一种福建水仙茶提取物及其制备方法和在抑制牙周炎致病菌中的应用技术

本发明专利技术公开了一种福建水仙茶提取物及其制备方法和在抑制牙周炎致病菌中的应用，该制备方法包括福建水仙茶与体积分数为40～60％的乙醇水溶液混合，进行超声波浸提，过滤得到滤液，滤液经浓缩、过滤和离心后，冷冻干燥得到粗提物I；福建水仙茶与乙醇水溶液的料液比为1：10～20；利用AB‑8型大孔树脂对粗提物I进行静置吸附，依次经水和乙醇水溶液进行梯度洗脱，仅收集80％乙醇水溶液的洗脱组分，再经旋转蒸发和冷冻干燥，得到福建水仙茶提取物。本发明专利技术通过醇提、树脂纯化得到了福建水仙茶提取物，并通过抑菌实验证明福建水仙茶提取物具有抑制牙周炎致病菌的用途，且抑菌效果较好，为进一步制备各类抑制牙周炎致病菌产品提供了依据。

A Fujian Narcissus tea extract and its preparation method and its application in inhibiting pathogenic bacteria of periodontitis

The invention discloses an extract of Fujian Narcissus Tea and its preparation method and its application in inhibiting periodontitis pathogenic bacteria. The preparation method includes mixing Fujian Narcissus Tea with ethanol aqueous solution of 40-60% volume fraction, ultrasonic extraction, filtering to obtain filtrate, concentration, filtration and centrifugation of filtrate, freeze-drying to obtain crude extract I; Fujian Narcissus Tea is water-soluble with ethanol; The ratio of material to liquid was 1:10-20. The crude extract I was adsorbed by AB_8 macroporous resin, then eluted gradiently by water and ethanol solution. Only 80% of the elution components were collected, and then the extract of Fujian Narcissus Tea was obtained by rotary evaporation and freeze-drying. The extract of Fujian Narcissus Tea is obtained by alcohol extraction and resin purification, and the bacteriostasis experiment proves that the extract of Fujian Narcissus Tea has the function of inhibiting periodontitis pathogenic bacteria, and the bacteriostasis effect is good, which provides a basis for further preparation of various products of inhibiting periodontitis pathogenic bacteria.

【技术实现步骤摘要】
一种福建水仙茶提取物及其制备方法和在抑制牙周炎致病菌中的应用
本专利技术涉及植物提取物
，尤其涉及一种福建水仙茶提取物及其制备方法和在抑制牙周炎致病菌中的应用。
技术介绍
福建水仙茶是福建乌龙茶类中的一种，为无性繁殖系品种，属小乔木型，原产于建阳县水吉的大湖，并逐步被外地引植。水仙茶树树势高大，主干明显，分枝稀，叶片呈水平状着生，叶片大而厚，色浓绿，叶柄粗扁，梗粗，节间长，芽叶含水量高。该品种育芽力和持嫩性较强，一芽三叶盛期在4月下旬，萌芽开采期较迟；抗逆性较强，扦插繁殖发根率较高，根系发达，吸肥力强，植株经济寿命长。福建水仙茶制作一般包括萎凋、做青、揉捻、初焙、包揉、足火等道工序。由于水仙叶肉肥厚，做青时必须根据叶厚水多的特点，以“轻摇薄摊，摇做结合”的方法灵活操作。水仙茶树在福建多地引种并扩大种植，按产地分为以下几类：建瓯水仙，条索紧结壮实，色泽油润，香气高雅且冗长，兰花香极显，汤色金黄明亮清澈，叶底肥厚柔软，镶嵌“三红七绿”。