一种荧光检测脂肪酶活性的方法技术

本发明专利技术属于生物质化学和可再生资源利用领域，具体涉及一种荧光检测脂肪酶活性的方法。本发明专利技术将非离子型表面活性剂溶液和姜黄素溶液混合，然后加入可溶性铜盐溶液，得到混合溶液1；将巯基乙酸甲酯溶液和磷酸盐缓冲溶液混合，得到混合溶液2；将混合溶液2和待测脂肪酶样品混合，30～40℃水浴反应10～30min，去除脂肪酶，得到混合溶液3；将混合溶液1和混合溶液3混合，20～40℃反应3～10min；进行荧光检测，然后采用外标法以荧光强度定量待测脂肪酶溶液脂肪酶活性。本发明专利技术与现有技术相比，更加灵敏、检测下限更加低，可实现微量级的检测，应用更加广泛。

A Fluorescence Detection Method for Lipase Activity

The invention belongs to the field of biomass chemistry and renewable resource utilization, in particular to a method for fluorescence detection of lipase activity. The invention mixes non-ionic surfactant solution and curcumin solution, then adds soluble copper salt solution to obtain mixed solution 1; mixes methyl mercaptoacetate solution and phosphate buffer solution to obtain mixed solution 2; mixes mixed solution 2 with lipase sample to be measured, and reacts in water bath at 30-40 degrees C for 10-30 minutes, removes lipase, and obtains mixed solution 3; Liquor 1 and mixed solution 3 were mixed and reacted at 20-40 for 3-10 min. The activity of lipase in lipase solution was quantitatively determined by external standard method with fluorescence intensity. Compared with the prior art, the invention is more sensitive, has lower detection limit, can realize micro-level detection, and has wider application.

【技术实现步骤摘要】
一种荧光检测脂肪酶活性的方法
本专利技术属于生物质化学和可再生资源利用领域，具体涉及一种荧光检测脂肪酶活性的方法。
技术介绍
脂肪酶[E.C.3.1.1.3]是重要的工业用酶，能特异性识别羧酸酯中的酯键，并催化水解切割酯键生成脂肪酸和醇，在食品、化妆品、制药以及生物柴油等领域常作为催化剂使用。脂肪酶在生物化工中的大量应用，使脂肪酶活性的检测研究成为基础有机应用研究领域的重要课题。与其它水解酶类(如乙酰胆碱酯酶和碱性磷酸酶)不同，脂肪酶只在油-水界面上才能被活化，是一种界面反应酶，脂肪酶的催化属于异相催化(Heterogeneous-catalyzed)，且不溶于水的脂肪酶底物需要被乳化，乳化剂的加入常会导致分析体系复杂化，产生信号干扰，并对测量的真实性产生重大影响。因此脂肪酶活性的检测与其它水解酶相比更为复杂。传统脂肪酶活性的检测方法，如pH滴定法、浊度法，操作繁琐，耗时较长，灵敏度低。因此，开发高灵敏度、高通量检测脂肪酶活性的分析方法具有重要的实际应用价值。姜黄素是一种从姜黄根茎中分离出来的天然的二酮类化合物，作为抗癌药物，近年来在细胞培养和医学研究方面得到了较多的应用。姜黄素具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于包含如下步骤：(1)将非离子型表面活性剂溶液和姜黄素溶液混合，然后加入可溶性铜盐溶液，得到混合溶液1，其中，姜黄素和可溶性铜盐的摩尔比为1:2；(2)将巯基乙酸甲酯溶液和磷酸盐缓冲溶液混合，得到混合溶液2；(3)将混合溶液2和待测脂肪酶样品混合；30～40℃水浴反应10～30min，过滤去除脂肪酶，得到混合溶液3；(4)将混合溶液1和混合溶液3混合，20～40℃反应3～10min；然后进行荧光检测，然后采用外标法以荧光强度定量待测脂肪酶溶液脂肪酶活性。

【技术特征摘要】
1.一种荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于包含如下步骤：(1)将非离子型表面活性剂溶液和姜黄素溶液混合，然后加入可溶性铜盐溶液，得到混合溶液1，其中，姜黄素和可溶性铜盐的摩尔比为1:2；(2)将巯基乙酸甲酯溶液和磷酸盐缓冲溶液混合，得到混合溶液2；(3)将混合溶液2和待测脂肪酶样品混合；30～40℃水浴反应10～30min，过滤去除脂肪酶，得到混合溶液3；(4)将混合溶液1和混合溶液3混合，20～40℃反应3～10min；然后进行荧光检测，然后采用外标法以荧光强度定量待测脂肪酶溶液脂肪酶活性。2.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的非离子型表面活性剂为吐温40和TritonX-100中的至少一种。3.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的混合溶液1中非离子型表面活性剂的浓度为100～500μmol/L。4.根据权利要求1所述的荧光检测脂肪酶活性的方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：马艳玲，陈甜妹，曾荣，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44