二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用。研究表明，该化合物可以通过清除活性氧的生成，螯合自由铁，维持细胞内铁蛋白的水平进而实现细胞免受损伤。本发明专利技术为制备铁过载疾病治疗药物提供了一种新的技术方案。

Application of dihydromyricetin in the preparation of drugs for iron overload diseases

The invention discloses the application of dihydromyricetin in the preparation of therapeutic drugs for iron overload diseases. Studies have shown that the compound can protect cells from injury by scavenging the production of reactive oxygen species, chelating free iron and maintaining intracellular ferritin levels. The invention provides a new technical scheme for preparing iron overload disease therapeutic drugs.

【技术实现步骤摘要】
二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用
本专利技术属于制药领域，具体涉及二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用。
技术介绍
铁过载主要由基因突变导致，这些基因包括编码Hepcidin的基因HAMP，各种各样调节Hepcidin表达的基因以及Hepcidin目标蛋白FPN的基因。Hepcidin的缺少或者FPN对Hepcidin出现抗性均能导致血色沉着病。遗传血色沉着病的典型特征是肠道吸收过多的铁，机体组织器官出现铁沉积并伴有损伤出。根据血色沉着病发病的年龄和严重程度的不同，会出现不同的病理症状。在肝脏中会出现肝硬化和肝癌，心脏铁过载会导致心脏衰竭，而一些内分泌腺的铁过载会导致生长受阻、性成熟推迟以及糖尿病等症状。铁过载还可以出现在铁代谢调节相关基因未发生突变的情况下，一般主要由输血或病理情况导致的过量铁摄入。输血是治疗β-地中海贫血症或者镰刀型贫血症的主要手段，输入的红细胞中含有大量的铁可被巨噬细胞循环利用，然而机体缺少铁的排泄机制，因此会导致过多的铁沉积在患者体内。其中心脏铁沉积较为明显，会导致心脏铁毒性。在红细胞形成障碍过程中，机体能够抑制Hepcidin的表达，从而导致过量铁的吸收。此外，由其它疾病诱导的次级铁过载是加快相关疾病恶化的主要因素。丙型肝炎、肝细胞癌、非酒精性脂肪肝以及遗传型的Ⅰ型酪氨酸血症等均能够诱导肝脏的铁沉积。二氢杨梅素(Dihydromyricetin)属于一种多酚类化合物，也是较为特殊的一种黄酮类化合物，除具有黄酮类化合物的一般特性外，还具有解除醇中毒、预防酒精肝、脂肪肝、抑制肝细胞恶化、降低肝癌的发病率等作用。外观:纯白色粉末。溶解性：25℃。水中溶解度为4％，热水中溶解度更大，易溶于乙醇及丙酮，极微溶于醋酸乙酯。多酚类是指一组植物中化学元素的统称，因具有多个酚基团而得名，包括黄酮类、单宁类、酚酸类以及花色苷类等。多酚类物质具有抗氧化、强化血管壁、促进肠胃消化、降低血脂、增加机体抵抗力，阻止动脉硬化、抑制血栓形成等功效。多酚化合物的共同特点是具有良好的抗氧化活性，能与维生素C、E和胡萝卜素等其他抗氧化物在体内一起发挥抗氧化功效，清除有害人体健康的自由基。因为铁过载带来的直接损伤是其催化生成的活性氧自由基，而多酚类的抗氧化特性可能具有对抗活性氧自由基的效果。然而大部分的多酚类物质并没有预想中的作用效果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术缺陷，并提供一种二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用。本专利技术所采用的具体技术方案如下：所述二氢杨梅素分子式如下所示：作为优选，铁过载疾病为铁过载导致的细胞死亡。作为优选，所述的铁过载由8-羟基喹啉铁诱导引起。作为优选，所述的细胞死亡为过量铁离子催化生成的大量活性氧自由基导致。作为优选，所述的二氢杨梅素通过清除活性氧的生成、螯合自由铁从而抑制细胞死亡。本专利技术的研究思路为:1)通过对细胞培养液中添加8-羟基喹啉铁诱导细胞铁过载，以建立铁过载导致的细胞死亡模型。2)细胞活性实验表明二氢杨梅素能够有效地保护Fe-8HQ诱导的AML12细胞和HT-1080细胞死亡。3)在此基础上，发现其保护效果主要是通过清除活性氧的生成，螯合自由铁，维持细胞内铁蛋白的水平进而实现细胞免受损伤。