一种肝癌双重靶向磁性纳米颗粒的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种肝癌双重靶向磁性纳米颗粒的制备方法。本发明专利技术的制备方法包括超顺磁性纳米颗粒(SPIO)的制备，对超顺磁性纳米颗粒(SPIO)进行PEG修饰，以及利用DSPE‑PEG2000修饰SPIO交联双抗anti‑CD34&anti‑AFP步骤。本发明专利技术制备得到的纳米颗粒可靶向甲胎蛋白阳性的肝癌细胞和肝癌新生血管内皮细胞，磁共振MR成像可以活体动态示踪SPIO‑PEG‑BsAb，从分子水平实现评价靶向肝癌诊断的重要作用。本发明专利技术实现了肝癌细胞和肝癌血管双重分子成像的目的，将为肝癌及其它恶性肿瘤的分子水平诊断和抗血管生成靶向治疗的动态评价提供了新思路和新途径。

Preparation of Dual Targeted Magnetic Nanoparticles for Hepatocellular Carcinoma

The invention discloses a preparation method of dual targeting magnetic nanoparticles for liver cancer. The preparation method of the invention includes the preparation of superparamagnetic nanoparticles (SPIO), PEG modification of superparamagnetic nanoparticles (SPIO), and the steps of using DSPE PEG2000 to modify SPIO cross-linking dual anti CD34 & anti AFP. The prepared nanoparticles can target alpha-fetoprotein-positive hepatocellular carcinoma cells and hepatocellular carcinoma neovascular endothelial cells, and magnetic resonance imaging can dynamically trace SPIO PEG BsAb in vivo, thus realizing the important role of evaluating the diagnosis of targeted hepatocellular carcinoma at the molecular level. The invention realizes the purpose of dual-molecule imaging of hepatocellular carcinoma cells and hepatocellular carcinoma vessels, and provides a new idea and a new way for molecular level diagnosis of hepatocellular carcinoma and other malignant tumors and dynamic evaluation of anti-angiogenesis targeted therapy.

【技术实现步骤摘要】
一种肝癌双重靶向磁性纳米颗粒的制备方法
本专利技术属于纳米材料制造
，特别是涉及一种肝癌双重靶向磁性纳米颗粒的制备方法。
技术介绍
肝细胞癌(HCC)是世界上第5大常见恶性肿瘤，为我国第3大常见恶性肿瘤。虽然手术治疗已取得了显著的疗效，但是，由于HCC发现时多为中晚期，手术切除率低，晚期患者即使行肝移植远期预后也欠佳。包括经肝动脉化疗栓塞术(TACE)、射频消融(RadioFrequencyAblation,FRA)在内的多种介入微创治疗方法已被广泛应用于临床，但5年生存率仍较低。超顺磁性氧化铁(superparamageticironoxide，SPIO)类纳米粒子是目前较理想的磁共振示踪剂。研究者在多种器官损伤及疾病动物模型上，采用MR示踪SPIO标记的各种干细胞均取得成功。这一细胞标记示踪技术也已在临床上初步显示了其安全性和有效。Arbab等用MRI成功地活体示踪了标记SPIO的EPC在肿瘤血管形成中的表达。本专利技术人团队也已完成了间充质干细胞(MSC)、EPC的SPIO标记及活体示踪，采用MR成像观察到了归巢至损伤血管内皮的EPC，采用SPIO标记了内皮抑素基因修饰的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝癌双重靶向磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)超顺磁性纳米颗粒(SPIO)的制备：将乙酰丙酮铁、二苄醚、油酸和油胺混合均匀，然后加热反应，得到油酸修饰的超顺磁性Fe3O4纳米颗粒；(2)对超顺磁性纳米颗粒(SPIO)进行PEG修饰：将DSPE‑PEG2000和SPIO以一定质量比混合，加热超声混匀，然后加热反应一段时间，再经后处理步骤，得到黑色透明的PEG修饰的超顺磁性纳米颗粒；(3)制备肝癌双重靶向磁性纳米颗粒：将anti‑CD34和anti‑AFP两种抗体分别加入超滤管中离心，加入硼酸盐缓冲液进行吹打均匀，预处理后混合待用；取步骤(2)得到的PEG修饰的超顺磁...

【技术特征摘要】
1.一种肝癌双重靶向磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)超顺磁性纳米颗粒(SPIO)的制备：将乙酰丙酮铁、二苄醚、油酸和油胺混合均匀，然后加热反应，得到油酸修饰的超顺磁性Fe3O4纳米颗粒；(2)对超顺磁性纳米颗粒(SPIO)进行PEG修饰：将DSPE-PEG2000和SPIO以一定质量比混合，加热超声混匀，然后加热反应一段时间，再经后处理步骤，得到黑色透明的PEG修饰的超顺磁性纳米颗粒；(3)制备肝癌双重靶向磁性纳米颗粒：将anti-CD34和anti-AFP两种抗体分别加入超滤管中离心，加入硼酸盐缓冲液进行吹打均匀，预处理后混合待用；取步骤(2)得到的PEG修饰的超顺磁性纳米颗粒，调节pH值至5-6，然后加入EDC和NHS进行活化；最后用预处理后混合的抗体溶液重悬PEG修饰的超顺磁性纳米颗粒，置于摇床反应，反应结束后利用分子筛分离未反应的抗体，得到肝癌双重靶向磁性纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的乙酰丙酮铁、二苄醚、油酸和油胺的摩尔比为2：15：6：6～2：30：12：10。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)加热反应为先将混合物加热至180～220℃反应40～80min，然后再升温至260～300℃反应30～60min。相比一步法加热，采用分段加热法更利于纳米铁粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙军辉，周官辉，艾静，张岳林，周坦洋，吴李鸣，朱统寅，陈新华，周民，任志刚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33