三倍体芦竹的培育方法技术

本发明专利技术公开了三倍体芦竹的培育方法，S1：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，最终获得原球茎；S3：采用S2所得的原球茎制备原生质体，并进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗；S4：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；S5：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；S6：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化、移栽。本发明专利技术所得芦竹具有很强的抗逆性。

【技术实现步骤摘要】
三倍体芦竹的培育方法
本专利技术涉及芦竹培育
，尤其涉及三倍体芦竹的培育方法。
技术介绍
芦竹(Arundodonax)禾本科、芦竹属多年生植物，具发达根状茎，秆粗大直立、坚韧，具多数节，常生分枝，可用于饲料、乙醇、造纸、发电和环境修复等多种行业。现有芦竹繁殖有播种、分株、扦插等方法，一般以分株方法为主；通常是早春时用快揪沿植物四周切成有4-5个芽一丛，然后移植；这种方法繁殖速度慢、种苗易带毒，且劳动强度大、运输不便，造林成本高，难以在短时间内解决种苗供应紧缺的问题，不利于芦竹的产业化生产。相对于传统的方法，利用组培技术对芦竹进行繁殖，能够短时间内获得大量整齐一致的无病毒种苗，种苗生长优势明显，是芦竹种苗产业化繁育的一种有效途径。多倍体育种是植物新品种培育的重要手段，多倍体育种起源于20世纪初，现在已广泛应用于植物新品种的培育中。多倍体由于基因组倍性的增加，往往表现出形态上的巨大性和抗性增强等特点。其中三倍体还具有不育特点，即可作为永久杂种，也有利于商业保护；通过基因组三倍化，可以获得具有多倍体和杂交种双重优势的三倍体，其优势表现出具有巨大性和不可替代性。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了三倍体芦竹的培育方法，所得的芦竹具有很强的抗逆性。本专利技术提出的三倍体芦竹的培育方法，方法步骤如下：S1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2MS+NAA0.1-0.15mg/L+蔗糖6-8g/L+椰乳5-10g/L+萘乙酸0.05-0.1mg/L+海泡石0.5-1.5g/L+活性炭0.8-2.0g/L；S3：二倍体细胞的融合分化：采用S2所得的原球茎制备原生质体，并进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：MS-6-BA(2-4mg/L)+IBA(0.1-0.3mg/L)+NAA0.1-0.15mg/L+蔗糖6-8g/L+椰乳5-10g/L+2、4-D(1-3mg/L)；S4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；S5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；S6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。优选地，所述S2中光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为10-14h/d，光照强度2000-3000Lux，色温4500-5500k。优选地，所述S2中培养基的pH为5-6。优选地，所述S3中原生质体的制备方法为酶解法。优选地，所述S3中细胞融合的方法为采用细胞融合仪或聚乙醇PEG方法进行融合。优选地，所述S3中四倍体愈伤组织的检测方法为常规染色镜检办法。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术先对二倍体芦竹的原生质体进行细胞融合，然后再用培养基培养成愈伤组织，然后进行诱导分化得到四倍体芦竹幼苗，再把二倍体芦竹作为父本、四倍体芦竹作为母本进行有性杂交，从而获得三倍体芦竹，所得的三倍体芦竹具有很强的抗逆性，且具有多倍体和杂交种的双重优势。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。实施例1本专利技术提出的三倍体芦竹的培育方法，方法步骤如下：S1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为10h/d，光照强度2000Lux，色温4500k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖6g/L+椰乳5g/L+萘乙酸0.05mg/L+海泡石0.5g/L+活性炭0.8g/L，培养基的pH为5；S3：二倍体细胞的融合分化：对S2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇PEG方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：MS-6-BA(2mg/L)+IBA(0.1mg/L)+NAA0.1mg/L+蔗糖6g/L+椰乳5g/L+2、4-D(1mg/L)；S4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；S5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；S6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。实施例2S1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为14h/d，光照强度3000Lux，色温5500k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2MS+NAA0.15mg/L+蔗糖8g/L+椰乳10g/L+萘乙酸0.1mg/L+海泡石1.5g/L+活性炭2.0g/L，培养基的pH为6；S3：二倍体细胞的融合分化：对S2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇PEG方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：MS-6-BA(4mg/L)+IBA(0.3mg/L)+NAA0.15mg/L+蔗糖8g/L+椰乳10g/L+2、4-D(3mg/L)；S4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；S5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；S6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。实施例3S1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，光照培养的条件为：培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内，光照时间为12h/d，光照强度2500Lux，色温5000k，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2MS+NAA0.12mg/L+蔗糖7g/L+椰乳8g/L+萘乙酸0.08mg/L+海泡石1.0g/L+活性炭1.4g/L，培养基的pH为5.5；S3：二倍体细胞的融合分化：对S2所得的原球茎采用酶解法制备原生质体，并通过细胞融合仪或聚乙醇PEG方法进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并通过常规染色镜检办法对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.三倍体芦竹的培育方法，其特征在于，方法步骤如下：S1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2MS+NAA 0.1‑0.15mg/L+蔗糖6‑8g/L+椰乳5‑10g/L+萘乙酸0.05‑0.1mg/L+海泡石0.5‑1.5g/L+活性炭0.8‑2.0g/L；S3：二倍体细胞的融合分化：采用S2所得的原球茎制备原生质体，并进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：MS‑6‑BA(2‑4mg/L)+IBA(0.1‑0.3mg/L)+NAA 0.1‑0.15mg/L+蔗糖6‑8g/L+椰乳5‑10g/L+2、4‑D(1‑3mg/L)；S4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；S5：三倍体芦竹的获取：当四倍体芦竹开花后，以四倍体芦竹为母本，二倍体芦竹为父本，进行有性杂交，杂交后所得的种子即为三倍体芦竹；S6：三倍体芦竹的培育：对三倍体芦竹种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规芦竹进行栽培管理。...

【技术特征摘要】
1.三倍体芦竹的培育方法，其特征在于，方法步骤如下：S1：亲本选择：将抗逆性高、生长快的芦竹作为多倍体培育的源植株亲本；S2：二倍体原球茎的培育：将源植株种子在固体培养基中进行无菌播种，光照培养，最终获得原球茎，所述固体培养基的配方为：1/2MS+NAA0.1-0.15mg/L+蔗糖6-8g/L+椰乳5-10g/L+萘乙酸0.05-0.1mg/L+海泡石0.5-1.5g/L+活性炭0.8-2.0g/L；S3：二倍体细胞的融合分化：采用S2所得的原球茎制备原生质体，并进行细胞融合，获得同源双二倍体细胞，并采用培养基培养成愈伤组织，并对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化，获得四倍体芦竹幼苗，所述愈伤组织培养用培养基的配方为：MS-6-BA(2-4mg/L)+IBA(0.1-0.3mg/L)+NAA0.1-0.15mg/L+蔗糖6-8g/L+椰乳5-10g/L+2、4-D(1-3mg/L)；S4：四倍体幼苗培育：对四倍体幼苗常规炼苗驯化和栽培至开花；S5：三倍体芦...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴军，钟守俊，胡国卿，明照，
申请(专利权)人：武汉博立达农业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42