本专利技术相对于现有技术而言，具有以下有益效果：本专利技术为制备铁过载疾病治疗药物提供了一种新的技术方案。通过二氢杨梅素抑制铁过载引发的铁离子刺激生成的活性氧。二氢杨梅素可以通过清除活性氧的生成，螯合自由铁，维持细胞内铁蛋白的水平进而实现细胞免受损伤。因此二氢杨梅素可以运用于治疗铁过载的相关疾病。本专利技术为后续新型治疗药物的制备提供了借鉴。附图说明图1为用对照、10μMFe-8HQ、10μMFe-8HQ+二氢杨梅素处理AML12细胞4小时后的细胞活性。图2为用对照、10μMFe-8HQ、10μMFe-8HQ+二氢杨梅素处理HT1080细胞4小时后的细胞活性。图3为用DMSO、10μMFe-8HQ、10μMFe-8HQ+10μM二氢杨梅素、10μM二氢杨梅素处理细胞4小时后，细胞胞质活性氧的生成情况。图4为用DMSO、10μMFe-8HQ、10μMFe-8HQ+10μM二氢杨梅素、10μM二氢杨梅素处理细胞4小时后，细胞线粒体活性氧的生成情况。图5为用DMSO、10μMFe-8HQ、10μMFe-8HQ+10μM二氢杨梅素、10μM二氢杨梅素的培养基处理AML12细胞2小时后，Ferritin-H和Ferritin-L的蛋白表达情况。图6为用DMSO、10μMFe-8HQ、10μMFe-8HQ+10μM二氢杨梅素、10μM二氢杨梅素培养基处理60分钟后，细胞胞内铁含量。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术做进一步阐述和说明。本专利技术中各个实施方式的技术特征在没有相互冲突的前提下，均可进行相应组合。实施例所用的AML12细胞(小鼠肝脏细胞)和HT-1080细胞(NRAS突变的人成纤维肉瘤癌细胞购)自ATCC细胞库。实施例所用的主要试剂为：氯化铁六水合物、8-羟基喹啉(8HQ)、DMSO(DimethylSulfoxide，二甲基亚砜)、地塞米松购自Sigma公司(上海，中国)；Calcein-AM(钙黄绿素-乙酰羟甲基酯)购自Abcam公司；DMEM/F12细胞培养基、FBS(胎牛血清)、PBS、赤霉素链霉素溶液、ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒)试剂、EDTA-胰蛋白酶购自Gibco公司；Accutase细胞消化液购自BD公司；细胞活性检测CCK-8(CellcountingKit-8)试剂、二氢杨梅素购自MedChemExpress公司；HBSS缓冲液；ROS检测试剂CM-H2DCFDA购自Invitrogen公司；哺乳动物蛋白提取试剂盒，5×loadingbuffer蛋白酶抑制剂购自弗德生物技术有限公司(杭州，中国)；BCA蛋白测定试剂盒购自碧云天生物技术有限公司(海门，中国)；FTH1(A1144)，FTL(A1768)均购自爱博泰克生物科技有限公司(武汉，中国)；其余未提及试剂均购自Sigma(上海，中国)。以下实施例的主要仪器为：SANYO细胞培养箱(日本)，超净台，LEICADCF295显微镜(意大利)，BDFACSCalibur流式细胞仪(美国)，Eppendorf离心机(德国)，SpectraMaxM5微孔板检测系统(MolecularDevices公司，美国)，25cm2细胞培养瓶，96孔、6孔细胞培养板。流式数据采用FlowJo_V10软件分析并作图，其他所有数据均以平均值±标准差(means±SD)或means+SD表示。数据分析采用GraphPadPrism(version5.01)的One-wayANOVA进行统计分析，多重比较采用Bonferroni检验。P<0.05为差异显著。细胞培养的方法为：将AML12细胞培养在含有10％FBS，100nM地塞米松，1％ITS,100μg/mL链霉素和100IU/mL青霉素的DMEM/F12培养基中。将HT1080细胞培养在含有10％FBS，100μg/mL链霉素和100IU/mL青霉素的DMEM培养基中。所有细胞培均养于37℃，5％CO2的细胞培养箱内，生长融合至80％～90％时用胰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用，所述二氢杨梅素的分子式如下所示：

【技术特征摘要】
1.一种二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用，所述二氢杨梅素的分子式如下所示：2.如权利要求1所述的二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用，其特征在于，铁过载疾病为铁过载导致的细胞死亡。3.如权利要求2所述的二氢杨梅素在制备铁过载疾病治疗药物中的应用，其特征在于，所述的铁过载由8-羟...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯杰，丁浩轩，方升林，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33