一种带有样品分配垫的免疫联检试纸条制造技术

本发明专利技术公开了一种带有样品分配垫的免疫联检试纸条，属于生物检测技术领域。该免疫联检试纸条底板上设置样品分配垫和试纸条，样品分配垫连接有至少2根试纸条，试纸条沿层析方向依次分布有：标记抗体结合垫、包被在层析膜上的捕获抗体的检测部、包被有能够捕获标记抗体物质的质控部、层析膜和吸水材料。检测时，在样品垫上加入待测的样本，经单层基质泳动至检测线形成夹心结构，对待测样本中的物质进行检测。通过对层析试纸条加样区(样品垫)进行改进，使得试纸条在加样后，其液体(样本或缓冲液)自动分配至联检的试纸条上，操作简便，速度更快。

【技术实现步骤摘要】
一种带有样品分配垫的免疫联检试纸条
本专利技术涉及一种带有样品分配垫的免疫联检试纸条，属于生物检测

技术介绍
在免疫层析检测领域，常常需要对同一样品的多个指标进行联检。针对这种市场需求，目前已存在多种免疫试纸条联检技术，包括并联式免疫试纸条、串联式免疫试纸条等。并联式免疫试纸条是将不同的标志物的检测原料制备成独立的试纸条，将这些独立试纸条并列设置而成；串联式免疫试纸条是指将不同标志物的检测原料依次制备在同一试纸条上，形成距离结合垫形成远近不一的检测线。由于临床实际应用价值较大，上述的两种联检试纸条受到广泛应用。但，上述两种联检试剂盒也存在各自的劣势。并联式的联检试纸条开发难度低，但是检测操作时需每根试纸条都加入临床标本；串联式的联检试纸条检测操作简便，但是不同标志物的检测条件差异较大，导致试纸条开发难度极大。因此，提供一种开发难度低、操作简便、检测方便、灵敏度高的免疫试纸条，对于临床检测领域具有重要的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种免疫联检试纸条，底板上设置样品分配垫和试纸条，样品分配垫连接有至少2根试纸条，试纸条沿层析方向依次分布有：标记抗体结合垫、包被在层析膜上的捕获抗体的检测部、包被有能够捕获标记抗体物质的质控部、层析膜和吸水材料。在本专利技术的一种实施方式中，试纸条和/或结合垫和/或层析膜设置为不同宽度、厚度或长度，对应不同样品分配量。在本专利技术的一种实施方式中，所述的样品分配垫的成分包括玻璃纤维或长纤维的滤纸，样品分配垫上设有加样孔。在本专利技术的一种实施方式中，试纸条之间互相平行，且垂直于样品分配垫。在本专利技术的一种实施方式中，所述的样品分配垫上喷涂有抗人红细胞抗体。在本专利技术的一种实施方式中，所述的层析膜由硝酸纤维素、醋酸纤维素膜、尼龙膜、PVDF膜或Fusion5滤纸制成。在本专利技术的一种实施方式中，所述的质控部包被有能够与标记物结合的物质，所述的标记物质，包括胶体金、荧光微球或乳胶微球。本专利技术的第二个目的是提供上述免疫联检试纸条的制备方法，包括：先对结合垫进行喷点，制备检测线与质控线；再进行组装，将喷点好的NC膜，以质控线在上方的方式贴到底板上，在NC膜的上方贴上吸水滤纸，NC膜的下方贴上结合垫，保留样品垫区域的保护膜；将切割好的不同试纸条并列黏贴于底板上，组成检测试纸条。本专利技术的第三个目的是提供上述的免疫联检试纸条在检测样品中的应用在本专利技术的一种实施方式中，在样品分配垫上加入待测样品，经单层基质泳动至检测线形成夹心结构，对待测样品进行检测。本专利技术通过对层析试纸条加样区(样品垫)进行改进，使得试纸条在加样后，其液体(样品或缓冲液)因不同试纸条的毛细作用，自动分配至联检的试纸条上；并且，可以根据具体需求，将试纸条的不同结构(如，结合垫、层析膜等)设置为不同的宽度、厚度、长度，以调节样品分配至不同试纸条的量；可以针对同一样品的多项指标进行检测，操作人员无需特别培训，操作简便；从加样到出结果仅需15分钟，检验快速，且大幅降低了联检试纸条的开发难度。附图说明图1检测试纸条结构的俯视图，部分附图标记：1，8-结合垫，2-方向指示箭头，3-保护膜，4，9-检测线，5-质控线，6-层析膜，7-吸水材料，10-样品分配垫。图2：HCG项目性能验证；X轴为市售HCG检测试纸盒检测值(mIU/mL)，Y轴为本专利技术的免疫联检试纸条检测值(mIU/mL)；图3：LH项目性能验证；X轴为市售LH检测试纸条盒检测值(mIU/mL)，Y轴为为本专利技术的免疫联检试纸条检测值(mIU/mL)。具体实施方式为了能够更清楚地理解本专利技术的
技术实现思路
