一种血清淀粉样蛋白A抗原表位、其预测与验证方法及单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种血清淀粉样蛋白A抗原表位的预测与验证方法及单克隆抗体的制备方法，预测与验证方法为预测血清淀粉样蛋白A抗原的表面可及性、弹性序列区域、β转角、抗原性、亲水性、线性表位、长片段表位，分别获得多个表位序列；去除多个表位序列中的重复的表位和包含在其他较长表位中的序列，得到多个非冗余预测表位；采用ELISA验证多个非冗余预测表位是否为抗体的识别表位。本发明专利技术克服了单一方法预测准确率低的问题；并通过实验验证，解决了SAA抗原表位未知的问题；应用合成的抗原表位多肽制备单克隆抗体，克服了SAA难以纯化获取的困难的问题，使成本降低一倍以上。

A Serum Amyloid Protein A Antigen Epitope, Its Prediction and Verification and Preparation of Monoclonal Antibody

The present invention relates to a method for predicting and validating antigen epitopes of serum amyloid protein A and a method for preparing monoclonal antibodies. The prediction and validation method is to predict the surface accessibility, elastic sequence region, beta rotation angle, antigenicity, hydrophilicity, linear epitope and long fragment epitope of serum amyloid protein A antigen, and obtain multiple epitope sequences separately. Multiple non-redundant predictive epitopes were obtained from complex epitopes and sequences contained in other longer epitopes. ELISA was used to verify whether multiple non-redundant predictive epitopes were recognition epitopes of antibodies. The invention overcomes the problem of low prediction accuracy of a single method, solves the problem of unknown SAA antigen epitope through experimental verification, and uses synthesized antigen epitope polypeptide to prepare monoclonal antibody, overcomes the difficulty of purifying and acquiring SAA, and reduces the cost by more than twice.

【技术实现步骤摘要】
一种血清淀粉样蛋白A抗原表位、其预测与验证方法及单克隆抗体的制备方法
本专利技术属于生物技术制备体外诊断原料领域，属于体外诊断行业临床诊断试剂盒制备的原料，具体涉及一种血清淀粉样蛋白A抗原表位、其预测与验证方法及单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
体液免疫或抗体产生主要由B细胞介导，B细胞识别抗原通过膜结合抗体或B细胞受体(Bcellreceptor，BCR)来识别抗原，所结合的抗原部位即为B细胞表位，最终诱导抗体基因的编辑和抗体的分泌，分泌的抗体结合抗原从而失活或消除抗原。免疫信息学是利用计算机方法在免疫学上应用并解决免疫问题的信息学方法，是生物信息学的一个分支。免疫信息学的两个中心目标就是B细胞表位和T细胞表位的预测，为实际可行的成果转化提供了非常重要的预测参考结果。源于近年来高通量测序技术的迅猛发展，生物信息研究人员开发了多种免疫信息学工具，但是，这种工具都是独立的针对高通量数据的某一特定特性或特征进行的大数据分析，目前缺少对特定抗原的表位分析，更重要的是缺少对所分析的表位进行筛选验证和抗体制备等实际应用。目前血清淀粉样蛋白A(SerumamyloidA,SAA)的抗原表位(或B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血清淀粉样蛋白A抗原表位，其特征在于：所述的抗原表位包括如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的序列。

