction Method of Effective Root Transgenic System for Economic Plants

The invention provides a method for constructing an economic plant effective root system transgenic system, which belongs to the field of plant genetic transformation technology. Agrobacterium rhizogenes containing target recombinant vector was separated from bacterial liquid and solid-liquid. The weight of Agrobacterium rhizogenes containing target recombinant vector was suspended. Agrobacterium rhizogenes suspension was injected into the stem of economic plant seedlings. 10-12 days after injection, callus grew at the stem wound of economic plant seedlings. The seedlings were cultured for 28-35 days and cut when the callus differentiated into regenerated hairy roots. The original hairy root system was broken. The construction method of the invention is applicable to various economic plants, and the regeneration rate of hairy roots and callus is higher. The construction method provides a very fast and effective functional analysis of gene system, secondary metabolite engineering and plant stress response research. Only the roots are genetically modified, not the whole plant. This is also a good system for studying signal transduction between roots and stems.

【技术实现步骤摘要】
一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法
本专利技术属于植物转基因
，具体涉及一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法。
技术介绍
农杆菌介导的植物转化系统是近几十年来植物基因工程中最广泛和最成功的方法(Gelvin，2003；Vain，2007年；Matveeva和Lutova，2014年)。根癌农杆菌可通过伤害和将肿瘤诱导(Ti)质粒转移至植物细胞核而使肿瘤在植物中生长。基于这一理论，通过修饰和去除Ti质粒将肿瘤诱导基因转化为所需基因，并携带任何所需基因进入植物细胞的染色体。自1983年首次广泛使用农杆菌介导的植物转化方法成功转移外源基因进入烟草的示范以来，已在更有效的转基因系统中建立了模式植物和一些作物的基因功能研究和植物遗传修饰(Zhang等人，2006年；温兹勒等人,1989年；石田等人，1996年)。然而，农杆菌介导的模型植物稳定转化方案的开发已经付出了更多的努力，迄今为止仅限于少数植物(克劳和本特，1998年；Hoekema等人，1989年；姆里佐瓦埃艾尔，2014年)。由于其独特性或长的生长周期，大多数药用植物和木本植物植物缺乏高效的基因功能分析快速筛选系统，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将含目标重组载体发根农杆菌的菌液固液分离，得到的含目标重组载体发根农杆菌菌体重悬，得到发根农杆菌悬浮液；2)用所述发根农杆菌悬浮液注射到经济植物幼苗的茎部，注射后10～12d，经济植物幼苗茎部伤口处生长出愈伤组织；3)将带有愈伤组织的经济植物幼苗培养28～35d，当愈伤组织分化为再生毛状根时剪断原始毛状根系。

【技术特征摘要】
1.一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将含目标重组载体发根农杆菌的菌液固液分离，得到的含目标重组载体发根农杆菌菌体重悬，得到发根农杆菌悬浮液；2)用所述发根农杆菌悬浮液注射到经济植物幼苗的茎部，注射后10～12d，经济植物幼苗茎部伤口处生长出愈伤组织；3)将带有愈伤组织的经济植物幼苗培养28～35d，当愈伤组织分化为再生毛状根时剪断原始毛状根系。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1)中发根农杆菌的菌株包括K599、MSU440、C58C1或ArA4。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1)中发根农杆菌悬浮液的OD600值为0.2～0.6。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)中经济植物包括草本植物、灌木植物和乔木植物。5.根据权利要求1或4所述的构建方法，其特征在于，步骤2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：付玉杰，孟冬，牛丽丽，杨清，董碧莹，宋治华，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11