一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，包括供体材料选取、外植体消毒处理、分生组织剥离、初代培养、继代培养、生根培养。本发明专利技术提供一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，分生组织剥离简便，提高了接种效率，消毒更加彻底，降低了污染率，充分利用了供体材料的草莓匍匐茎。本方法组培的草莓植株繁育所得脱毒草莓苗较农户自留草莓植株繁育所得普通草莓苗产量提高6％～20％，单果重增加4％～12％，畸形果率下降13％～17％。

A Method for Virus-free Tissue Culture of Strawberry Axillary Buds

The invention discloses a method for virus-free tissue culture of strawberry axillary buds, including selection of donor materials, disinfection of explants, stripping of meristem, primary culture, subculture and rooting culture. The invention provides a method for detoxification tissue culture of strawberry axillary buds. The meristem is stripped easily, the inoculation efficiency is improved, the disinfection is more thorough, the pollution rate is reduced, and the strawberry stolon of donor material is fully utilized. The yield of virus-free strawberry seedlings obtained from tissue culture of strawberry plants increased by 6%-20%, the weight of single fruit increased by 4%-12%, and the rate of deformed fruit decreased by 13%-17% compared with that obtained from farmers'own strawberry plants.

【技术实现步骤摘要】
一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法
本专利技术属于园艺植物脱毒组培
，特别涉及一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法。技术背景草莓，属蔷薇科草莓属(FragariaananassaDuch.)多年生草本植物，果实酸甜可口，具有浓郁的特殊香味，营养丰富，即可鲜食亦可深加工成果酱、果汁食用，是一种经济效益较高的园艺作物，在各地被广泛栽培。随着草莓栽培规模与面积的不断扩大，其种苗需求量也日益增多。目前生产上，很多农户依然通过自留草莓植株采取匍匐茎繁殖法繁育草莓种苗，长此以往，必然导致病毒在植株体内积累，引起果实品质变差、产量下降等品种退化现象。与此同时，草莓种苗商业化繁育多采用脱毒组培方法繁育无毒草莓种苗，由此解决以上问题，但常规脱毒组培方法为采用茎尖进行，由于茎尖结构复杂，存在剥取生长点难度大、消毒不彻底、容易产生污染等问题，也尚未检索到利用匍匐茎腋芽作外植体的脱毒组培方法报道。此外，在匍匐茎茎尖脱毒组培过程中，与匍匐茎茎尖相邻的奇数节位腋芽未得到充分利用，亦造成了供体材料资源的浪费。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，该方法分生组织剥离简便，提高了接种效率，消毒更加彻底，降低了污染率，充分利用了供体材料的草莓匍匐茎。为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供体植物材料的选取：选取生长健壮的草莓植株作供体材料；(2)外植体消毒处理：剪取5～10cm奇数节位匍匐茎，自来水冲洗15～20min，然后在超净工作台上依次使用体积比为70％～75％酒精溶液浸泡20～30s，无菌水冲洗1～2遍，体积比为2％～5％的次氯酸钠溶液浸泡5～10min，无菌水冲洗3～5遍；(3)分生组织剥离：去除匍匐茎奇数节位腋芽外部包裹的苞叶，将腋芽置于解剖显微镜下，利用解剖针剥取腋芽顶端0.2～0.4mm分生组织；(4)初代培养：将剥离的分生组织迅速接入1号培养基，放入培养室培养；(5)继代培养：初代培养30～60d后，分生组织分化成小芽，将小芽转接入2号培养基进行继代培养，此后，小芽基部会诱导萌发更多的芽，每隔20～40d进行1次继代培养，继代次数总共不超过10代；(6)生根培养：继代培养结束后，选取高度大于2cm的芽接入3号培养基进行生根培养，经过20～40d的培养，芽基部会诱导萌发数条根系，此时即得到完整的草莓脱毒试管苗。优选的，所述的供体材料草莓具有原物种的优良性状。优选的，所述的1号培养基为：MS+TDZ0.001mg/L～0.01mg/L+6-BA0.5mg/L～2.0mg/L+NAA0.01mg/L～0.1mg/L+GA0.01mg/L～0.05mg/L；2号培养基为MS+6-BA0.5mg/L～1.0mg/L+IBA0.01mg/L～0.1mg/L+GA0.001mg/L～0.01mg/L；3号培养基为MS+NAA0.01mg/L～0.5mg/L+IBA0.05mg/L～0.5mg/L+碳粉0.1％～0.01％，所有培养基pH均调整为5.8～6.0。优选的，所述的培养室培养环境条件均为温度20～25℃、相对湿度60％～90％、光照强度2000lx～3000lx、光照周期12h/d～16h/d。与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果为：腋芽分生组织外部包裹的叶片相较于茎尖分生组织外部包裹的叶片，具有数量少、结构简单的特点，剥取腋芽分生组织操作更加简便快捷，外植体消毒更加彻底，腋芽分生组织相较茎尖分生组织接种培养污染率降低了5％～10％。此外，若选用匍匐茎作供体材料，匍匐茎顶端茎尖生长点作外植体，通常都会将匍匐茎其余部分弃之。本专利技术选用匍匐茎奇数节位腋芽作植体进行脱毒组培，在利用匍匐茎顶端茎尖脱毒组培的同时，还可以利用匍匐茎茎尖相邻节位着生的腋芽作供体，充分利用了匍匐茎供体材料。同时，本方法组培的草莓植株繁育所得脱毒草莓苗较农户自留草莓植株繁育所得普通草莓苗产量提高12％～20％，单果重增加6％～12％，畸形果率下降13％～17％。附图说明图1为本专利技术分生组织剥取过程中，在显微镜下解剖腋芽分生组织的图片；图2为本专利技术初代培养过程中，分生组织诱导分化为小芽的图片；图3为本专利技术继代培养过程中，小芽基部萌发诱导更多芽的图片；图4为本专利技术进行生根培养时的图片；图5为本专利技术生根培养结束后，形成的完整试管苗的图片。具体实施方式下面结合实例说明本专利技术的具体实施方式。一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，其步骤为：(1)供体材料选取：从武汉市农科院作物所基地选取生长健壮、具有该品种优良性状的草莓作供体材料。(2)外植体消毒处理：剪取6cm奇数节位匍匐茎，自来水冲洗20min。在超净工作台上依次使用体积比为70％酒精溶液浸泡20s，无菌水冲洗1遍，体积比为2％次氯酸钠溶液浸泡8min，无菌水冲洗3遍。(3)分生组织剥离：去除匍匐茎奇数节位腋芽外部包裹的苞叶，将腋芽置于解剖显微镜下，利用解剖针剥取腋芽顶端0.2～0.4mm分生组织。(4)初代培养：将剥离的分生组织迅速接入的培养基MS+TDZ0.001mg/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.1mg/L，放入培养室进行初代培养45d。初代培养基pH调节为5.8，培养室培养环境条件控制为温度20～25℃、相对湿度60％～90％、光照强度2000lx～3000lx、光照周期14h/d。(5)继代培养：初代培养结束后，分生组织分化成小芽，将小芽转接入培养基MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.01mg/L+GA0.01mg/L进行继代培养。此后，小芽基部会诱导萌发更多的芽，每隔30d进行1次继代培养，继代培养8次。继代培养基pH调节为5.8，培养室培养环境条件控制为温度20～25℃、相对湿度60％～90％、光照强度2000lx～3000lx、光照周期14h/d。(6)生根培养：继代培养结束后，选取高度大于2cm的芽接入培养基MS+NAA0.01mg/L+IBA0.25mg/L+碳粉0.01g/L进行生根培养，经过30d的培养，芽基部诱导萌发出数条根系，此时即得到完整的草莓脱毒试管苗。生根培养基pH调节为5.8，培养室培养环境条件控制为温度20～25℃、相对湿度60％～90％、光照强度2000lx～3000lx、光照周期14h/d。由本实施例方法组培的草莓腋芽分生组织培养污染率相较茎尖分生组织接种培养污染率降低了7％；由本实施例方法组培的草莓植株繁育所得脱毒草莓苗较农户自留草莓植株繁育所得普通草莓苗产量提高约15％，单果重增加约8％，畸形果率下降约15％。实施例2：一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，其步骤为：(1)供体材料选取：从武汉武汉市农科院作物所基地选取生长健壮、具有该品种优良性状的草莓作供体材料。(2)外植体消毒处理：剪取9cm奇数节位匍匐茎，自来水冲洗15min。在超净工作台上依次使用体积比为75％酒精溶液浸泡30s，无菌水冲洗2遍，体积比为5％次氯酸钠溶液浸泡6min，无菌水冲洗4遍。(3)分生组织剥离：去除匍匐茎奇数节位腋芽外部包裹的苞叶，将腋芽置于解剖显微镜下，利用解剖针剥取腋芽顶端0.2～0.4mm分生组织。(4)初代培养：将剥离的分生组织迅速接入的培养基MS+TDZ0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供体植物材料的选取：选取生长健壮的草莓植株作供体材料；(2)外植体消毒处理：剪取5～10cm奇数节位匍匐茎，自来水冲洗15～20min，然后在超净工作台上依次使用体积比为70％～75％酒精溶液浸泡20～30s，无菌水冲洗1～2遍，体积比为2％～5％的次氯酸钠溶液浸泡5～10min，无菌水冲洗3～5遍；(3)分生组织剥离：去除匍匐茎奇数节位腋芽外部包裹的苞叶，将腋芽置于解剖显微镜下，利用解剖针剥取腋芽顶端0.2～0.4mm分生组织；(4)初代培养：将剥离的分生组织迅速接入1号培养基，放入培养室培养；(5)继代培养：初代培养30～60d后，分生组织分化成小芽，将小芽转接入2号培养基进行继代培养，此后，小芽基部会诱导萌发更多的芽，每隔20～40d进行1次继代培养，继代次数总共不超过10代；(6)生根培养：继代培养结束后，选取高度大于2cm的芽接入3号培养基进行生根培养，经过20～40d的培养，芽基部会诱导萌发数条根系，此时即得到完整的草莓脱毒试管苗。