武夷水仙，色泽绿褐带宝色、条索肥壮，香气浓锐馥郁，兰花香优雅，汤色橙黄明亮，滋味醇厚甘爽显岩韵，叶底肥嫩软亮、叶缘朱砂红点鲜明，素有“醇不过水仙”的美誉。闽南水仙，索紧结卷曲、色泽砂绿油润，香气清高带兰花型，滋味醇厚甘滑，汤色金黄清澈明亮，叶底肥厚软亮显红边。漳平水仙，又名“纸包茶”，饼外形呈四方形，砂绿油润间蜜黄，红边明；汤色为金黄明亮。目前，关于乌龙茶类提取物的研究报道不少，例如：1994年，Ooshima等(OoshimaT,MinamiT,AonoW,etal.Reductionofdentalplaquedepositioninhumansbyoolongteaextract[J].CariesRes,1994,28(3):146-149)检验35名18-29岁志愿者，在每次进食前后与睡觉前使用溶于0.2％酒精的0.5mg/mL的乌龙茶提取物冲洗口腔一周后发现牙菌斑沉积量减少21％。Matsumoto等(MatsumotoM,MinamiT,SasakiH,etal.InhibitoryEffectsofOolongTeaExtractonCaries–InducingPropertiesofMutansStreptococci[J].CariesResearch,1999,33(6):441-445.)研究发现乌龙茶提取物在1mg/mL的浓度下减少远缘链球菌6715或变形链球菌MT8148R的产酸率及其粘附，认为乌龙茶可降低口腔链球菌的细胞表面的疏水性，并且可诱导变形链球菌，口腔链球菌，血链球菌和格氏链球菌的细胞聚集。然而，对于福建水仙茶提取物的制备和应用却鲜有报道，尤其是在抑制牙周炎致病菌中用途，更无相关报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一种福建水仙茶提取物及其制备方法和在抑制牙周炎致病菌中的应用，该福建水仙茶提取物具有抑制牙周炎致病菌的新用途，且抑菌效果好，为进一步制备各类抑制牙周炎致病菌产品提供了依据。具体技术方案如下：一种福建水仙茶提取物的制备方法，包括：(1)取粉碎后的福建水仙茶，与体积分数为40～60％的乙醇水溶液混合，进行超声波浸提，过滤得到滤液，滤液经浓缩、过滤和离心后，冷冻干燥得到粗提物I；福建水仙茶与乙醇水溶液的料液比为1：10～20；(2)利用AB-8型大孔树脂对粗提物I进行静置吸附，并进行梯度洗脱，仅收集80％乙醇水溶液的洗脱组分，再经旋转蒸发和冷冻干燥，得到福建水仙茶提取物；所述梯度洗脱的程序为：依次经水以及体积分数为20％，40％，60％和80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱；或者，依次经水以及体积分数为50％，80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱。本专利技术针对福建水仙茶采用特定的大孔树脂以及洗脱组分，得到了具有特殊功能的福建水仙茶提取物；在抑菌试验中，该提取物能够用于抑制牙周炎致病菌，即：牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)和具核梭杆菌(F.nucleatum)，尤其是具核梭杆菌(F.nucleatum)；说明福建水仙茶提取物具有抑制牙周炎致病菌的作用。进一步地，步骤(2)中，粗提物I与AB-8型大孔树脂的质量比为1：20～30。进一步地，步骤(2)中，水和乙醇水溶液的洗脱流速为1～1.5BV/h。为探究福建水仙茶提取物抑制牙周炎致病菌的机理，本专利技术采用制备型高效液相色谱仪对福建水仙茶提取物进行两次分离，分离得到了单体化合物I(即：F1)和单体化合物II(即：F2)；并通过利用质谱和核磁共振波谱等现代技术手段进行结构鉴定，得知：F1和F2分别是：Quercetin3-O-[(E)-p-coumaroyl-(1→2)][α-L-arabinopyranosyl-(1→3)][β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-D-glucopyranoside)；和Kaempferol3-O-[(E)-p-coumaroyl-(1→2)][α-L-arabinopyranosyl-(1→3)][β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-D-glucopyranoside。其中，液相色谱的分离条件为：0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈流动相梯度洗脱，一次上样量100mg，流速10mL/min；二次制备后，两种单体化合物纯度分别达到98.77％和97.08％。