一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法技术

一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法，属于生物检测技术领域。该方法能够对同一样品分离纯化的外泌体，分别采用荧光抗体标记外泌体膜蛋白和分子信标标记外泌体包含的靶基因mRNA进行同时检测，其中分子信标标记外泌体具体采用外泌体原位捕获孔板或芯片进行检测，所述的外泌体原位捕获孔板中每孔或芯片上含有荧光素标记的分子信标，所述的分子信标为检测靶基因mRNA的特异性DNA探针。本发明专利技术运用了外泌体原位捕获孔板和芯片技术，检测生物样品中外泌体所包含的生物标志物基因mRNA。该技术具有灵敏度高、特异性强等优点。

A Method for Simultaneous Detection of Membrane Proteins and RNA in Exosomes

The invention relates to a method for simultaneously detecting exosome membrane proteins and RNA, belonging to the technical field of biological detection. The method can separate and purify exosomes from the same sample, and simultaneously detect the target gene mRNA contained in exosome membrane protein labeled by fluorescent antibody and exosome labeled by molecular beacon. The molecular beacon labeled exosome is specifically detected by exosome in situ capture orifice plate or chip. The exosome in situ capture orifice plate contains fluorescein label in each orifice or chip. The molecular beacon is a specific DNA probe for detecting target gene RNA. The present invention uses in situ exosome capture orifice plate and chip technology to detect gene expression of biomarkers contained in exosomes in biological samples. The technique has the advantages of high sensitivity and specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法。
技术介绍
外泌体（exosome），是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，直径大约30-150nm，具有脂质双层膜结构，能很好地保护其包被的物质。这种微小膜泡中含有宿主细胞来源的特异的蛋白、核酸和脂质，能作为信号分子传递给其他细胞，是细胞之间通讯的重要媒介，可使受体细胞发生多种生物学功能的改变。所有细胞均可产生外泌体，但不同细胞分泌的外泌体组份和含量不同，选择性地将特定的基因产物装入外泌体中，通过在不同细胞之间转移生物活性分子参与受体细胞的生物学功能调节。外泌体最有用的特性之一，其含量丰富，内含物来源特异、稳定，逐渐成为细胞生物学研究的新宠。外泌体原位捕获孔板和芯片技术是一种全新的外泌体原位捕捉与检测技术，尤以检测外泌体中的mRNA和microRNA，以及外泌体膜蛋白见长。其以涂附有活化的生物分子膜玻璃为载体，包被有特异识别靶基因的mRNA或microRNA的分子信标（自行设计）的阳离子脂质纳米颗粒，其与带负电荷的外泌体融合后，分子信标与靶标结合，特异性荧光抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法，其特征在于该方法能够对同一样品分离纯化的外泌体，分别采用荧光抗体标记外泌体膜蛋白和分子信标标记外泌体包含的靶基因mRNA进行同时检测，其中分子信标标记外泌体具体采用外泌体原位捕获孔板或芯片进行检测，所述的外泌体原位捕获孔板中每孔或芯片上含有荧光素标记的分子信标，所述的分子信标为检测靶基因mRNA的特异性DNA探针。

【技术特征摘要】
2018.12.27 CN 201811614756X1.一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法，其特征在于该方法能够对同一样品分离纯化的外泌体，分别采用荧光抗体标记外泌体膜蛋白和分子信标标记外泌体包含的靶基因mRNA进行同时检测，其中分子信标标记外泌体具体采用外泌体原位捕获孔板或芯片进行检测，所述的外泌体原位捕获孔板中每孔或芯片上含有荧光素标记的分子信标，所述的分子信标为检测靶基因mRNA的特异性DNA探针。2.如权利要求1所述的一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法，其特征在于所述的特异性DNA探针的5’端茎和环与靶基因完全互补，3’端茎与5’端茎部分互补，5’端和3’端分别用荧光基团和淬灭基团修饰，环上部分碱基用锁核酸修饰。3.如权利要求1所述的一种同时检测外泌体膜蛋白和mRNA的方法，其特征在于所述的特异性DNA探针是根据靶基因序列自行设计并修饰合成；所述的标记外泌体膜蛋白的荧光抗体为荧光素标记的单克隆抗体。4.如权利要求1-3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾恒山，
申请(专利权)人：杭州迪相实业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33