一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法，色谱测定条件如下，色谱柱：耐水性高效液相色谱柱进行洗脱，具体为Polaris C18‑A，4.6×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：水；流速：1ml/min；进样量：20μl；检测波长：266nm，将啤酒样品超声脱气，然后用0.45μm的水系微孔滤膜过滤，即得。本发明专利技术将流动相改为单一试剂——水，并配合使用耐水高效液相色谱柱进行洗脱，成功实现对啤酒中腺嘌呤含量测定，该法环保、简便、经济。

【技术实现步骤摘要】
一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法
本专利技术涉及啤酒质量检验
，尤其是一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法。
技术介绍
高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，缩写为HPLC)，是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。采用高效液相法来测定啤酒中腺嘌呤的含量，通常使用以下几种色谱测定条件。色谱柱：通常使用C18柱，如：AgilentXDB-C18柱(4.6mm×250mm，5.0μm)、WatersAtlantisdC18柱(4.6mm×250mm,5.0μm)等等。样品的处理方法：例如：准确称取0.200g试样(液体类试样脱气后取10.0mL)置于100mL三角瓶中，加入1mL超纯水，5mL三氟乙酸，5mL甲酸混匀，90℃水浴中振荡12min后迅速冷却，60℃水浴中旋转蒸发至干，残余物用10mL流动相复溶(超声助溶)，并转移至50mL离心管，9000rpm离心10min，上清液过0.22μm滤膜后。入样品瓶，存于4℃，待分析。流动相：通常使用的流动相为甲醇和水按一定比例的混合溶液，或者甲醇和磷酸二氢钾缓冲溶液按一定比例的混合溶液，或者甲醇和水加上一些调节溶液呈弱酸或弱碱性的试剂组成的溶液。这些流动相的配比均为两种以上试剂配比而成，通常均含甲醇这个液相常规有机试剂。例子1HPLC色谱测定条件：采用WatersAtlantisdC18柱(4.6mm×250mm,5.0μm)，以磷酸二氢钾缓冲液(0.02mol/L，pH＝3.6)为流动相，柱温:30℃，流速:1.0mL/min，进样量:10μL，对多组分嘌呤进行分离，检测。例子2HPLC色谱测定条件：色谱柱：安捷伦XDB-Cl8(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：H3PO4-KH2PO4缓冲液(7.35mmol/L,pH3.8)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：20μL；紫外检测波长：254nm。例子3：HPLC色谱测定条件：以水-甲醇-冰乙酸-10％四丁基氢氧化铵(V/V/V/V，879/100/15/6)为流动相，经AgilentXDB-C18柱(4.6mm×250mm，5.0μm)进行洗脱。这些流动相的配比均为两种以上试剂配比而成，通常均含甲醇这个液相常规有机试剂。甲醇是对人体有一定毒性且易燃的有机试剂；调节流动相甲醇-水系统的酸碱性的试剂，要么有机试剂(有一定毒性)；要么弱酸弱碱盐，盐的引入对液相设备有一定风险，操作不当常见对流路的堵塞，对系统甚至有不可逆性伤害。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法，将流动相改为单一试剂——水，并配合使用耐水高效液相色谱柱进行洗脱，成功实现对啤酒中腺嘌呤含量测定，该法环保、简便、经济。一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法，色谱测定条件如下，色谱柱：耐水性高效液相色谱柱进行洗脱，具体为PolarisC18-A，4.6×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：水；流速：1ml/min；进样量：20μl；检测波长：266nm。样品的处理方法:将啤酒样品超声脱气，然后用0.45μm的水系微孔滤膜过滤，即得。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：应用耐水高效液相色谱柱，将流动相改为单一试剂——水，成功实现对啤酒中腺嘌呤含量测定，该法环保、简便、经济。