故，进一步地，本专利技术提供了一种福建水仙茶提取物，该福建水仙茶提取物中同时含有化合物I和化合物II；两种化合物的结构式如下：本专利技术提供了所述福建水仙茶提取物在抑制牙周炎致病菌中的应用。进一步地，所述牙周炎致病菌为牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)和/或具核梭杆菌(F.nucleatum)。进一步地，所述福建水仙茶提取物对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)的有效抑菌浓度≥125μg/mL；对具核梭杆菌(F.nucleatum)的有效抑菌浓度≥62.5μg/mL。本专利技术还提供了化合物I和化合物II在抑制牙周炎致病菌中的应用。两种化合物的结构式如下：进一步地，所述牙周炎致病菌为牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)和/或具核梭杆菌(F.nucleatum)。本专利技术通过微量二倍稀释法测定了F1和F2对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的抑制作用，最低抑菌浓度在0.12-0.24mM范围内，显示两者对牙周炎致病菌均具有较强的抑制效果；尤其是，F2对具核梭杆菌的抑制作用更佳。并且，用结晶紫染色法证明了F2可以通过抑制细菌生长和生物膜形成及螯合铁离子等途径减少口腔疾病的发生；进一步反映了福建水仙茶提取物抑制牙周炎致病菌的机理。进一步地，所述化合物I对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)和具核梭杆菌(F.nucleatum)的有效抑菌浓度均≥0.24mM；所述化合物II对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)的有效抑菌浓度≥0.24mM，对具核梭杆菌(F.nucleatum)的有效抑菌浓度≥0.12mM。化合物在低于MIC的浓度下虽然无法杀灭细菌，但会对其生物膜的形成和新陈代谢产生影响，从而抑制细菌对口腔的毒害。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种福建水仙茶提取物的制备方法，其特征在于，包括：(1)取粉碎后的福建水仙茶，与体积分数为40～60％的乙醇水溶液混合，进行超声波浸提，过滤得到滤液，滤液经浓缩、过滤和离心后，冷冻干燥得到粗提物I；福建水仙茶与乙醇水溶液的料液比为1：10～20；(2)利用AB‑8型大孔树脂对粗提物I进行静置吸附，并进行梯度洗脱，仅收集80％乙醇水溶液的洗脱组分，再经旋转蒸发和冷冻干燥，得到福建水仙茶提取物；所述梯度洗脱的程序为：依次经水以及体积分数为20％，40％，60％和80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱；或者，依次经水以及体积分数为50％，80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种福建水仙茶提取物的制备方法，其特征在于，包括：(1)取粉碎后的福建水仙茶，与体积分数为40～60％的乙醇水溶液混合，进行超声波浸提，过滤得到滤液，滤液经浓缩、过滤和离心后，冷冻干燥得到粗提物I；福建水仙茶与乙醇水溶液的料液比为1：10～20；(2)利用AB-8型大孔树脂对粗提物I进行静置吸附，并进行梯度洗脱，仅收集80％乙醇水溶液的洗脱组分，再经旋转蒸发和冷冻干燥，得到福建水仙茶提取物；所述梯度洗脱的程序为：依次经水以及体积分数为20％，40％，60％和80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱；或者，依次经水以及体积分数为50％，80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱。2.如权利要求1所述的福建水仙茶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，粗提物I与AB-8型大孔树脂的质量比为1：20～30。3.如权利要求1所述的福建水仙茶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，水和乙醇水溶液的洗脱流速为1～1.5BV/h。4.一种如权利要求1～3任一项所述的制备方法制得的福建水仙茶提取物，其特征在于，所述福建水仙茶提取物中同时含有化合物I和化合物II；两种化合物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴媛媛，顾莹婕，杨蕾玉，屠幼英，何普明，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33