，特举以下实施例详细说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆技术实验室操作手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress，2005)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1检测试纸条结构及工作原理一种带有样品分配垫的免疫联检试纸条，包括底板，底板上依次分布有：样品分配垫10，结合垫1，8，方向指示箭头2，保护膜3，检测线4，9，5-质控线，层析膜6，吸水材料7；其中，样品分配垫10，连接两根或两根以上的试纸条。如图1所示。工作原理：以带有样品分配垫的两根联检试纸为例，检测时，将液体(样品或缓冲液)滴加在样品分配垫上；因试纸条本身的毛细作用，将液体层析至两根试纸条上；并且根据不同的应用需求，通过调节两根试纸条的结构，可将液体在两根试纸条上的实现不同比例的分配。实施例2荧光标记特异性抗体步骤一：人HCG标记抗体的制备清洗：取荧光微球(2014年购自BangsLab，货号：11233)至离心管中，加0.1MMES(pH5.0)缓冲液混匀，并以13000rpm，15min，4℃条件离心，弃上清，用0.1MMES(pH5.0)缓冲液重悬待用；活化并清洗：将活化剂EDC、NHS和荧光微球按照质量比2:1:2的量进行活化，具体操作如下：称取EDC、NHS加入0.1MMES(pH5.0)缓冲液中溶解，迅速取适量至上述清洗完毕的荧光微球中，用封口膜封好放置在200rpm摇床上室温摇匀30min，取出后13000rpm，30min，4℃离心除去上清，用等量0.1MMES(pH6.5)缓冲液重悬超声混匀并清洗，重复一次以上操作即清洗两次。离心完成后弃掉上清待用。标记：将活化后的胶乳重悬至0.1MMES(pH6.5)缓冲液中，迅速分别加入特异性结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)的抗体(鼠单抗，2016年购自杭州隆基生物技术有限公司)，混匀，放置室温，200rpm摇床上摇匀4小时。封闭：取上述标记好的微球于10000rpm，30min，4℃离心除去上清，立即向微球中加入等量封闭液，超声重悬后再放置室温，200rpm摇床上摇匀1小时。反应完成后10000rpm，20min，4℃离心，取上清待检。检测内容、质量标准及检测方法如表1所示。表1检测内容、质量标准及检测方法检测内容质量标准检测方法包被量包被量≥100μg抗体/mg微球BCA蛋白浓度测定法清洗、重悬：加入重悬液，超声吹打重悬，用高速冷冻离心机10000rpm，20min，4℃离心，弃掉上清；加入重悬液，超声吹打重悬。步骤二：人LH标记抗体的制备取抗人促黄体生成素(LH)的抗体(鼠单抗，2016年购自杭州隆基生物技术有限公司)，按上述步骤，制备人LH标记抗体。重悬好的微球溶液做好标记，备用。实施例3结合垫的喷点特异性结合结合垫滤纸的喷点方法如下：荧光标记溶液稀释：用荧光标记重悬液将上述制备的荧光标记结合物(来自实施例1)稀释2倍；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为8μL/cm；1号管道为喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于荧光标记重悬溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将WhatmanFusion5滤纸按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的结合垫，喷点的荧光标记特异性抗体带均匀、连续和贯通整个直线为合格喷点品，直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片结合垫滤纸，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的结合垫置于室温中自然干燥1小时，膜上应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫联检试纸条，其特征在于，底板上设置样品分配垫和试纸条，样品分配垫连接有至少2根试纸条，试纸条沿层析方向依次分布有：标记抗体结合垫、包被在层析膜上的捕获抗体的检测部、包被有能够捕获标记抗体物质的质控部、层析膜和吸水材料。

【技术特征摘要】
1.一种免疫联检试纸条，其特征在于，底板上设置样品分配垫和试纸条，样品分配垫连接有至少2根试纸条，试纸条沿层析方向依次分布有：标记抗体结合垫、包被在层析膜上的捕获抗体的检测部、包被有能够捕获标记抗体物质的质控部、层析膜和吸水材料。2.根据权利要求1所述的免疫联检试纸条，其特征在于，试纸条、结合垫、层析膜中的至少一种设置为不同宽度、厚度或长度，对应不同样品分配量。3.根据权利要求1所述的免疫联检试纸条，其特征在于，所述的样品分配垫的成分包括玻璃纤维或长纤维的滤纸，样品分配垫上设有加样孔。4.根据权利要求1-3任一所述的免疫联检试纸条，其特征在于，试纸条之间互相平行，且垂直于样品分配垫。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玲，杨海麟，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32