鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法及其染色液和制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其为含异硫氰酸的磷酸盐缓冲液。据此，发明专利技术人还建立了该染色液的制备方法，以及使用该染色液的检测方法，该检测方法采用前述染色液对样品进行荧光染色，然后在荧光显微镜下观察孢子。应用本发明专利技术对鳞翅目昆虫微粒子原虫的孢子壳进行荧光染色，制片简单容易操作；采用用荧光显微镜和鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液染色，使昆虫微粒子原虫孢子具荧光特异性；对照标准物的形状特征，可确保检验具重复性和准确性。总之，本发明专利技术具有操作简便、特异性强、识别容易的特点，为机械检验和公正检验奠定了基础，具有较高的实用价值和广阔的市场前景。

Detection of Spores of Lepidoptera Pebrinoprotozoa and Its Staining Solution and Preparation

The invention discloses a Lepidoptera microspore protozoa spore dyeing solution, which is a phosphate buffer containing isothiocyanate. Accordingly, the inventor also established a preparation method of the dye solution and a detection method using the dye solution. The detection method used the dye solution to fluorescence stain the sample and then observe the spores under the fluorescence microscope. The invention applies the fluorescent dyeing method to the spore shell of Lepidoptera pebrine protozoa, and the preparation is simple and easy to operate; the spore shell of Lepidoptera pebrine protozoa is dyed by fluorescent microscope and the spore dyeing solution of Lepidoptera pebrine protozoa, so that the spore of insect pebrine protozoa has fluorescent specificity; the repeatability and accuracy of the test can be ensured by comparing In a word, the invention has the characteristics of simple operation, strong specificity and easy identification, lays a foundation for mechanical inspection and fair inspection, and has high practical value and broad market prospects.

【技术实现步骤摘要】
鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法及其染色液和制备方法
本专利技术属于鳞翅目昆虫检测和检疫领域，尤其涉及一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法及其染色液和制备方法。
技术介绍
鳞翅目昆虫中，有的是经济昆虫，如家蚕、柞蚕等。但是，鳞翅目昆虫会感染微粒子原虫病，如家蚕微粒子原虫病、柞蚕微粒子原虫病、蓖麻蚕微粒子原虫病等。微粒子原虫是细胞内寄生的单细胞生物，其传染途径主要有2个：食下传染和胚种传染，微粒子原虫通过寄主排泄物和尸体等污染而造成食下传染；通过寄主的种胚传染到下一代称之为胚种传染。由于鳞翅目昆虫微粒子原虫病大都会胚种传染，故繁殖时要弄清是否带有微粒子原虫病，如母蛾带有该病，所产卵也带有该病，通过检疫淘汰去除该母蛾所产的卵，从源头上杜绝微粒子原虫病。鳞翅目昆虫是否带有微粒子原虫病或是否有感染微粒子原虫病的风险，目前主要沿用100多年前的巴斯得创立的家蚕微粒子原虫病的检验法，主要是依靠显微镜人工检测产卵母蛾是否有成熟的微粒子原虫孢子来判断。然而，样本不染色用显微镜观察效率低，特异性差，且容易造成误判问题。现有昆虫微粒子原虫检验技术，如普通PCR法、蛋白质标记法、定量PCR等，虽准确性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于为含异硫氰酸的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的pH值为7.8‑9.0。

【技术特征摘要】
1.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于为含异硫氰酸的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的pH值为7.8-9.0。2.根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于：所述异硫氰酸的浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL。3.权利要求1所述鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液的制备方法，其特征在于：用pH值为7.8-9.0的磷酸盐缓冲液溶解异硫氰酸粉至浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL，然后用滤网过滤。4.根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液的制备方法，其特征在于：所述滤网的网眼为35-45μm。5.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于使用权利要求1所述染色液对样品进行荧光染色，然后在荧光显微镜下观察孢子。6.根据权利要求5所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于包括以下步骤：染色液的制备、样本制备、染色和观察。7.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱方容，黄深惠，黄旭华，李韬，王霞，蒋满贵，李标，
申请(专利权)人：广西壮族自治区蚕业技术推广总站，
类型：发明
国别省市：广西,45