【技术特征摘要】
1.一种利用草莓腋芽脱毒组培的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供体植物材料的选取：选取生长健壮的草莓植株作供体材料；(2)外植体消毒处理：剪取5～10cm奇数节位匍匐茎，自来水冲洗15～20min，然后在超净工作台上依次使用体积比为70％～75％酒精溶液浸泡20～30s，无菌水冲洗1～2遍，体积比为2％～5％的次氯酸钠溶液浸泡5～10min，无菌水冲洗3～5遍；(3)分生组织剥离：去除匍匐茎奇数节位腋芽外部包裹的苞叶，将腋芽置于解剖显微镜下，利用解剖针剥取腋芽顶端0.2～0.4mm分生组织；(4)初代培养：将剥离的分生组织迅速接入1号培养基，放入培养室培养；(5)继代培养：初代培养30～60d后，分生组织分化成小芽，将小芽转接入2号培养基进行继代培养，此后，小芽基部会诱导萌发更多的芽，每隔20～40d进行1次继代培养，继代次数总共不超过10代；(6)生根培养：继代培养结束后，选取高度大于2cm的芽接入3号培养基进行生根培养，经过20～40d的培养，芽基部会诱导萌发数条根系，此时即...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德欢，施先锋，葛米红，梁欢，周谟兵，李爱成，
申请(专利权)人：武汉市农业科学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42