附图说明图1是腺嘌呤对照品的高效液相色谱图。图2是应用本专利技术所测定的啤酒样品的高效液相色谱图。图3是方法学验证中的线性关系图。具体实施方式为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面结合附图及具体实施例对本专利技术进一步说明。本实施例针对本专利技术的一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法进行方法学验证。以下为方法学验证过程与数据：1.色谱分析条件流动相：水流速：1mL/min柱温：25℃检测波长：266nm高效液相色谱仪：AgilentTechnologies1260色谱柱：PolarisC18-A，4.6×250mm，5μm腺嘌呤对照品溶液的保存时间为24h，要求按腺嘌呤峰计算，理论板数大于2000。2.检测波长的选择配制19.2μg/mL的腺嘌呤对照品溶液，将配制好的对照品溶液上紫外分光光度计中检测，其最大吸收波长为266nm。故选择266nm的波长为检测波长。3.线性关系试验精密称取于恒温干燥箱内的腺嘌呤对照品1mg，置于25mL容量瓶中，以0.01mol/L的氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度。制成每1mL中含有腺嘌呤19.2μg的溶液。置于4℃冰箱备用。作为腺嘌呤对照品贮备液。精密量取上述腺嘌呤对照品贮备液适量，以0.01mol/L的氢氧化钠稀释，分别制成每1mL中含腺嘌呤0.576μg、0.96μg、1.92μg、3.84μg、7.68μg、11.52μg、19.2μg的溶液，分别进样，记录色谱图。数据见表1。表1线性关系试验结果以腺嘌呤浓度(μg/mL)为横坐标，以腺嘌呤峰面积为纵坐标进行线性回归，得一直线，如图1所示。回归方程为：Y＝81.962x-0.1047相关系数：r2＝0.99996由此可见，腺嘌呤在0.576～19.200μg/mL的浓度范围内，呈良好线性关系。4重复性试验取同一份啤酒样品溶液平行测定5次，其RSD为3.3％(n＝5)；重复性较好。5精密度试验取同一份对照品溶液平行测定6次，其RSD为1.1％(n＝6)；实验表明，本法精密度较好。6回收率试验精密量取六份腺嘌呤含量已知(含腺嘌呤19.2μg/mL)的啤酒样品溶液(批号：20180126)超声脱气，然后用0.45μm的水系微孔滤膜过滤，精密量取1.Oml到25ml的容量瓶中，分别定量加入腺嘌呤对照品溶液适量，以0.01mol/L的氢氧化钠稀释至刻度。依法测定含量。测定结果见表2。表2回收率试验结果7样品测定结果取啤酒样品约10mL，超声5min除泡，以0.45μm的水系滤膜滤过，分别定量进样20μL，按上述方法测定，记录色谱图，图2为对照品溶液色谱图，图3为样品溶液色谱图。根据下列公式对腺嘌呤含量进行计算。C样：样品浓度；μg/mL；A样：样品峰面积；A对：对照品峰面积。结果数据见表3。表3啤酒样品测定结果2.8结论经过上述方法学验证的过程，本专利技术的一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法，其波长选择合理；腺嘌呤在0.576～19.2μg/mL的浓度范围内，呈良好线性关系；重复性试验、精密度试验、回收率试验均符合要求，本专利技术通过了方法学验证，可用于测定啤酒中腺嘌呤的含量。采用该方法测定三批啤酒的腺嘌呤含量，结果显示腺嘌呤浓度(μg/ml)分别为3.8、3.8和14.8，相对比现有技术，本专利技术所采用的流动相仅为水，样品处理方法简单，该方法环保、简便、经济，适合在啤酒质量检验中大规模推广。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法，采用高效液相法进行测定，其特征在于，色谱测定条件如下，色谱柱：耐水性高效液相色谱柱进行洗脱；柱温：25℃；流动相：水；流速：1ml/min；进样量：20μl；检测波长：266nm。

【技术特征摘要】
1.一种测定啤酒中腺嘌呤含量的方法，采用高效液相法进行测定，其特征在于，色谱测定条件如下，色谱柱：耐水性高效液相色谱柱进行洗脱；柱温：25℃；流动相：水；流速：1ml/min；进样量：20μl；检测波长：266nm。2.根据权利要求1所述的测定啤酒中腺嘌呤含量的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴伟东，莫全毅，
申请(专利权)人：深圳技师学院深圳高级技工学校，
类型：发明
国别省市：广东,44