【技术特征摘要】
1.一种血清淀粉样蛋白A抗原表位，其特征在于：所述的抗原表位包括如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4所示的序列。2.一种血清淀粉样蛋白A抗原表位的预测与验证方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)预测血清淀粉样蛋白A抗原的表面可及性，获得多个第一表位序列；(2)预测血清淀粉样蛋白A抗原的弹性序列区域，获得多个第二表位序列；(3)预测血清淀粉样蛋白A抗原的β转角，获得多个第三表位序列；(4)预测血清淀粉样蛋白A抗原的抗原性，获得多个第四表位序列；(5)预测血清淀粉样蛋白A抗原的亲水性，获得多个第五表位序列；(6)预测血清淀粉样蛋白A抗原的线性表位，获得多个第六表位序列；(7)预测血清淀粉样蛋白A抗原的长片段表位，获得多个第七表位序列；(8)去除所述的第一表位序列、所述的第二表位序列、所述的第三表位序列、所述的第四表位序列、所述的第五表位序列、所述的第六表位序列、所述的第七表位序列中的重复的表位和包含在其他较长表位中的序列，得到多个非冗余预测表位；(9)采用ELISA验证所述的多个非冗余预测表位是否为抗体的识别表位。3.根据权利要求2所述的血清淀粉样蛋白A抗原表位的预测与验证方法，其特征在于：步骤(1)采用EminiSurfaceAccessibilityPrediction进行预测；步骤(2)采用Karplus&SchulzFlexibilityPrediction进行预测；步骤(3)采用Chou&FasmanBeta-TurnPrediction进行预测；步骤(4)采用Kolaskar&TongaonkarAntigenicity进行预测；步骤(5)采用ParkerHydrophilicityPrediction进行预测；步骤(6)采用BepipredLinearEpitopePrediction2.0进行预测；步骤(7)采用ABCpredPrediction进行预测。4.根据权利要求2或3所述的血清淀粉样蛋白A抗原表位的预测与验证方法，其特征在于：所述的第一表位序列为阈值≥1的序列；所述的第二表位序列为阈值≥0.999的序列；所述的第三表位序列为阈值≥1.041的序列；所述的第四表位序列为阈值≥0.976的序列；所述的第五表位序列为阈值≥2.410的序列；所述的第六表位序列为阈值≥0.500的序列；所述的第七表位序列为阈值≥0.51的序列。5.根据权利要求4所述的血清淀粉样蛋白A抗原表位的预测与验证方法，其特征在于：所述的第二表位序列为得分高的十个表位序列；所述的第三表位序列为得分高的十个表位序列；所述的第五表位序列为得分高的十个表位序列；所述的第七表位序列的长度为16。6.根据权利要求2所述的血清淀粉样蛋白A抗原表位的预测与验证方法，其特征在于：步骤(9)的具体实施方式包括依次进行的如下步骤：(a)采用固相合成法合成多个非冗余预测表位多肽；(b)分别将多个所述的非冗余预测表位多肽与牛血清蛋白进行偶联，然后回收偶联有所述的非冗余预测表位多肽的牛血清蛋白，其中，控制所述的非冗余预测表位多肽与所述的牛血清蛋白的摩尔比为90～110:1，采用的偶联剂为戊二醛；(c)将步骤(b)制得的偶联有所述的非冗余预测表位多肽的牛血清蛋白溶解于pH7～7.5的PBSbuffer，配制成0.8～1.2μg/ml的待测溶液，空白对照为与所述的待测溶液相同浓度的牛血清蛋白溶液，然后将所述的待测溶液和所述的牛血清蛋白溶液分别加入到ELISA平板的孔中，36～38℃处理1～3h，然后置于2～6℃包被过夜；(d)用0.04～0.06wt％的Tween20-PBS进行多次洗涤；(e)添加4～6wt％的脱脂奶粉-PBS，密封条件下，36～38℃封闭1～3h；(f)用0.04～0.06wt％的Tween20-PBS进行多次洗涤；(g)每孔加入PBS稀释的鼠抗人血清淀粉样蛋白A抗体稀释液，36～38℃孵育1～1.5h；(h)用0.04～0.06wt％的Tween20-PBS进行多次洗涤；(i)每孔加入PBS稀释的HRP标记的羊抗鼠抗体稀释液，36～38℃孵育40～60min；(j)用0.04～0.06wt％的Tween20-PBS进行多次洗涤；(k)加入TMB显色...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾悦，周俊花，徐长银，
申请(专利权)人：迪亚莱博张家港生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32