一种稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种饲料中违法添加剂检测用稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备方法，属于饲料质量安全检测用标准物质研发领域。以稳定同位素标记N,N‑二甲基甲酰胺为原料，与酰基化试剂进行反应，生成稳定同位素标记的N,N‑二甲氨基甲酰氯，再在有机溶剂存在条件下，与3‑羟基吡啶反应，生成稳定同位素标记3‑(N,N‑二甲氨基甲酰氧基)吡啶，再在有机溶剂存在条件下，与溴甲烷反应，得到稳定同位素标记溴吡斯的明。该发明专利技术的制备路线短，反应条件温和，合成所需原料、中间体简单易得，产品质量能满足农业部所发布行业标准中所需内标试剂的技术要求。全球尚未发现有稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备文献，研制稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂对研制稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂对我国饲料质量安全检测和监管工作具有重要意义。

Preparation of a stable isotope labelled bromopizimine internal standard reagent

The invention relates to a preparation method of stable isotope labeled bromopizimine internal standard reagent for detecting illegal additives in feed, belonging to the research and development field of reference materials for feed quality and safety detection. The stable isotope labelled N, N dimethylformamide was used as raw material to react with acylation reagent to produce stable isotope labelled N, N dimethylcarbamoyl chloride, and then reacted with 3 hydroxypyridine in the presence of organic solvents to produce stable isotope labelled 3(N, N dimethylcarbamooxy) pyridine. Then, in the presence of organic solvents, reacted with bromomethane to obtain stable isotope labelled 3(N, N dimethylcarbamooxy) pyridine. To stable isotope labeled bromopizimine. The preparation route of the invention is short, the reaction conditions are mild, the raw materials and intermediates needed for synthesis are simple and easy to obtain, and the product quality can meet the technical requirements of the internal standard reagents issued by the Ministry of Agriculture. The preparation of stable isotope labelled bromopizimine internal standard reagent has not been found in the world. The development of stable isotope labelled bromopizimine internal standard reagent is of great significance to the development of stable isotope labelled bromopizimine internal standard reagent for the quality and safety detection and supervision of feed in China.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备方法
本专利技术涉及一种饲料中违法添加剂检测用稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备方法，属于饲料质量安全检测用标准物质研发领域。
技术介绍
溴吡斯的明(Pyridostigmine，CASNo.：101-26-8)，是新斯的明的衍生物，为拟胆碱药中的抗胆碱酯酶药。在养殖业中，溴吡斯的明常用于治疗牛羊前胃疾病、动物便秘以及分娩期和产后疾病等，对长期血流不畅造成的神经肌肉衰弱也有良好疗效。溴吡斯的明仅被允许直接给药用作治疗，根据《饲料药物添加剂使用规范》，禁止在饲料中使用。但随着养殖业集约化、规模化发展，溴吡斯的明作为治疗药物，有违法在饲料中滥用和添加用作治疗和预防的安全风险。为此，我国农业部发布了《NY/T3142-2017饲料中溴吡斯的明的测定液相色谱-串联质谱法》，并从2018年6月1日起正式实施。其中，明确提出了使用稳定同位素标记溴吡斯的明-D6作为内标试剂来进行内标法定量。使用该方法可以规范饲料中添加剂药物使用，为监控饲料中溴吡斯的明的使用情况以及饲料质量安全风险评估的深入研究提供技术支持。本专利技术所涉及饲料中违法添加剂检测用稳定同本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种饲料中违法添加剂检测用稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的化学结构如式(I)所示：

【技术特征摘要】
1.一种饲料中违法添加剂检测用稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记溴吡斯的明内标试剂的化学结构如式(I)所示：其中，(I)中X为12C或13C，Y为H或D，*为14N或15N，其特征在于，制备步骤如下：(1)在氮气保护条件下，加入稳定同位素标记N,N-二甲基甲酰胺，在-20℃～0℃条件下，加入酰基化试剂，反应0.5～3小时；得到稳定同位素标记的N,N-二甲氨基甲酰氯，无需处理，直接作为中间体进行下一步反应；(2)在有机溶剂存在条件下，在氮气保护条件下，加入3-羟基吡啶，搅拌0.5～2小时；将步骤(1)得到的稳定同位素标记的N,N-二甲氨基甲酰氯的有机溶液加入到上述3-羟基吡啶的有机溶液中，在30℃～130℃条件下反应2～12小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，用水淬灭反应，水相用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用水洗涤，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记得到稳定同位素标记3-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)吡啶；(3)将步骤(2)所得到的稳定同位素标记3-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)吡啶溶于有机溶剂中，在-30℃～50℃条件下加入溴甲烷，在室温下反应24～72小时，过滤后用有机溶剂洗涤得稳...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，洪涛，方燕飞，
申请(专利权)人：坛墨质检科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32